用于肿瘤治疗的基于EGFRvIII序列的肽疫苗的利记博彩app
【专利说明】用于肿瘤治疗的基于EGFRvIII序列的肽疫苗 发明领域
[0001] 本发明涉及可用于针对表达III型突变型表皮生长因子受体的癌细胞产生免疫 应答的肽靶标。本发明涉及疫苗及在抗癌治疗和方案中使用所述疫苗的方法。
[0002] 发明背景
[0003] 本发明是在政府支持下，在美国国立卫生研宄院授予的合同CA 124832下进行。 政府享有本发明中的某些权利。
[0004] 本申请要求2012年8月2日提交的美国临时专利申请号61/678, 800的优先权， 所述专利申请以引用方式并入本文。
[0005] 表皮生长因子受体（在人中也被称为EGFR、ErbB-1、HERl)为细胞表面受体，当它 与特定配体如表皮生长因子（EGF)和转化生长因子a (TGFa)结合时，其被激活。对应于 正常EGF受体的cDNA序列公开于Ullrich等Nature 1984309, 418-425中。
[0006] Wong 等，Proc Natl Acad Sci USA 1992, 89, 2965-2969 和 PCT 申请号 PCT/ US90/04489报道了五个恶性神经胶质瘤中，与编码EGFR的基因的重排或缺失相关的基因 改变，其包括被称为III型突变型EGF受体（以下为EGFRvIII)的变异型EGFR，该变异型 EGFR为对应于EGF受体cDNA中核苷酸275-1075之间的缺失的EGFR基因的剪接变体的翻 译产物，所述缺失对应于编码受体的胞外结构域的编码序列的一部分的缺失，所述编码序 列的一部分的缺失对应于外显子2至7,使得外显子1接合到外显子8。由该缺失形成的同 框剪接接头包括编码两个序列接合处的甘氨酸残基的密码子。未在正常的EGFR基因中的 正常外显子1编码序列或正常外显子8编码序列中相应的位置处找到此甘氨酸残基编码序 列。EGFRvIII缺失导致通常情况下远距离的序列的融合而产生在此融合接头编码新颖肽序 列的突变序列。
[0007] EGFRvIII是在人肿瘤中最经常出现的天然存在的突变型EGFR，并且在被称为多 形性成胶质细胞瘤的脑肿瘤中尤为普遍。据报道，EGFRvIII存在于56%的成胶质细胞瘤和 16%的非小细胞肺癌中。Moscatello等Cancer Res. 1995, 55, 5536-5539报道已发现所述 EGFRvIII存在于78%的乳腺癌中。因此EGFRvIII被鉴定为潜在理想肿瘤靶标，因为未在 任何正常组织中发现该序列。
[0008] 对应于外显子2至7的缺失，其中外显子1接合到外显子8,所述缺失为产生接头 处的新甘氨酸的密码子的同框改变。所产生EGFRvIII蛋白的氨基末端的特征在于氨基酸 序列LEEKKGNYVVTDH，SEQ ID N0:1，其中L代表成熟蛋白的第一个氨基酸，并且G为外显子 1至8融合的结果。
[0009] 使用包含对应于EGFRvIII接头的肽的疫苗以预防在动物模型中过度表达 EGFRvIII的肿瘤或诱导这种肿瘤的消退。使用肽LEEKKGNYVVIDHC SEQ ID N0:2(其中添加 了末端半胱氨酸以用于缀合目的）缀合到免疫刺激分子KLH来形成疫苗。虽然没有任何直 接实验证据，但是认为甘氨酸是此肽被免疫系统识别为异物的关键特征，因为其为新颖的。 现在这种特定的肽：KLH缀合疫苗已用于针对成胶质细胞瘤的II期临床试验中，其中与匹 配的历史对照组的15个月相比，其表现出26个月的平均存活期。
[0010] 基于由剪接接头编码的蛋白质序列的肽描述于美国专利号6, 224,868、 5, 212, 290、5, 401，828、5, 710, 010、5, 814, 317、5, 981，725、6, 127, 126 和 6,455,498 中。 此外，这些专利公开了缀合至载体如钥孔血蓝蛋白（KLH)的肽以及其作为疫苗的用途。 Sampson等美国公布号20090220551公开了具有不同C末端的EGFRvIII肽并且大体公开了 在癌症治疗方案中使用所述肽作为辅助疗法的方法。
