鞣漆树果α-糖苷酶抑制活性提取物及其组合物的医药用途和制备方法
【技术领域】
[0001] 本发明属医药技术领域，具体涉及一种鞣漆树果a -糖苷酶抑制活性提取物及其 组合物的制备方法以及它在降血糖、减肥、降血脂、治疗糖尿病等方面的医药用途。
【背景技术】
[0002] 親漆树果TPAois coriariar)为漆树科（ylaacart/iaceae)植物親树（7P&/51 coriariaZ.)的果实。为小型核果，扁圆形，直径3-5毫米，表皮棕红色至暗红色，果皮易 破碎，在放大镜下可见短绒毛，核圆扁形或肾形，直径2毫米，光滑坚硬，黄绿色至棕绿色， 脐点位于核的侧面，微凹，长圆形。主治功能：清热解毒，降压安神，用于热病高血压及食欲 不振。
[0003] 本发明通过大规模、系统地活性筛选，意外地发现维吾尔药鞣漆树果提取物及其 部分化学组分，具有显著地a -糖苷酶抑制活性，该活性提取物及其组合物有望应用于降 血糖、减肥、降血脂、糖尿病等方面。
【发明内容】
[0004] 本发明所解决的技术问题是提供一种鞣漆树提取物。
[0005] 本发明还提供了以鞣漆树提取物为主要活性成分的组合物。
[0006] 本发明同时提供了鞣漆树提取物及其组合物的制备和应用。
[0007] 本发明是通过如下技术方案实现的： 维吾尔药鞣漆树果经甲醇超声提取，提取液浓缩后，用硅胶柱分离，上样后的硅胶柱， 用石油醚-丙酮混合溶剂梯度洗脱(石油醚：丙酮，比例见表1)，各石油醚-丙酮比例混合 溶剂洗脱液，浓缩，干燥后，利用体外筛选体系测试其a -糖苷酶抑制活性，意外地发现先 用石油醚-丙酮混合溶剂(石油醚：丙酮，100:8,体积比）洗脱，继用石油醚-丙酮混合溶剂 (石油醚：丙酮，100:12,体积比）洗脱洗脱，石油醚：丙酮100:12洗脱得到的洗脱液经回收 有机溶剂，干燥，即为a-糖苷酶抑制活性提取物。而其他比例的洗脱部位，没有a-糖苷 酶抑制活性的作用。特别地，优选为先用石油醚-丙酮混合溶剂(石油醚：丙酮，1〇〇: 8,体积 比）洗脱10倍柱体积，继用石油醚-丙酮混合溶剂(石油醚：丙酮，100:12,体积比）洗脱20 倍柱体积，洗脱液干燥后所得提取物为a-糖苷酶抑制活性的提取物。a-糖苷酶抑制活性 的提取物可以通过以上方法得到富集，从而与其他杂质类成分分离开。该鞣漆树果a-糖 苷酶抑制活性提取物从未见文献报道，其薄层谱色谱（TLC)分析表征如图1，TLC分析条件 为：GF 254硅胶板，展开系统：石油醚：乙酸乙酯：丙酮= (3:1:1)，显色方法：香草醛-硫酸显 色。
[0008] 维吾尔药鞣漆树果经甲醇超声提取，提取液浓缩后，用硅胶柱分离，上样后的硅胶 柱，用石油醚-丙酮混合溶剂梯度洗脱(石油醚：丙酮，比例见表1)，各石油醚-丙酮比例 混合溶剂洗脱液，浓缩，干燥后，利用体外筛选体系测试其a -糖苷酶抑制活性，意外地发 现先用石油醚-丙酮混合溶剂(石油醚：丙酮，100:20,体积比）洗脱，继用石油醚-丙酮混 合溶剂(石油醚：丙酮，100:100,体积比）洗脱洗脱，石油醚：丙酮100:100洗脱得到的洗脱 液经回收有机溶剂，干燥，即为a-糖苷酶抑制活性提取物。而其他比例的洗脱部位，没有 a-糖苷酶抑制活性的作用。即，具有a-糖苷酶抑制活性的提取物，可以通过以上方法得 到富集，从而与其他杂质类成分分离开。该鞣漆树果a-糖苷酶抑制活性提取物从未见文 献报道，其薄层谱色谱（TLC)分析表征如图2, TLC分析条件为：GF254硅胶板，展开系统：石 油醚：乙酸乙酯：丙酮=(3:1:1)，显色方法：香草醛-硫酸显色。
[0009] 具体，发现过程如下： 1、鞣漆树果经甲醇超声提取物的制备 取维吾尔药鞣漆树果20 g，经100 mL甲醇超声提取15 min，提取液浓缩后，得提取物 3冊0534样品2.8711§，留样0.1436 §，上样量2.7275 §，拌样硅胶3§，空白硅胶15§，石 油醚-丙酮系统洗脱。
