新方法
【专利说明】新方法
[0001] 本案的主题涉及2012年5月8日提交的美国临时申请61/644, 268、2012年5月25 日提交的美国临时申请61 /651，778和2013年3月15日提交的美国临时申请61 /799, 606， 将上述文献各自的内容引入本文作为参考。 发明领域
[0002] 本发明涉及选择性水通道蛋白、例如水通道蛋白-4或水通道蛋白-2的抑制剂、例 如某些苯基苯甲酰胺化合物在预防、治疗和控制下列疾病中的用途：水通道蛋白介导的病 症，例如水失衡疾病，例如水肿（特别是例如创伤或缺血性发作后的脑和脊髓水肿，以及与 神经胶质瘤、脑膜炎、急性高山病、癫痫性发作、感染、代谢紊乱、缺氧、水中毒、肝功能衰弱、 肝性脑病、糖尿病酮症酸中毒、脓肿、子痫、克雅氏病和狼疮性脑炎相关的水肿以及微重力 和/或射线照射后水肿以及侵入性中枢神经系统操作后水肿，所述侵入性中枢神经系统操 作例如神经外科手术、血管内凝块除去、脊髓穿刺、动脉瘤修复或深部脑刺激以及视网膜水 肿）以及低钠血和过量液体潴溜和例如癫痫症、视网膜缺血和与眼内压和/或组织水化异 常相关的其它眼病、心肌缺血、心肌缺血/再灌注损伤、心肌梗死、心肌缺氧、充血性心力衰 竭、脓毒症和视神经脊髓炎以及偏头痛这样的疾病，本发明还涉及鉴定水通道蛋白抑制剂 的新试验方法。
[0003] 发明背景
[0004] 水通道蛋白是作为介导水流进出细胞的分子水通道起作用的细胞膜蛋白。尽管存 在一定程度的水被动扩散或渗透通过细胞膜，但是水快速和选择性进出细胞涉及水通道蛋 白。这些水通道选择性地引导水分子进出细胞，同时阻断离子和其它溶质通过，由此保护细 胞的膜电位。水通道蛋白实际上在所有生命形式中被发现，从细菌到植物，再到动物。在人 体中，它们在遍在体内的细胞中被发现。
[0005] 脑水肿（CE)是中风损害的主要提供者，因为它可以导致颅内压力增加（ICP)、脑 灌注相应减少和可能持久性或致命性的脑损害。水肿也促成CNS损害，例如外伤性脑和脊 髓损伤、神经胶质瘤、脑膜炎、急性高山病、癫痫性发作、感染、代谢紊乱、缺氧、水中毒、肝功 能衰弱、肝性脑病、糖尿病酮症酸中毒、脓肿、子痫、克雅氏病和狼疮性脑炎。存活最大ICP 期限、通常是中风或外伤性脑损伤后3天的患者有可能存活。令人遗憾的是，对于CE仅有 少数治疗选择且它们的效能有限。
[0006] 低钠血的特征在于血清钠水平< 135mM，其为电解质失衡的最常见形式，在全国范 围内的医院中报告的发病率为15-20%。相关的液体潴留是心力衰竭（HF)、肝硬化、肾疾病 和抗利尿素分泌异常症（SIADH)的症状。各种利尿药用于治疗与HF相关的充血。通过抑 制升亨利袢中的Na/K/Cl协同转运蛋白，髓袢利尿剂通过减少来自尿的Na +和C厂重吸收导 致利钠作用。用于低钠血的可选疗法是应用血管加压素受体拮抗剂，其通过AQP2的加压素 诱导的运输抑制水重吸收。令人遗憾的是，髓袢利尿剂和血管加压素受体拮抗剂间接地定 向于期望的生理学结果。理想的药物可以直接阻断水重吸收，由此将上游效应器导致的潜 在副作用减至最少，而目前并不了解这样的药物。
[0007] 癫痫症是特征在于复发性癫痫的脑功能障碍。癫痫症因脑活动受到破坏而发生， 导致一定程度的暂时性脑功能障碍。癫痫症可以导致不能控制的摇动和意识丧失，而更为 常见的是，发生癫痫症的人停止运动或变成不在意所发生的情况。抗惊厥药可以用于治疗 癫痫症，然而，抗惊厥药并非对所有具有癫痫症的人有效。
[0008] 缺血是特征在于对组织供血中断或不足的病症。视网膜缺血因对视网膜缺乏供血 而发生。血管闭塞、青光眼和糖尿病视网膜病变与视网膜缺血相关并且可以产生视网膜水 肿和神经节细胞死亡，从而导致视觉障碍和失明。AQP4在视网膜内的MUller细胞中表达。 因治疗方法相对无效，所以视网膜缺血仍然是导致视觉障碍和失明的常见原因。
