三七在制备预防和/或治疗小胶质细胞介导疾病药物的新用图
【技术领域】
[0001] 本发明涉及三七的新用途，特别是三七提取物的新用途，即在制备预防和/或治 疗抗小胶质细胞介导疾病药物方面的新用途。
【背景技术】
[0002] 小胶质细胞（microglia)的异常激活在多发性硬化等疾病中都发挥重要作用，是 上述疾病病理发展过程中造成神经损伤的主要病因之一。在病理状态下，微环境的微小变 化即可激活小胶质细胞，激活的小胶质细胞可以上调许多神经毒性因子的分泌水平，如一 氧化氮（NO)、活性氧簇（R0S)和类花生酸类（如前列腺素E2)等，从而导致继发性脑损害。 因此，抑制小胶质细胞的过度活化，可以有效防治、多发性硬化等疾病。
[0003] 三七主要成分包括三七皂苷R1、人参皂苷Rgl、人参皂苷Re、人参皂苷Rbl与人参 皂苷Rd。三七具有活血祛瘀，通脉活络的功效，对高脂血症、高粘血症、对高血压有较好的治 疗效果，同时具有抗心肌缺血、抗动脉粥样硬化、抗血栓、抗心脑缺血等作用，临床主要以全 成分制备成制剂。
[0004] 三七对心脑血管疾病具有预防与治疗作用已有广泛的公开；专利申请 CN101116669公开了人参皂苷Rg3、人参皂苷Rh2与人参皂苷III几种组合物在预防放化疗 后引起的白细胞降低的辅助用药；专利申请CN 1305479C公开了人参皂苷Rg5、Rkl、Rg3、 Rh2、Rg5等低极性人参皂苷组合物及其具抗癌活性的特征。
[0005] 其中单体成分人参皂苷Rgl对蛋白质或脂质的生物合成作用与对DNA的生物合成 的作用有大致相同倾向，能减少酰胆碱引起的豚鼠离体子宫的收缩，对大鼠有减慢心率和 双向性血压作用（先升后降），有舒张动物血管和抗疲劳作用。
[0006] 人参皂苷Re能抑制中枢神经，促进DNA，RNA合成；具有升高血浆皮质酮的作用， 扩张血管；能减少乙酰胆碱引起的豚鼠离体子宫的收缩；对大鼠有减慢心率和双相性血压 (先升后降）作用；对猫的行为和脑电图显示中等的抑制；有抗疲劳作用。
[0007] 人参皂苷Rbl对中枢神经系统、心血管系统、消化系统、免疫系统、内分泌系统、泌 尿生殖系统有广泛的作用，从而可提高人体力、智力的活动能力，增强机体对有害刺激的非 特异性抵抗力。
[0008] 人参皂苷 Rd(Ginsenoside Rd，分子量：947. 12,分子式：C48H82018, CAS 号： 52705-93-8)。从五加科植物人参[Panax ginseng C.A.Mey er(P.schinseng Nees)] 或三七[Panax Notoginseng(Burk. )F. H. Chen]等的根、花蕾、叶、芦头、莖或萌芦科 (Cucurbifaceae)绞股蓝[Gynostemma pentaphyllum(Thunb.)Mak.]的叶中提取得到，以 三七含量最为丰富。人参皂苷Rd易溶于水、甲醇、乙醇，不溶于乙醚、苯。文献报道，人参皂 苷Rd具有防治中风（药学学报，2005,40 (12) : 1144-1146)、血栓形成（中国药理学通报， 2005，11 :1400-1401)等心脑血管疾病的作用。
[0009]
[0010] 但目前没有文献报道三七或三七提取物可抑制小胶质细胞相关的免疫毒性，亦没 有报道公开三七或三七提取物能防治肌萎缩性脊髓侧索硬化症、艾滋病相关痴呆、疯牛病 等疾病。
【发明内容】
[0011] 本发明的目的是提供三七在制备预防和/或治疗小胶质细胞介导疾病药物的新 用途；
[0012] 本发明的另一目的是提供三七提取物在制备预防和/或治疗小胶质细胞介导疾 病药物的新用途；
