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【技术领域】
[0001] 本发明涉及治疗哺乳动物癌症的方法以及用于该治疗的组合。特定地，所述方法 涉及含有以下的新组合：B-Raf抑制剂，特别是N- {3- [5- (2-氨基-4-嘧啶基）-2- (1，1-二 甲基乙基）-1，3-噻唑-4-基]-2-氟苯基} -2, 6-二氟苯磺酰胺或其药学上可接受盐，和/ 或MEK抑制剂N- {3-[3-环丙基-5- (2-氟-4-碘-苯基氨基）6, 8-二甲基-2, 4, 7-三氧 代-3, 4, 6, 7-四氢-2H-吡啶并[4, 3-d]嘧啶-1-基]苯基}乙酰胺或其药学上可接受盐 或溶剂化物，以及EGFR抑制剂，适宜为西妥昔单抗（爱必妥）或埃罗替尼；含有其的药物组 合物，和使用该组合及组合物治疗其中对MEK和/或B-Raf和/或EGFR的抑制是有益的病 症，如癌症的方法。
【背景技术】
[0002] 有效治疗包括癌症在内的过度增殖性疾病是肿瘤学领域持续奋斗的目标。一般， 癌症由控制细胞分裂、分化和凋亡性细胞死亡的正常过程失调导致，且表征为恶性细胞增 殖，所述恶性细胞具有无限生长、局部扩散和全身转移的潜能。正常过程失调包括信号转导 通路异常和响应不同于正常细胞中所见的因子。
[0003] -个大的重要酶家族是蛋白激酶家族。目前，有约500种不同的已知蛋白激酶。 通过转移ATP-Mg 2+复合物的Y -磷酸到氨基酸侧链，蛋白激酶用于催化多种蛋白中所述氨 基酸侧链的磷酸化。这些酶控制细胞内大部分的信号传递过程，从而通过蛋白中丝氨酸、苏 氨酸和酪氨酸残基的羟基可逆磷酸化来调节细胞功能、生长、分化和消亡（凋亡）。研宄显 示蛋白激酶是许多细胞功能的关键调节物，所述细胞功能包括信号转导、转录调节、细胞运 动和细胞分裂。一些致癌基因还显示编码蛋白激酶，表明激酶在癌形成中起作用。这些过 程通常受到复杂的交错通路高度控制，其中各激酶本身由一种或多种激酶调节。因此，异常 或不合适的蛋白激酶活性能引起与这种异常激酶活性相关的疾病状态上升（包括良性和 恶性增殖性疾病）以及免疫和神经系统不恰当活化导致的疾病。由于蛋白激酶的生理相关 性、多样性和普遍性，其成为生化和医学研宄中最重要及最广泛研宄的酶家族之一。
[0004] 根据其磷酸化的氨基酸残基，酶的蛋白激酶家族通常分成2个主要亚家族：蛋白 酪氨酸激酶和蛋白丝氨酸/苏氨酸激酶。蛋白丝氨酸/苏氨酸激酶（PSTK)包括环AMP-和 环GMP-依赖性蛋白激酶、钙和磷酯依赖性蛋白激酶、钙和钙调蛋白依赖性蛋白激酶、酪蛋 白激酶、细胞分裂周期蛋白激酶等。这些激酶通常是胞质的或可能是通过锚定蛋白与细胞 微粒部分相关。异常蛋白丝氨酸/苏氨酸激酶活性参与或疑似参与一些病状如类风湿性关 节炎、牛皮癣、败血性休克、骨质流失、许多癌症和其它增殖性疾病。因此，丝氨酸/苏氨酸 激酶和其作为一部分的信号转导通路是药物设计的重要靶标。酪氨酸激酶使酪氨酸残基 磷酸化。酪氨酸激酶在细胞调节中起同等重要的作用。这些激酶包括用于分子如生长因子 和激素的数种受体，包括表皮生长因子受体、胰岛素受体、血小板来源的生长因子受体等。 研宄表明许多酪氨酸激酶是跨膜蛋白，其受体结构域位于细胞外侧且其激酶结构域位于内 侦k还进行了许多研宄以鉴定酪氨酸激酶的调节物。
[0005] 受体酪氨酸激酶（RTK)催化多种蛋白（包括自身）中某些酪氨酰氨基酸残基的磷 酸化，其控制细胞生长、增殖和分化。
[0006] 一些RTK下游是数种信号通路，其中包括Ras-Raf-MEK-ERK激酶通路。应理解Ras GTP酶蛋白响应生长因子、激素、细胞因子等而活化会刺激Raf激酶的磷酸化和活化。这些 激酶随后使胞内蛋白激酶MEKl和MEK2磷酸化及活化，进而使其它蛋白激酶ERKl和2磷酸 化及活化。此信号通路也称为丝裂原活化蛋白激酶（MPK)通路或胞质级联，介导针对生长 信号的细胞反应。其最终功能是连接细胞膜处的受体活性与控制细胞增殖、分化和存活的 胞质或核祀标修饰。
[0007] 该通路的组成型活化足以诱导细胞转化。归因于异常受体酪氨酸激酶活化，Ras突 变或Raf突变的MP激酶通路的失调活化在人类癌症中常见，且代表决定异常生长控制的 主要因子。人类恶性肿瘤中，Ras突变常见，已在约30%癌中得到鉴定。GTP酶蛋白的Ras 家族（将鸟苷三磷酸转化成鸟苷二磷酸的蛋白）从活化的生长因子受体传递信号到下游胞 内伴侣。活性膜结合Ras召集的靶标中主要是丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶的Raf家族。所述 Raf家族由充当Ras下游效应物的三个相关激酶（A-、B-和C-Raf)构成。Ras-介导的Raf 活化进而引发MEKl和MEK2 (MAP/ERK激酶1和2)活化，依次在酪氨酸-185和苏氨酸-183 上磷酸化ERKl和ERK2 (胞外信号调节的激酶1和2)。活化的ERKl和ERK2转位并积聚于 核内，在该处其能磷酸化多种底物，包括控制细胞生长和存活的转录因子。考虑到Ras/Raf/ MEK/ERK通路在人类癌症发展中的重要性，所述信号级联的激酶组分被归并为潜在重要靶 标以调节癌症和其它增殖性疾病中的疾病进展。
