地肤子皂苷Ic在制备治疗前列腺癌药物中的应用
【技术领域】
[0001]本发明涉及医药领域，更具体的讲，涉及地肤子皂苷Ic在制备治疗前列腺癌药物中的应用。
【背景技术】
[0002]2012年我国肿瘤登记地区前列腺癌发病率为9.92/10万，列男性恶性肿瘤发病率的第6位。发病年龄在55岁前处于较低水平，55岁后逐渐升高，发病率随着年龄的增长而增长，高峰年龄是70?80岁。尽管早期化疗或者前列腺根除在大多数病人中都有效，但对于一些最终发展成致命的激素抵抗性的疾病的病人，仅仅限于用多烯紫杉醇化疗，尽管如此，这些病人的生命只有少数几个月。因此，揭示前列腺癌发生和发展的机制对前列腺癌的治疗干预起着重要的作用，在此基础上找到更有效的化疗药物挽救更多人的生命。
[0003]SUMO(小泛素样修饰物)可与很多蛋白结合起修饰作用，从而调节细胞的多种功能；这是一种动态、可逆的过程，在SENPs (SUM0特异性蛋白酶)的作用下，将靶蛋白上的SUMO切下，实现蛋白功能的动态变化。目前已知共有SENP1-7，其中SENPl是一种细胞核内的SUMO蛋白酶，已有文献报道SENPl通过使组蛋白乙酰化酶IdeSUMOylat1n调节雄激素受体活性，并通过使P300deSUM0ylat1n调节c-Jun的活性。
[0004]在前列腺癌中SENPl高表达，高表达的SENPl与前列腺恶化关系密切。SENPl在调节雄激素受体依赖的转录和低氧信号通路中发挥重要作用。SENPl通过使转录共调节因子HDACl去SUMO化，增强雄激素受体依赖的转录，通过正反馈作用，雄性激素又进一步促进SENPl基因的转录。肿瘤细胞生长迅速，处于低氧的微环境中，肿瘤的能量代谢及转移依赖于低氧诱导因子HIF-1a。有报道，在低氧条件下HIF-1 a进入核内发生SUMOylat1n，然后与VHL结合，通过蛋白酶体途径降解，但是在核内SENPl使HIF-1 α去SUMO化调节它的活性和稳定性，未修饰的HIF-1 α逃避VHL/蛋白酶体途径的降解，从而调节下游基因如VEGF的表达，因此，SENPl在低氧条件下调节HIF-1 α的稳定性发挥重要作用。
[0005]综上所述，SENPl在前列腺癌的发生，发展及转移中都起着重要的作用。SENPl是一个潜在的治疗前列腺癌的靶标。寻找SENPl小分子抑制剂，将其用于前列腺癌治疗，这对于前列腺癌化疗药物的进一步优化具有重要的意义。
[0006]Kochia scoparia (L.) Schard.的干燥果实(日本名叫 Chifusi ;中文名叫地肤子)在上古时代中国最古老的医书《神农本草经》中有记载，在古代中国和日本的医学中用于滋补、利尿、止痛以及治疗皮肤瘙痒症。地肤子皂苷Ic (oleanolicacid-3-O-β-D~xy1pyranose(I 一 3) β-D-Pyranoid glucose)是从 Kochiascoparia (L.) Schard.的干燥果实中提取的三酿阜苷类物质，地肤子在中国很多地区有广泛的种植，在中医中有用来治疗前列腺炎的历史。有报道，地肤子皂苷Ic能够抑制酒精引起的胃黏膜损伤，阻止葡萄糖引起的大鼠的血糖增高，促进胃肠转移，以及通过增强肝的抗氧化作用降低四氯化碳引起的肝损伤。也有文献报道地肤子皂苷Ic通过使肝癌细胞凋亡而达到抗肝癌的作用。但是地肤子皂苷Ic在前列腺癌中的作用还未见报道。
【发明内容】
[0007]本发明的第一个目的在于提供地肤子皂苷Ic在制备SENPl小分子抑制剂中的应用。
[0008]本发明的第二个目的在于提供地肤子皂苷Ic在制备治疗前列腺癌药物中的应用。
[0009]为实现以上第一个目的，本发明公开以下技术方案:地肤子皂苷Ic在制备SENPl小分子抑制剂中的应用。
[0010]为实现本发明第二个目的，本发明公开以下技术方案:地肤子皂苷Ic在制备治疗前列腺癌药物中的应用。
[0011]本发明的优点在于:活性地肤子皂苷Ic是一种天然存在的化合物，且地肤子在中国很多地区有广泛的种植。寻找SENPl小分子抑制剂，将其用于前列腺癌治疗，这对于前列腺癌化疗药物的进一步优化具有重要的意义。本发明第一次报道地肤子皂苷Ic对前列腺癌细胞增殖抑制作用的机制，为该化合物应用于临床提供理论基础。
【附图说明】
[0012]图1为地肤子皂苷Ic的化学结构。
[0013]图2为体外SENPl抑制剂地肤子皂苷Ic对SENPlC (SENP1 catalytic domain)抑制测试及浓度梯度和IC50计算。
[0014]图3为SENPl抑制剂地肤子皂苷Ic对外源转染的全长SENPl的抑制作用。RGS-SENPI与Flag-SUM02共转染至HEK293T细胞，24小时后分别加入DMSO和6.25，12.5，25 μ M地肤子皂苷Ic。地肤子皂苷Ic抑制了 SENPl的活性，使SUMO的底物得到累积。
[0015]图4为SENPl抑制地肤子皂苷Ic对内源SENPl的抑制作用。分别用DMS0，6.25，12.5和25 μ M的地肤子皂苷IC处理Flag-SUMOl，Flag-SUM02和Flag_SUM03稳定表达的PC3细胞株，western blot结果显示SUM01，SUM02和SUM03的底物都得到了累积。
[0016]图5为SENPl抑制剂能改变细胞内SENPl的热稳定性。100 μ M的地肤子皂苷Ic与PC3-3flag-senpl细胞的裂解液共孵育30min，不同的温度梯度处理3min，DMSO作为对照。不同浓度的地肤子皂苷Ic与PC3-3flag-senpl细胞的裂解液共孵育30min，60°C处理3min，DMSO作为对照。
[0017]图6为SENPl抑制剂对前列腺癌细胞的增值抑制图。PC3细胞种至96孔板中，分别用不同浓度的地肤子皂苷Ic处理细胞。每孔中加入10 μ I的CCK-8试剂，并培养箱再培养2小时，测450nm的吸光值，并计算IC50为25.07 μ Μ。
[0018]图7为SENPl抑制剂对HRE-1uc的抑制作用。稳转了 PGL4.27-HRE-Luc的PC3细胞种24孔板，分别用不同浓度的地肤子皂苷Ic处理，每个浓度设3复孔，放低氧培养箱培养18h，结果显示随着地肤子皂苷Ic浓度的增高，Iuc值降低。
【具体实施方式】
[0019]下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件，或按照制造厂商