[0013] 本发明的另一目的是提供三七醇提物在制备预防和/或治疗小胶质细胞介导疾 病药物的新用途；
[0014] 本发明的另一目的是提供用于制备预防和/或治疗小胶质细胞介导疾病药物的 三七提取物的制备方法。
[0015] 本发明的目的是通过下列的技术方案实现的：
[0016] 本发明原料来源：三七为五加科植物Panax notoginseng(Burk. )F. H. Chen的干 燥根。
[0017] 发明人在研宄小胶质细胞介导疾病的治疗过程中发现，三七及三七提取物能减少 活化小胶质细胞NO等细胞毒性炎症介质的产生，抑制小胶质细胞激活诱导细胞死亡，从而 为三七及三七提取物应用于活化小胶质细胞介导的神经毒性作用所引起的脑部炎症相关 疾病，如肌萎缩性脊髓侧索硬化症、艾滋病相关痴呆、疯牛病等疾病的防治提供了直接有力 的实验依据和理论基础，既有很强的科学性和创新性，又有很高的开发应用价值。
[0018] 因此，本发明所述小胶质细胞介导疾病包括多发性硬化、肌萎缩性脊髓侧索硬化 症、艾滋病痴呆症、疯牛病。
[0019] 本发明采用独特提取、纯化工艺所得三七提取物，控制提取物中人参皂苷Rd含量 不低于30%，用此三七提取物制备的药物，预防和/或治疗小胶质细胞介导疾病效果更显 著。
[0020] 本发明药物临床应用时，服用量最佳治疗效果为每日剂量以人参皂苷Rd计为 10 ~100mg/kg 体重。
[0021] 本发明还提供三七提取物与医药学上可接受的载体配合制成在制备治疗和/或 预防小胶质细胞介导疾病药物方面的新用途。三七提取物配合医药学上可接受的载体和药 用辅料按照药学领域常规方法制备为口服、注射或粘膜给药，可以制成片剂、胶囊、粉剂、颗 粒、锭剂等剂型。
[0022] 本发明专利临床应用的安全性较高，在治疗小胶质细胞介导疾病的药物治疗中不 失为一种好药，其拓宽了治疗小胶质细胞介导疾病的新方法，同时为患者解决了现有技术 治疗小胶质细胞介导疾病时出现的不良反应。
[0023] 因此，申请人提供三七及三七提取物能够用于治疗小胶质细胞介导疾病药物方面 的新用途。特别是三七醇提物用于治疗小胶质细胞介导疾病药物方面的新用途。
[0024] 本发明还公开了预防和/或治疗小胶质细胞介导疾病药物所用三七提取物的制 备方法，包括以下步骤：
[0025] 1)取三七药材加水或体积百分比浓度为25~96%的乙醇提取，将提取液回收乙 醇，得二七提取液；
[0026] 2)三七提取液脱脂后，经D型大孔树脂纯化后，浓缩，减压干燥，制成干燥品；
[0027] 3)干燥品加体积百分比浓度为95. 0%以上的乙醇溶解，滤去不溶物，然后经过单 分散聚合硅胶层析柱吸附洗脱纯化，用紫外检测器在线检测洗脱液紫外吸光度，检测波长 为203nm，收集主含人参皂苷Rd的洗脱液，回收溶媒并浓缩、减压干燥，即得。
[0028] 优选地，步骤1)中所得三七提取液含固形物5 - 25%。
[0029] 优选地，步骤2)经D型大孔树脂纯化时，用水：95%乙醇按梯度洗脱法洗去除Rd 外的三七三醇苷类成分以及多数三七二醇苷类成分，再单独以70~95%乙醇洗脱以人参 皂苷Rd为主的皂苷类成分，收集洗脱液并脱色后，回收溶媒。
[0030] 优选地，步骤3)滤去不溶物是采用1~50 y m滤膜过滤。
[0031] 优选地，步骤3)经单分散聚合硅胶层析柱吸附后，洗脱纯化是用水：体积百分比 浓度为95. 0 %~99. 9%乙醇按梯度洗脱法洗脱纯化。
[0032] 优选地，紫外检测器在线检测采用的检测波长为203nm。
[0033] 本发明提供的三七、三七提取物用于治疗小胶质细胞介导疾病药物方面的新用途 具有以下优点：