[0008] MEKl和MEK2是较大的双特异性激酶（MEK1-7)家族成员，其使多种MAP激酶的苏 氨酸和酪氨酸残基磷酸化。MEKl和MEK2由不同基因编码，但在C末端催化激酶结构域和大 部分N末端调控区内都共有高同源性（80%)。人类癌症中未发现MEKl和MEK2的致癌形 式，但显示MEK的组成型活化导致细胞转化。除了 Raf，MEK还能由其它致癌基因活化。迄 今为止已知的MEKl和MEK2底物仅为ERKl和ERK2。除了磷酸化酪氨酸和苏氨酸残基二者 的独特能力外，所述不寻常的底物特异性使MEKl和MEK2位于信号转导级联中的关键点，这 能整合许多胞外信号到MPK通路中。
[0009] 因此，已认识到MAPK激酶通路的蛋白（如MEK)抑制剂应具有抗增殖、促凋亡和抗 侵袭剂的价值以用于增殖性或侵袭性疾病的遏制和/或治疗。
[0010] 此外，还已知具有MEK抑制活性的化合物有效诱导ERK1/2活性的抑制和细胞增殖 的抑制（The Journal of Biological Chemistry, 276 卷，第 4 期 2686-2692 页，2001)，预 期所述化合物对不需要的细胞增殖所导致疾病如肿瘤发生和/或癌症显示效果。
[0011] 已鉴定多种Ras GTP酶和B-Raf激酶中的突变，所述突变能导致MAPK通 路的持续和组成型活化，最终引起细胞分裂和存活增加。由此，这些突变与许 多不同人类癌症的建立、发展和进展密切相关。Raf激酶，特别是B-Raf在信号 转导中的生物学作用描述于 Davies，H.，等.，似1：1^6(2002)9:1-6;6&11161:1:，]\1 J. Marais, R. , Cancer Cell (2004) 6: 313-319 ；Zebisch, A. &Troppmair, J. , Cell. Mol. Life Sci. (2006) 63:1314-1330 ；Midgley, R. S. &Kerr, D. J. , Cr it. Rev. Onc/Hematol. (2002) 44:109-120 ;Smith, R.A?，等?，Curr.Top.Med.Chem. (2006)6:1071-1089 ;和 Downward, J.，Nat. Rev. Cancer (2003) 3:11-22 〇
[0012] 激活MPK通路信号传递的B-Raf?激酶的天然产生的突变在较大比例的人类黑素 瘤（Davies (2002)同上）和甲状腺癌（Cohen 等 J. Nat. Cancer Inst. (2003)95(8)625-627 和Kimura等Cancer Res. (2003)63(7) 1454-1457)中被发现，以及在下列疾病中以较低但 仍显著的频率出现：
[0013]Barrett 食管腺癌（Garnett 等?，Cancer Cell (2004) 6313-319 和 So_erer 等 Oncogene (2004) 23 (2) 554-558)、胆道癌（Zebisch 等.，Cell.Mol. Life Sci. (2006)631314-1330)、乳腺癌（Davies (2002)同上）、宫颈癌（Moreno-Bueno 等 Clin. Cancer Res. (2006) 12(12)3865-3866)、肝外胆管癌（Tannapfel 等 Gut (2003) 52 (5) 706-712)、 中枢神经系统肿瘤，包括原发性CNS肿瘤如成胶质细胞瘤、星形细胞瘤和室管膜瘤 (Knobbe 等 Acta Neuropathol. (Berl. )(2004) 108 (6) 467-470, Davies (2002)同上， 和Garnett等.，Cancer Cell (2004)同上）以及继发性CNS肿瘤（即起始于中枢神 经系统之外的肿瘤转移到中枢神经系统）、包括大肠结肠癌在内的结直肠癌（Yuen等 Cancer Res.(2002) 62 (22) 6451-6455, Davies (2002)同上和 Zebisch 等.，〇611.]?〇1. Life Sci. (2006))、胃癌（Lee 等 Oncogene (2003) 22 (44) 6942-6945)、包括头颈部鳞状 细胞癌在内的头颈癌（Cohen 等 J. Nat. Cancer Inst. (2003)95(8)625-627 和 Weber 等 Oncogene (2003) 22 (30) 4757-4759)、血液癌，包括白血病（Garnett 等?，Cancer Cell (2004)同上），特别是急性成淋巴细胞性白血病（Garnett等.，Cancer Cell (2004) 同上和 Gustafsson 等 Leukemia (2005) 19 (2) 310-312)、急性骨髓性白血病（AML) (Lee 等 Le