一种抗甲氧西林耐药的金黄色葡萄球菌的药物组合物的利记博彩app
【技术领域】
[0001] 本发明涉及协同抗甲氧西林耐药的金黄色葡萄球菌（MRSA)感染的药物组合物， 该药物组合物包括抗菌肽Cbf-K 16和选自头孢他啶或氨苄青霉素在内的抗生素。
【背景技术】
[0002] 抗生素自用于细菌性感染的治疗以来，大大延长了人的寿命。然而，随着抗生素的 大量使用，抗生素耐药性问题也日益严重，细菌耐药性的产生速度远远超出了新抗生素的 开发速度。金黄色葡萄球菌是临床感染的主要病原菌之一，可以引起如皮肤软组织感染、 肺炎、菌血症、手术部位及导管相关性感染等，严重危害人类的健康。过去的20年里，MRSA 已成为医院感染的重要病原菌，受到世界范围的广泛关注。MRSA具有多重耐药性，对包括 0-内酰胺类、氨基糖苷类、氟喹诺酮类、四环素类、大环内酯类、林可霉素等多种抗菌药物 耐药。万古霉素是治疗MRSA感染的首选药物，有较强的抗MRSA活性，能够降低其致病力。 然而，近年来在日本和美国等地先后出现了对万古霉素中度耐药（VISA)或耐药（VRSA)的 MRSA，给万古霉素对MRSA的治疗带来了挑战。因此，单一抗生素针对MRSA感染的治疗已经 无法满足临床的需要。
[0003] 头孢他啶、氨苄青霉素为半合成的广谱0-内酰胺类抗生素，主要作用于青霉素 结合蛋白（PBPs)。PBPs是细菌细胞壁肽聚糖生物合成的重要酶，具有催化肽聚糖聚合（转 糖基）和交联（转肽）的作用，在细菌细胞壁的生物合成、细胞分裂和形态维持中发挥重要 作用。这两种抗生素通过抑制PBPs在细菌细胞壁肽聚糖的合成、细胞生长以及维持细胞 形态过程中的作用，导致细菌细胞壁的完整性被破坏，原生质流失，从而达到杀灭细菌的目 的。但是，MRSA对头孢他啶和氨苄青霉素具有一定的耐药性；其耐药机制主要有两种，一是 产生0 -内酰胺酶以降解药物，另一种是产生特异的青霉素结合蛋白PBP2a，取代对0 -内 酰胺抗生素具有高亲和力的PBP2和PBP3的功能。
[0004] 抗菌肽作为一类天然的小分子多肽，因其独特的作用机制及广谱杀菌性，近年来 备受人们的关注。抗菌肽的活性高，对细菌、真菌、病毒和寄生虫等均有抑制作用；而其独 特的作用机制，使得病原体不易对其产生耐药性。因此，抗菌肽有望成为新一代的抗菌药 物。Cbf-K 1^发明人在前期研宄中，将抗菌肽Cathelicidin-BF部分活性氨基酸位点进 行突变，采用固相化学合成法获得的对耐药性病原菌具有高抑制活性的抗菌肽，其具有SEQ ID No : 1所示的氨基酸序列，其分子量为3637. 63Da，全序列为：赖氨酸-苯丙氨酸-苯丙氨 酸-精氨酸-赖氨酸_亮氨酸_赖氨酸_赖氨酸_丝氨酸_缬氨酸_赖氨酸-赖氨酸-精 氨酸-丙氨酸-赖氨酸-赖氨酸-苯丙氨酸-苯丙氨酸-赖氨酸-赖氨酸-脯氨酸-精氨 酸-缬氨酸-异亮氨酸-甘氨酸-缬氨酸-丝氨酸-异亮氨酸-脯氨酸-苯丙氨酸。体外 抗菌活性研宄表明，Cbf-K 16具有一定的杀灭耐药性细菌的作用。该技术记载于本专利发明 人周长林等已申请的中国专利ZL201210171901. 8中。
【发明内容】
[0005] 本发明针对MRSA对传统抗生素敏感性下降，提出一种抗MRSA的药物组合物，能有 效地预防和治疗MRSA引起的感染。
[0006] 本发明公开了一种抗菌肽Cbf-K16与抗生素的复方药物组合物，由药物活性组分 和药学上可接受的载体组成，其中药物活性组分含序列为SEQ ID No :1的多肽（即多肽 Cbf-K16)及选自头孢他啶、氨苄青霉素在内的任一组分，构成复方药物。
[0007] 多肽0^_1(16与选自头孢他啶或氨苄青霉素中的任一组分的重量比可选 8 : 1-1 : 8。优选 4 : 1-1 : 4。更优选 1 : 1-1 : 2。最优选 1 : 1。
[0008] 可通过常规的操作手段，向药物活性组分中直接或间接加入药学上可接受的辅料 制成胶囊剂、颗粒剂、丸剂、散剂、片剂、口服液、糖浆、口崩片、含漱液、细粒剂、粉末、或者注 射剂等剂型供临床应用。