[0034] 1、本发明所用三七及三七提取物为天然中药，安全无毒，可长期服用。在"三七提 取物对小胶质细胞细胞活力的影响"实验中发现：三七提取物对小胶质细胞活力无抑制作 用，不会引起小胶质细胞死亡。
[0035] 2、"三七提取物对激活小鼠小胶质细胞系BV-2产生炎症介质（NO)水平的影响"实 验中发现三七提取物干预能明显抑制LPS引起的NO的释放，实验数据表明三七提取物对激 活的小胶质细胞细胞具有明显的抑制作用。
[0036] 3、本发明所述三七提取物制备方法以D型大孔树脂吸附后，先用水：95%乙醇梯 度洗脱去除Rd外的三七三醇苷类成分以及多数三七二醇苷类成分，再单独以70~95%乙 醇洗脱以人参皂苷Rd为主的皂苷类成分，可以在前期获得人参皂苷Rd较高的洗脱液，再通 过进一步的纯化处理，获得用于治疗小胶质细胞介导疾病有显著效果的三七提取物。
【具体实施方式】
[0037] 下面通过实施例进一步说明本发明。应该理解的是，本发明的实施例是用于说明 本发明而不是对本发明的限制。根据本发明的实质对本发明进行的简单改进都属于本发明 要求保护的范围。除非另有说明，本发明中的乙醇量的百分数是体积百分数，v/v表示溶液 的体积比。
[0038] 实施例1 :三七提取物的制备
[0039] 1)取三七药材加水提取，提取液浓缩成含固形物25%的三七提取液；
[0040] 2)三七提取液脱脂后，经D型大孔树脂纯化，用水：95%乙醇按梯度洗脱法洗去除 Rd外的三七三醇苷类成分以及多数三七二醇苷类成分，再单独以70 %乙醇洗脱以人参皂 苷Rd为主的皂苷类成分，收集洗脱液并脱色后，回收溶媒后，浓缩，减压干燥，制成干燥品；
[0041] 3)干燥品加浓度为95. 0%乙醇溶解，用50 y m滤膜滤去不溶物，然后经过单分散 聚合硅胶层析柱吸附后，用水：浓度为95.0%乙醇梯度洗脱法洗脱纯化，用紫外检测器在 线检测洗脱液紫外吸光度，检测波长为203nm，收集主含人参皂苷Rd的洗脱液，回收溶媒并 浓缩、减压干燥，即得三七提取物。
[0042] 采用HPLC法测定，人参皂苷Rd含量为30 %。
[0043] 实施例2 :三七提取物的制备
[0044] 1)取三七药材加浓度为25%的乙醇提取，将提取液回收乙醇，得含固形物20%的 二七提取液；
[0045] 2)三七提取液脱脂后，经D型大孔树脂纯化，用水：95%乙醇按梯度洗脱法洗去除 Rd外的三七三醇苷类成分以及多数三七二醇苷类成分，再单独以95 %乙醇洗脱以人参皂 苷Rd为主的皂苷类成分，收集洗脱液并脱色后，回收溶媒后，浓缩，减压干燥，制成干燥品；
[0046] 3)干燥品加浓度为96%乙醇溶解，用45 y m滤膜滤去不溶物，然后经过单分散聚 合硅胶层析柱吸附后，用水：浓度为97%乙醇按梯度洗脱法洗脱纯化，用紫外检测器在线 检测洗脱液紫外吸光度，检测波长为203nm，收集主含人参皂苷Rd的洗脱液，回收溶媒并浓 缩、减压干燥，即得。
[0047] 采用HPLC法测定，人参皂苷Rd含量为52%。
[0048] 实施例3 :三七提取物的制备
[0049] 1)取三七药材加浓度为96%乙醇提取，将提取液回收乙醇，得含固形物5%的 二七提取液；
[0050] 2)三七提取液脱脂后，经D型大孔树脂纯化，用水：95%乙醇按梯度洗脱法洗去除 Rd外的三七三醇苷类成分以及多数三七二醇苷类成分，再单独以95 %乙醇液洗脱以人参 皂苷Rd为主的皂苷类成分，收集洗脱液并脱色后，回收溶媒后，浓缩，减压干燥，制成干燥 品；
[0051] 3)干燥品加浓度为98. 0%乙醇溶解，用1 y m滤膜滤去不溶物，然后经过单分散聚 合硅胶层析柱吸附后，用水：浓度为98%乙醇按梯度洗脱法洗脱纯化，用紫外检测器