用于制备治疗性纳米颗粒的方法
【专利说明】用于制备治疗性纳米颗粒的方法
[0001] 相关申请的交叉引用
[0002] 本申请要求2012年9月17日提交的美国临时专利申请61/702, 037的权益和优 先权，其特此通过引用整体并入。
【背景技术】
[0003] 长期以来，已经公认将某些药物递送至患者（例如，靶向特定的组织或细胞类型 或靶向具体的疾病组织而非正常组织）的系统或控制药物释放的系统是有益的。
[0004] 例如，包含活性药物和那些例如靶向特定的组织或细胞类型或靶向特异性的疾病 组织而非正常组织的治疗剂，可以减少药物在身体非靶向组织中的量。当治疗诸如癌症 (其中希望细胞毒剂量的药物递送至癌细胞而不杀死周围的癌性组织）的病症时，这是特 别重要的。有效的药物靶向作用可以减少在抗癌治疗中常见的不希望的和有时威胁生命的 副作用。此外，这样的治疗剂可以允许药物到达某些它们以其它方式不能到达的组织。
[0005] 提供控制释放和/或靶向疗法的治疗剂也必须能够递送有效量的药物，所述药物 在其它纳米颗粒递送系统中是公知的限制。例如，它可以解决下述问题：制备纳米颗粒系统 (含有适当量的药物相关的各纳米颗粒），同时保持所述纳米颗粒的尺寸足够小，从而具有 有利的递送特性。希望用高量的治疗剂装载纳米颗粒，而使用过高的药物负荷（drug load) 的纳米颗粒制剂将产生对实际治疗应用而言过大的纳米颗粒。
[0006] 相应地，存在对纳米颗粒治疗剂和制备所述纳米颗粒的方法的需求，其能够递送 治疗水平的药物以治疗疾病诸如癌症，同时也减少患者的副作用。
【发明内容】
[0007] 本文描述了用于制备治疗性纳米颗粒的方法，其中所述方法包括将治疗剂与有机 酸组合。
[0008] 在一个方面，提供了制备多个治疗性纳米颗粒的方法。所述方法包括将治疗剂、第 一聚合物和有机酸与有机溶剂组合以形成具有约1至约50%固体的第一有机相，将所述第 一有机相与第一水溶液组合以形成所述多个治疗性纳米颗粒，和通过过滤来回收所述治疗 性纳米颗粒。
[0009] 在某些实施方案中，所述有机酸可以具有在25°C小于约3. 5的pKa。在其它实施方 案中，所述有机酸可以具有在25°C小于约2. 0的pKa。在其它实施方案中，所述有机酸可以 具有在25°C小于约1的pKa。在其它实施方案中，所述有机酸可以具有在25°C小于约0的 pKa〇
[0010] 在某些情况下，所述有机酸可以具有约50°c至约110°C的沸点。在某些实施方案 中，所述有机酸可以具有约-30°C至约0°C的熔点。
[0011] 在某些情况下，所述治疗性纳米颗粒可以包含约〇. 2至约35重量％的治疗剂。在 其它情况下，所述治疗性纳米颗粒可以包含约1至约10重量％的治疗剂。
[0012] 在某些实施方案中，所述方法可以是第一种方法，且所述治疗性纳米颗粒可以具 有与通过第二种方法制备的治疗性纳米颗粒相比高至少约2倍的治疗剂负荷，其中除了所 述第二种方法不包括所述有机酸以外，所述第二种方法与所述第一种方法相同。在某些情 况下，所述治疗性纳米颗粒可以具有高至少约5倍的治疗剂负荷。在其它情况下，所述治疗 性纳米颗粒可以具有高至少约10倍的治疗剂负荷。
[0013] 在某些情况下，与由所述治疗剂和所述有机溶剂组成的第二溶液相比，所述治疗 剂在由所述治疗剂、所述有机溶剂和所述有机酸组成的第一溶液中可以具有高至少5倍的 溶解度。在其它情况下，与由所述治疗剂和所述有机溶剂组成的第二溶液相比，所述治疗剂 在由所述治疗剂、所述有机溶剂和所述有机酸组成的第一溶液中可以具有高约2至约20倍 的溶解度。在某些实施方案中，所述有机酸的浓度可以是至少约1重量％、至少约2重量％ 或至少约3重量％。在其它实施方案中，所述有机酸的浓度可以是约1至约10重量％。
[0014] 在某些实施方案中，所述有机酸可以是卤代羧酸。例如，所述卤代羧酸可以是三氟 乙酸。