[0011] Heimberger 和 Sampson，Expert Opin Biol Ther. 2009 年 8 月；9 (8) : 1087-1098 公开了来自于使用包含具有缀合至KLH的SEQ ID NO: 2的EGFRvII I肽的EGFRvIII-KLH缀 合物来治疗患有成胶质细胞瘤的患者的三个不同临床试验的结果。在一个试验中，患者首 先进行肿瘤切除，然后进行放射疗法。此后，从患者分离树突细胞（DC)，用EGFRvIII-KLH缀 合物进行脉冲并且作为自体DC再次引入患者体内。在第二个试验中，患者进行肿瘤切除， 然后进行放射疗法，并且然后通过注射将EGFRvIII-KLH缀合物直接施用至患者。在第三个 试验中，患者进行肿瘤切除，然后在通过注射将EGFRvIII-KLH缀合物直接施用至患者后， 进行放射疗法，同时使用替莫唑胺（TMZ)对患者进行化学疗法。在每个临床试验中，与历史 时间进展和总存活统计数据相比，观察到时间进展和总存活的改善。
[0012] 当前的疫苗虽然表现出存活期显著延长，但是不能治愈。显然，患者期望在长期存 活方面提供最好可能机会的治疗。因此，存在提供改善的EGFRvIII疫苗以增强存活的需 要。存在对可用于改善诊断出患有表达EGFRvIII的癌症的患者的临床结果的改善的组合 物和疗法的需要。
[0013] 发明概述
[0014] 本发明涉及包含预防或治疗有效量的缀合至载体的肽的疫苗组合物，所述肽具有 下式：
[0015] Ll-E2-Glu-Lys-Lys-Xaa6-N7-Y8-V9-V10-Tl 1-D12-H13-C14-载体
[0016] 其中
[0017] Ll不存在或为Leu;
[0018] E2不存在或为Glu;
[0019] Xaa6 为 Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gin、Glu、His、lie、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、 Thr、Trp、Tyr 或 Val ;
[0020] N7不存在或为Asn ;
[0021] Y8不存在或为Tyr;
[0022] V9不存在或为Val ;
[0023]VlO不存在或为Val;
[0024] Tll不存在或为Thr;
[0025] D12不存在或为Asp;
[0026] H13不存在或为His;
[0027] C14为Cys或可将肽连接至载体的连接部分。
[0028] 在一些实施方案中，Xaa6为Ala、Val或Pro。在一些实施方案中，Ll-E2-Glu_Ly s-Lys-Xaa6-N7-Y8-V9-V10-Tll-D12-H13-C14包含至少4个氨基酸、至少5个氨基酸、至少 6个氨基酸、至少7个氨基酸、至少8个氨基酸、至少9个氨基酸、至少10个氨基酸、至少11 个氨基酸、至少12个氨基酸、至少13个氨基酸或至少14个氨基酸。
[0029] 在一些实施方案中，本发明提供包含预防或治疗有效量的缀合至载体的肽的疫苗 组合物，所述肽具有下式：
[0030] a -Glu-Lys-Lys-Xaa-0
[0031] 其中
[0032] a 不存在、为酰基、Leu-Glu ;Glu;或 Leu;
[0033] Xaa 为 Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gin、Glu、His、lie、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、 Thr、Trp、Tyr 或 Val ;并且
【主权项】
1. 一种疫苗组合物，其包含预防或治疗有效量的缀合至载体的肽，所述疫苗具有下 式： Ll-E2-Glu-Lys-Lys-Xaa6-N7-Y8-V9-V10-Tl1-D12-H13-C14-载体 其中 Ll不存在或为Leu; E2不存在或为Glu; Xaa6 为Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gin、Glu、His、lie、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr或Val; N7不存在或为Asn; Y8不存在或为Tyr; V9不存在或为Val; VlO不存在或为Val; Tll不存在或为Thr; D12不存在或为Asp; H13不存在或为His; C14为Cys或可将所述肽连接至载体的连接部分。
2. 根据权利要求1所述的疫苗，其中所述载体为半抗原。
3. 根据权利要求1所述的疫苗，其中所述载体为KLH、BSA或HSA。
4. 根据权利要求1所述的疫苗，其中Xaa6为Ala、Val或Pro。
5. 根据权利要求 1 所述的疫苗，其中Ll-E2-Glu-Lys-Lys-Xaa6-N7-Y8-V9-V10-T11_D1 2-H13-C14包含至少4个氨基酸、至少5个氨基酸、至少6个氨基酸、至少7个氨基酸、至少 8个氨基酸、至少9个氨基酸、至少10个氨基酸、至少