一种灯盏花素内相凝胶化多囊脂质体冻干粉及其制备方法
【技术领域】
[0001]本发明属于缓控释制剂领域，特别涉及一种灯盏花素内相凝胶化多囊脂质体冻干粉及其制备方法。
【背景技术】
[0002]灯盏花素是从灯盏花中提取的黄酮类有效成分，主要成分为灯盏乙素、少量灯盏甲素及其他黄酮苷类成分，系治疗心脑血管、心绞痛等系列疾病的有效药物，在临床上主要治疗脑血栓、脑梗塞、中风后瘫痪、冠心病、心绞痛等疾病，疗效确切。灯盏花素中主要成分灯盏乙素水溶性差，口服生物利用度较低，据报道，Beagle犬随机口服灯盏乙素，口服绝对生物利用度仅(0.40±0.19) %，几乎不吸收。灯盏花素注射液一般是在偏碱性条件下配制而成，临床给药时容易产生沉淀等问题给临床用药带来了不安全因素，而且，灯盏花素静注半衰期短，为(52 ±29) min，需要频繁给药。灯盏花素主要用于心脑血管领域慢性病的治疗，需要长期用药，无论是注射还是口服，长期频繁给药都会带来病人依从性差的问题。
[0003]多囊脂质体是一种结构特殊的脂质体制剂，由英国学者kim于1983年首先制得并命名，其结构具有许多非同心的类脂及磷脂双分子层所分割的水性囊泡，这种脂质体装载药物后，注射进入人体即形成药物储库，药物释放需要透过类脂及磷脂双分子层的层层阻隔，产生良好的缓释作用。目前已有硫酸吗啡多囊脂质体、阿糖胞苷多囊脂质体及布比卡因多囊脂质体先后获FDA批准上市，显示了多囊脂质体作为药物缓释给药载体的巨大潜力，尽管如此，多囊脂质体作为药物的缓释载体仍然存在一些不足，首先，目前研宄的多囊脂质体多为混悬液，粒径较大，通常为Ι-lOOMffl，贮存过程中容易沉降聚集，不利于保存和运输；冷冻干燥可以使脂质体混悬液固态化，临用前加水复溶来形成脂质体混悬液，避免脂质体作为混悬液保存时的诸多不稳定性，通常被用来提高脂质体制剂的稳定性。然而对于多囊脂质体而言，由于其粒径较普通脂质体大，结构中含有许多水性囊泡，其包封的水相体积约占整个多囊脂质体体积的95%，因此冷冻干燥对多囊脂质体的破坏较为严重，冻干过程药物渗漏严重，冻干后难以恢复至冻干前的状态，这便是目前研宄的多囊脂质体多为混悬液的原因。其次，多囊脂质体内部囊泡在体内外也会出现部分破裂、合并而导致药物渗漏。
[0004]因此，如果采取措施改善多囊脂质体的稳定性，减少多囊脂质体冷冻干燥过程中药物的渗漏，提供一种体内外稳定、包封率高的灯盏花素多囊脂质体冻干制剂，使灯盏花素缓慢释放，对于心脑血管领域慢性病的治疗或辅助治疗意义重大。
【发明内容】
[0005]本发明所要解决的技术问题就是针对目前灯盏花素口服吸收差，注射半衰期短，多囊脂质体作为缓控释给药载体的稳定性差的缺陷，提供一种含有灯盏花素的内相凝胶化多囊脂质体冻干制剂，包封率高、释放灯盏花素缓慢，体外稳定性好，大大减少用药次数和频率。
[0006]为实现上述目的，本发明的技术解决方案是:一种含有灯盏花素的内相凝胶化多囊脂质体冻干粉，其成分包括下列重量份的各组分:灯盏花素I份、中性磷脂0.95-1.18份、负电荷磷脂0.025-0.25份、胆固醇0.25-1份、三酸甘油酯0.15-0.25份、蔗糖0.125-1份、内水相辅助乳化剂0.163-0.263份、泊洛沙姆407 9.5-11份、泊洛沙姆188 0.25-1.75份、葡萄糖0.5-1.25份、外水相辅助乳化剂0.1-0.15份、支持剂6_14份。