[0010] 2、石油醚-丙酮混合溶剂梯度洗脱方法和结果 取维吾尔药鞣漆树果20 g，经100 mL甲醇超声提取15 min，提取液浓缩后，得提取物 SN0053A样品2. 8711 g，留样0. 1436 g，上样量2. 7275 g，甲醇溶解，共用甲醇15 mL。上 硅胶柱色谱，拌样硅胶3 g，空白硅胶15 g，玻璃柱内径2.5 cm，石油醚-丙酮系统梯度洗 脱(条件见表1)，柱体积45 mL，每个梯度洗脱300mL，各个浓度提取洗脱液的洗脱物，回收 溶剂，即得，石油醚-丙酮梯度洗脱提取物，TLC分析结果见图3。
[0011] 表 1
3、抑制a-糖苷酶活性筛选方法和结果 1) 实验条件 a、 材料：DMSO(二甲基亚砜）（科密欧公司）；KH2P04、K2HP04 *31120(广东汕头市西陇化 工厂）；ff-glucosidase酶（美国Sigma公司）；PNPG(美国Sigma公司） b、 实验仪器：多功能酶标仪Bio-RadModel680 型（Bio-RadLaboratoriesInc.) 2) 实验方法和过程 样品处理：将1 mg待测样品溶于20 二甲基亚砜（DMS0)作为母液，取1 母液 加入99儿缓冲盐配成500々g.mr1的样品溶液。
[0012] 在96孔板中依次加入ff-glucosidase酶PBS溶液20 使其终浓度为0. 07u/ mL，样品浓度为500 .mL-1的PBS溶液10 #L。冰浴5分钟，加入底物PBS溶液20 使其终浓度为2. 5mmol/1，用浓度为0. 1M、pH 6. 84的PBS溶液补足体积为100 #L。加 过样的96孔板在37°C水浴30分钟。于405nm处测定反应物的吸光度，并以阿卡波糖作 为阳性对照。样品抑制c-glucosidase酶活性比率用加样品较空白对照的直的比值来 表示。样品抑制百分率按以下公式计算： 酶活性抑制率％=[A空白_(A样品-A背景）]/A空白X100 式中Aee :不加样品反应后的吸收值； :加入样品反应后的吸收值； :只加样品的吸收值。
[0013] 3)实验结果 表2
结果发现： 本发明的最优方案为：维吾尔药鞣漆树果经甲醇超声提取，提取液浓缩后，用硅胶柱分 离，上样后的硅胶柱，用石油醚-丙酮混合溶剂梯度洗脱（石油醚：丙酮，比例见表1)，各石 油醚-丙酮比例混合溶剂洗脱液，浓缩，干燥后，利用体外筛选体系测试其a -糖苷酶抑制 活性，意外地发现先用石油醚-丙酮混合溶剂（石油醚：丙酮，1〇〇: 8,体积比）洗脱，继用石 油醚-丙酮混合溶剂（石油醚：丙酮，100:12,体积比）洗脱洗脱，石油醚：丙酮100:12洗脱 得到的洗脱液经回收有机溶剂，干燥，即为a-糖苷酶抑制活性提取物。该鞣漆树果a-糖 苷酶抑制活性提取物从未见文献报道，其薄层谱色谱（TLC)分析表征如图1。
[0014] 维吾尔药鞣漆树果经甲醇超声提取，提取液浓缩后，用硅胶柱分离，上样后的硅胶 柱，用石油醚-丙酮混合溶剂梯度洗脱(石油醚：丙酮，比例见表1 )，各石油醚-丙酮比例混 合溶剂洗脱液，浓缩，干燥后，利用体外筛选体系测试其a -糖苷酶抑制活性，意外地发现 先用石油醚-丙酮混合溶剂(石油醚：丙酮，100:20,体积比）洗脱，继用石油醚-丙酮混合 溶剂(石油醚：丙酮，100:100,体积比）洗脱洗脱，石油醚：丙酮100:100洗脱得到的洗脱液 经回收有机溶剂，干燥，即为a-糖苷酶抑制活性提取物。该鞣漆树果a-糖苷酶抑制活性 提取物从未见文献报道，其薄层谱色谱（TLC)分析表征如图2。
[0015] 4、a -糖苷酶抑制活性活性提取物的提取方法研宄 1)提取溶剂的种类研宄 分别用甲醇、丙酮、石油醚、氯仿、乙酸乙酯、甲醇水混合溶剂、乙醇水混合溶剂等有机 溶剂提取，并测试提取物的a-糖苷酶抑制活性，实验结果如下： 表3
研宄结果表明：提取用有机溶剂可以为甲醇、石油醚、丙酮、氯仿、乙酸乙酯、甲醇水混 合溶剂、乙醇水混合溶剂。
[0016] 2)提取溶剂的用量研宄 分别用1、2、5、10、20、30、40、50倍(重量/体积比）有机