[0009] 下面是本发明的部分抗菌试验及结果：
[0010] 一、抗菌肽Cbf-K16、头孢他啶和氨苄青霉素的药效、优选配比研宄以及协同作用评 价
[0011] ⑴接种物的制备
[0012] 将实验所需菌株从保藏的甘油管中接至营养琼脂斜面，37°C培养16h，接种环挑取 少许接种至2ml营养肉汤培养基，37°C培养8h，用MH肉汤培养基稀释成I X 105CFU/ml左右 的细菌悬液。
[0013] (2)药物的配置
[0014] 称取一定量的Cbf-K16、头孢他啶、氨苄青霉素，溶于无菌的生理盐水中，配制成浓 度为1024 y g/ml的母液，经0. 22 y m滤膜过滤除菌，分装。置于-20°C备用。
[0015] (3)最小抑菌浓度（MIC)的测定
[0016] 将IX IO5CFUAiI左右的细菌悬液接种至96孔板中，每孔100 y 1。然后等体积加 入经MH倍比稀释的药物。使最终药物浓度为256、128、64、32、16、8、4、2、1、0. 5、0. 25yg/ ml。同时设不含药物的空白对照组。37°C培养16-20h。观察结果，记录最低不长菌的药物 浓度，即为最低抑菌浓度。结果见表1。
[0017] 表1抗菌肽Cbf-K16与抗生素对细菌的MIC
[0018]
[0019] 由表1可看出，本发明所选的耐药性细菌临床株对头孢他啶、氨苄青霉素都表现 出较强的耐药性，MIC值均大于64 y g/ml ;而对抗菌肽Cbf-K16相对敏感，MIC值均小于 32 y g/ml〇
[0020] (4) 0^-1(16与抗生素优选配比研宄
[0021] 用无菌MH肉汤培养基将药物原液倍比稀释成含药浓度为1024、512、256、128、64、 32、16、8、4、2μg/ml的药液。根据MIC值，由低到高依次将2种抗菌药物按棋盘法设计， 两两组合加入96孔板中，每种抗菌药物加50 y 1，再取100 y 1菌液加入孔中，置37°C培养 箱中培养16-20h。另设不含药组作为对照。观察抗菌效果，并记录联合的MIC值。通过 计算部分抑菌浓度指数（fractional inhibitory concentration，FIC)判断相互作用。
同、相加、无关、拮抗作用。结果见表2。
[0022] 表2 0^_1(16与抗生素优选配比研宄
[0023]
[0025] 由表2可知，Cbf-^与抗生素联用时，不同的配比对MRSA的活性不同。在 Cbf-K 16与抗生素重量比为8 : 1-1 : 8范围内有协同效果，在Cbf-K16与抗生素重量比为 4 : 1-1 : 4范围内协同效果明显，2 : 1-1 : 2时效果更好，Cbf-K16与抗生素以I : 1配 比时协同效果最高。
[0026] (5)棋盘法测定Cbf-K16与抗生素联用的效果
[0027] 用无菌MH肉汤培养基将药物原液倍比稀释成含药浓度为1024、512、256、128、64、 32、16、8、4、2 y g/ml的药液。根据MIC值，由低到高依次将2种抗菌药物按棋盘法设计，两 两组合（Cbf-K16 :抗生素重量比=I : 1)加入96孔板中，每种抗菌药物加50 yl，再取 100 y 1菌液加入孔中，置37°C培养箱中培养16-20h。另设不含药组作为对照。观察抗菌效 果，计算FIC。结果见表3。
[0028] 表3 Cbf-K16与头孢他啶或氨苄青霉素联用对耐药株的MIC值以及部分抑菌浓度 指数（FIC)
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[0030] 由表3可以看出，Cbf-K16与抗生素联合用药对MRSA显示出较强的协同抗菌活性， FIC指数均< 0. 5。但药物组合物对耐药性革兰阴性细菌大肠埃希菌没有显示出联用活性， FIC指数均> 0. 5。
[0031] 二、抗菌肽Cbf-Klf^抗生素联用的药物组合物对MRSA的杀菌活性
[0032] (1)抗菌肽Cbf-K16与抗生素联用后对MRSA的杀菌曲线的绘制
[0033] 将1/2 XMIC浓度的抗菌肽C