[0007]本发明中，泊洛沙姆188与泊洛萨姆407属于温敏性凝胶材料，其包封于多囊脂质体内水相可发挥两方面作用:一方面，在生理温度下可形成凝胶，发挥多囊脂质体内部囊泡的内相支撑作用，减少囊泡的聚合、破裂，提高多囊脂质体稳定性及释药平稳性；另一方面，多囊脂质体冷冻干燥过程中，随内部囊泡水分的升华，聚合物在囊泡内部析出并形成一种网格样骨架结构，药物被包裹于这种骨架结构中，渗漏少，提高多囊脂质体冷冻干燥过程中的稳定性。
[0008]本发明中，所述中性磷脂是指处于中性pH时整个分子的净电荷为零的磷脂。所述的中性磷脂可以是卵磷脂、大豆磷脂、氢化大豆磷脂、磷脂酰胆碱、脑磷脂、鞘磷脂、二棕榈酰磷脂酰胆碱、二肉豆蔻酰磷脂酰胆碱、二油酰磷脂酰胆碱、磷脂酰乙醇胺和二油酰磷脂酰乙醇胺中的一种或几种。
[0009]本发明中，所述负电荷磷脂是指处于中性pH时整个分子带负电荷的磷脂，负电荷磷脂可以是磷脂酰丝氨酸、二棕榈酰磷脂酰丝氨酸、二硬脂酰磷脂酰丝氨酸、磷脂酰甘油、二棕榈酰磷脂酰甘油、二硬脂酰磷脂酰甘油、磷脂酰肌醇、二棕榈酰磷脂酰肌醇、二硬脂酰磷脂酰肌醇、磷脂酸二棕榈酰磷脂酸和二硬脂酰磷脂酸中的一种或几种，优选为磷脂酰甘油。
[0010]本发明中，三酸甘油酯参与形成多囊脂质体拓扑结构，其在多囊脂质体内部囊泡之间起支架作用，所述的三酸甘油酯选自三油酸甘油酯、三辛酸甘油酯中的一种或两种。
[0011]本发明中内水相辅助乳化剂与外水相乳化剂发挥膜稳定作用，减少多囊脂质体制备过程中复乳的聚合、破裂，所述的内水相辅助乳化剂及外水相辅助乳化剂均选自赖氨酸、甘氨酸、组氨酸、聚乙烯醇、右旋糖酐、羟甲基淀粉、羟乙基淀粉、明胶、海藻酸钠和聚乙烯吡咯烷酮中的一种或几种。
[0012]本发明中支持剂是多囊脂质体冷冻干燥过程中的保护剂，所述支持剂选自山梨醇、甘露醇、蔗糖、右旋糖苷、甜菊糖、葡萄糖、乳糖中的一种或几种。
[0013]本发明还提供灯盏花素内相凝胶化多囊脂质体冻干粉的制备方法，其特征在于:包括下列步骤:
1、按重量份计将中性磷脂0.95-1.18份、负电荷磷脂0.025-0.25份、胆固醇0.25-1份、三酸甘油酯0.15-0.25份溶解于氯仿-乙醚(1:1)，作为脂质相，使中性磷脂在脂质相中的浓度为 19-23.5mg/ml ；
2、按重量份计将蔗糖0.125-1份、内水相辅助乳化剂0.163-0.263份、泊洛沙姆4079.5-11份、泊洛沙姆188 0.25-1.75份、灯盏花素I份溶解于水中，调Ph7.0作为内水相，使灯盏花素的终浓度为20mg/ml ；
3、按重量份计将葡萄糖0.5-1.25份、外水相辅助乳化剂0.1-0.15份溶解于水中，作为外水相，使葡萄糖浓度为5-12.5mg/ml ；
4、将内水相缓慢加入脂质相上层，所述内水相和脂质相的体积比为1:(1-1.2)，高速剪切形成油包水型乳液； 5、将上述乳液加入到外水相中，所述乳液与外水相的体积比为1:(1-2)，高速剪切形成水包油包水型复乳；
6、将复乳氮气吹干除去其中的氯仿、乙醚，即得灯盏花素多囊脂质体混悬液；