[0015] 在某些情况下，当置于在37°C的磷酸盐缓冲溶液中时，所述治疗性纳米颗粒可以 基本上立即释放小于约5%的治疗剂。在其它情况下，当置于在37°C的磷酸盐缓冲溶液中 时，所述治疗性纳米颗粒可以在约1小时释放约〇. 01至约25%的治疗剂。在其它情况下， 当置于在37°C的磷酸盐缓冲溶液中时，所述治疗性纳米颗粒可以在约4小时释放约10至约 45 %的治疗剂。
[0016] 在某些实施方案中，所述治疗性纳米颗粒可以具有约60nm至约150nm、约80nm至 约150nm、或约90nm至约140nm的直径。
[0017] 在某些情况下，将所述第一有机相与所述第一水溶液组合可以包括乳化通过将所 述第一有机相与所述第一水溶液组合而形成的第二相，以形成乳相。
[0018] 在某些实施方案中，所述方法进一步包括淬灭所述乳相以形成淬灭相。例如，所述 方法可以进一步包括将药物增溶剂加入所述淬灭相中以形成未包封的治疗剂的增溶相。
[0019] 在某些情况下，乳化所述第二相可以包括乳化所述第二相以形成粗乳状液，和乳 化所述粗乳状液以形成细乳相。
[0020] 在某些实施方案中，所述有机溶剂可以包含选自以下的溶剂：乙酸乙酯、苯甲醇、 二氯甲烷、氯仿、甲苯、甲基乙基酮、二甲基甲酰胺、二甲亚砜、丙酮、乙腈、乙酸、吐温80和 司盘80,和其中的2种或更多种的组合。
[0021] 在某些实施方案中，所述水溶液可以包含选自以下的试剂：胆酸钠、乙酸乙酯、苯 甲醇或它们的组合。
[0022] 在某些实施方案中，乳化所述第二相可以包括，使用转子-定子式匀浆器、探头 超声破碎器（probe sonicator)、搅拌棒或高压勾衆器。在某些情况下，乳化所述粗乳状 液可以包括使用高压匀浆器。在某些实施方案中，乳化所述粗乳状液可以包括穿过匀浆 器约2至约3次。在某些情况下，匀浆器进料压力可以是每个相互作用腔室约2000至约 8000psi。在某些情况下，所述勾衆器可以包含多个相互作用腔室（multiple interaction chamber)〇
[0023] 在某些实施方案中，淬灭可以至少部分地在约5°C或更低的温度进行。在其它实施 方案中，淬灭可以在约〇°C至约5 °C进行。
[0024] 在某些情况下，所述淬灭液：乳液比率可以是约2:1至约40:1或约5:1至约15:1。
[0025] 在某些实施方案中，所述药物增溶剂可以选自吐温80、吐温20、聚乙烯吡咯烷酮、 环葡聚糖（cyclodextran)、十二烷基硫酸钠和胆酸钠。在其它实施方案中，所述药物增溶剂 可以选自二乙基亚硝胺、醋酸钠、脲、甘油、丙二醇、糖原质、聚乙二醇、三（聚氧乙烯二醇） 十二烷基醚（bris(polyoxyethyleneglycolddodecyl ether)、苯甲酸钠和水杨酸钠。在某 些实施方案中，药物增溶剂与治疗剂的比率可以是约200:1至约10:1。
[0026] 在某些情况下，过滤可以包括切向流过滤。在某些实施方案中，过滤可以包括约 (TC至约5°C的第一温度过滤。在某些情况下，过滤可以进一步包括约20°C至约30°C的第二 温度过滤。在某些实施方案中，过滤可以包括，在约〇°C至约5°C处理约1至约30个透析体 积（diavolume)和在约20°C至约30°C处理至少一个透析体积。在另一个实施例中，过滤可 以包括在约〇°C至约5°C处理约1至约30个透析体积和在约20°C至约30°C处理约1至约 15个透析体积。在某些情况下，过滤可以包括在不同的特殊温度处理不同透析体积。
[0027] 在某些实施方案中，所述方法可以进一步包括在过滤之前纯化所述增溶相以基本 上除去所述有机溶剂、未包封的治疗剂和/或药物增溶剂。