7、将步骤6所得灯盏花素多囊脂质体混悬液1500rpm条件下离心，每次用2倍于步骤5所用外水相体积的生理盐水冲洗，共冲洗3次，得灯盏花素多囊脂质体；
8、按重量份计将6-14份支持剂溶解于水中，与步骤7灯盏花素多囊脂质体混合，使支持剂终浓度为30mg/ml-70mg/ml，冷冻干燥。
[0014]本发明中，所述高速剪切条件为:高速剪切匀浆机在1000rpm的转速下作用8min0
[0015]本发明采用以上技术方案，其具有以下优点(I)延缓药物释放。本发明灯盏花素内相凝胶化多囊脂质体进入体内后，遇生理温度，内水相即形成凝胶，药物释放需要通过凝胶的扩散和磷脂双分子层的层层阻隔，释药缓慢；(2)提高体内稳定性。本发明灯盏花素内相凝胶化多囊脂质体进入体内后，遇生理温度，内水相即形成凝胶，囊泡内部凝胶的形成降低了囊泡内水相的流动性，同时形成了支撑磷脂双分子层的实体结构，降低磷脂双分子层流动性，减少囊泡破裂及相互融合；(3)降低渗透压对药物释放的影响。内相胶凝降低了磷脂双分子层膜内外流动性，减弱了渗透压变化对药物释放的影响，提高了药物释放的稳定性。
(4)提高多囊脂质体冷冻干燥过程中的稳定性。冷冻干燥过程中，随内部囊泡水分的升华，聚合物在囊泡内部析出并形成一种网格样骨架结构，药物被包裹于这种骨架结构中，渗漏少，有望实现多囊脂质体混悬液的粉末化。
【附图说明】
[0016]图1为实施例1制得的多囊脂质体400倍光学显微镜下外观形态图。
[0017]图2为实施例1制得的多囊脂质体经激光粒度仪分析的粒径分布示意图。
[0018]图3为效果实施例1中灯盏花素内相凝胶化多囊脂质体体外累积释放曲线图。
[0019]图4为对比实施例1中灯盏花素普通多囊脂质体体外累积释放曲线图。
【具体实施方式】
[0020]下面通过实施例的方式进一步说明本发明，但并不因此将本发明限制在所述的实施例范围之中。
[0021]对以下实施例制备的多囊脂质体进行质量检测如下。
[0022]1.色谱条件
色谱柱:kromasil C18柱(250 X 4.6mm，5 μ m);流动相:甲醇:乙腈:水:磷酸(40:
10: 50: 0.1);检测器:紫外检测器;检测波长:335nm ;柱温:室温；流速:lml/min ;进样量:20 μ Lo
[0023]2.包封率测定
将多囊脂质体冻干粉加适量注射用水复溶得多囊脂质体混悬液，取等量的多囊脂质体混悬液两份，一份混悬液置于离心机中于1500r/min离心，收集上层清液，高效液相色谱法测定药物浓度Cl，另一份用流动相溶解破乳，高效液相色谱法测定药物浓度C2，包封率按下式计算:包封率=1- (C1/C2) X 100%ο
[0024]3.粒子形态及粒径分布
将多囊脂质体冻干粉加适量注射用水复溶得多囊脂质体混悬液，激光粒度仪测量平均粒径与粒径分布，光学显微镜观察粒子形态。
[0025]4.灯盏花素长效乳剂体外释放度测定
将多囊脂质体冻干粉加适量注射用水复溶得多囊脂质体混悬液，取等量的灯盏花素长效乳剂混悬液两份，一份混悬液适量置于透析袋中(截留分子量500000)，透析袋两端扎紧置于等渗释放介质中(Ph7.2磷酸盐缓冲液，含0.5%Vc及0.01%叠氮钠)，37°C水