[0028] 在某些情况下，过滤可以包括无菌过滤。例如，所述无菌过滤可以包括使用过滤串 (filtration train)以受控的速率过滤治疗性纳米颗粒。在某些情况下，所述过滤串可以 包含深层过滤器（depth filter)和无菌过滤器。
[0029] 在某些实施方案中，所述第一聚合物可以是二嵌段聚乳酸-聚乙二醇共聚物。在 其它实施方案中，所述第一聚合物可以是二嵌段聚乳酸-共聚-聚乙醇酸-聚乙二醇共聚 物(poly(lactic)-c〇-poly (glycolic)acid-poly (ethylene)glycol copolymer)。在某 些情况下，所述方法进一步包括将第二聚合物与所述有机溶剂组合，其中所述第二聚合物 是用靶向配体官能化的聚乳酸-聚乙二醇共聚物。在某些情况下，所述方法进一步包括将 第二聚合物与所述有机溶剂组合，其中所述第二聚合物是用靶向配体官能化的聚乳酸-共 聚-聚乙醇酸-聚乙二醇共聚物。在某些实施方案中，所述靶向配体可以与所述聚乙二醇 共价地结合。
[0030] 在某些实施方案中，所述有机酸包含2种或更多种有机酸的混合物。例如，在某些 实施方案中，所述有机酸包含2种有机酸的混合物、3种有机酸的混合物、4种有机酸的混合 物或5种有机酸的混合物。
[0031] 在另一个方面，提供了制备多个治疗性纳米颗粒的方法。所述方法包括将治疗剂、 第一聚合物和有机酸与有机溶剂组合以形成具有约1至约50%固体的第一有机相，将所述 第一有机相与第一水溶液组合以形成第二相，乳化所述第二相以形成乳相，淬灭所述乳相 以形成淬灭相，和过滤所述增溶相以回收所述治疗性纳米颗粒。
[0032] 在另一个方面，提供了治疗性纳米颗粒。所述治疗性纳米颗粒如下制备：乳化包含 第一聚合物、治疗剂和有机酸的第一有机相从而形成乳相，淬灭所述乳相从而形成淬灭相， 和过滤所述淬灭相以回收所述治疗性纳米颗粒。
[0033] 在另一个方面，提供了治疗性纳米颗粒。所述治疗性纳米颗粒包含约0. 2至约35 重量％的Bcr-Abl酪氨酸-激酶抑制剂和约50至约99. 8重量％的二嵌段聚乳酸-聚乙二 醇共聚物或二嵌段聚乳酸-共聚-聚乙醇酸-聚乙二醇共聚物，其中所述治疗性纳米颗粒 包含约10至约30重量％的聚乙二醇。
[0034] 在某些实施方案中，所述治疗性纳米颗粒可以进一步包含具有在25°C小于约3. 5 的有机酸。在另一个实施方案中，所述有机酸可以具有在25 °C约-1至约2的pK a。 [0035] 在某些情况下，所述有机酸可以是三氟乙酸。
[0036] 在某些实施方案中，所述治疗性纳米颗粒的流体动力学直径可以是约60至约 150nm。在另一个实施方案中，所述治疗性纳米颗粒的流体动力学直径可以是约90至约 140nm〇
[0037] 在某些情况下，所述治疗性纳米颗粒可以包含约1至约10重量％的Bcr-Abl酪 氨酸-激酶抑制剂。在其它情况下，所述治疗性纳米颗粒可以包含约2至约5重量％的 Bcr-Abl酪氨酸-激酶抑制剂。
[0038] 在某些实施方案中，当置于在37°C的磷酸盐缓冲溶液中时，所述治疗性纳米颗粒 可以基本上保留Bcr-Abl酪氨酸-激酶抑制剂至少1分钟。在其它实施方案中，当置于 在37°C的磷酸盐缓冲溶液中时，所述治疗性纳米颗粒可以基本上立即释放小于约5%的 Bcr-Abl酪氨酸-激酶抑制剂。在其它实施方案中，当置于在37°C的磷酸盐缓冲溶液中时， 所述治疗性纳米颗粒可以在约1小时释放约〇. 01至约25%的Bcr-Abl酪氨酸-激酶抑制 剂。在其它实施方案中，当置于在37°C的磷酸盐缓冲溶液中时，所述治疗性纳米颗粒可以在 约4小时释放约10至约45%的Bcr-Abl酪氨酸-激酶抑制剂。
[0039] 在某些情况下，所述Bcr-Abl酪氨酸-激酶抑制剂可以是达沙替尼或其药学上可 接受的盐。在其它情况下，所述Bcr-Abl酪氨酸-激酶抑制剂可以选自伊马替尼、尼洛替尼、 达沙替尼、波舒替尼、普纳