[0009] 心肌缺血是特征在于多冠状动脉阻塞或收缩导致的病症，例如其可以因动脉硬化 斑块阻塞或破裂发生。心肌梗死即心脏病发作在心肌缺血超过临界阈值时发生，且压倒了 为维持操作功能和动态平衡设计的心肌细胞修复机制。心肌梗死仍然是导致全世界发病率 和死亡率的主要原因。有效治疗心肌缺血、心肌缺血/再灌注损伤、心肌梗死和充血性心力 衰竭的化合物是有用的药物。
[0010] 已知苯基苯甲酰胺化合物为药物。苯基苯甲酰胺包括如下化合物：例如氯硝柳 胺（5-氯-N-(2-氯-4-硝基苯基）-2-羟基苯甲酰胺），即用于治疗绦虫的驱蠕虫药，但 不了解其对水通道蛋白具有任何的作用。美国专利公开号US 2010/0274051 Al (将其内 容引入本文作为参考）描述了一些苯基苯甲酰胺类，其用于通过选择性抑制ΙΚΚ-β抑制 NF-κ Β，而US 7, 626, 042 (也引入本文作为参考）公开了这种化合物的O-酰基衍生物，而 US 7, 700, 655 (也引入本文作为参考）描述了一些苯基苯甲酰胺类，其用于治疗过敏性疾 病。然而，这些专利申请未公开任何有关脑水肿或水失衡（aquaresis)或水通道蛋白的内 容。
[0011] 在2004年的论文中，据称一个小组在大鼠心肌缺血/再灌注损伤模型中研宄了 N-(3, 5-双-三氟甲基-苯基）-5-氯-2-羟基-苯甲酰胺在I κ B磷酸化阻滞中的效能。 Onai，Υ·等人，"Inhibition of IlcpPhosphorylation in Cardiomyocytes Attenuates Myocardial Ischemia/Reperfusion Injury，''Cardiovascular Research，2004,63,51-59。 该小组报道了一些活性。然而，随后，这种活性作用未得到证实，且由此N-(3, 5-双-三氟 甲基-苯基）-5-氯-2-羟基-苯甲酰胺未继续用于人体中的这种适应症。
[0012] 在本发明前，不了解特异性的经验证的水通道蛋白例如AQP4或AQP2的抑制剂。 单点报道了一些抗癫痫药或磺酰胺药物（例如乙酰氨苯磺胺、乙酰唑胺、6-乙氧基-苯并 噻唑-2-磺酰胺、托吡醋、唑尼沙胺、苯要英、拉莫三嗪和舒马普坦）为可能的AQP4抑制剂， 但随后被证明是不正确的。Yang，等人，Bioorganic & Medicinal Chemistry(2008) 16: 7489-7493。未报到AQP2的直接抑制剂。对治疗上有用的水通道蛋白抑制剂的寻求因缺乏 有效的高流通量筛选试验以及缺乏研发和验证所述试验和用作阳性对照或结合竞争剂的 高度选择性抑制剂而受到阻碍。
[0013] 对于改进的治疗和控制如下疾病的方法存在巨大需求：水失衡疾病，例如水肿，例 如脑水肿和水分保持和低钠血，以及例如癫痫症、视网膜缺血、心肌缺血、心肌缺血/再灌 注损伤、心肌梗死、心肌缺氧、充血性心力衰竭、脓毒症和视神经脊髓炎以及偏头痛这样的 疾病。
[0014] 发明概述
[0015] 本发明提供了选择性水通道蛋白、例如水通道蛋白-4或水通道蛋白-2抑制剂在 预防、治疗和控制如下疾病中的用途：水通道蛋白介导的病症，例如水失衡疾病，例如水肿 (特别是例如创伤或缺血性发作后的脑和脊髓水肿，以及与神经胶质瘤、脑膜炎、急性高山 病、癫痫性发作、感染、代谢紊乱、水中毒、肝功能衰弱、肝性脑病、糖尿病酮症酸中毒、脓肿、 子痫、克雅氏病和狼疮性脑炎相关的水肿，以及微重力和/或射线照射后水肿，以及侵入性 中枢神经系统操作后水肿，所述侵入性中枢神经系统操作例如神经外科手术、血管内凝块 除去、脊髓穿刺、动脉瘤修复或深部脑刺激以及视网膜水肿，以及心跳骤停后的脑肿胀，例 如与复苏期前缺氧导致发生代谢性酸中毒相关（例如乳酸酸中毒）），以及低钠血和过量液 体潴溜，以及例如癫痫症、视网膜缺血这样的疾病和其它与眼内压或组织水化异常相关的 眼疾病、心肌缺血、心肌缺血/再灌注损伤、心肌梗死、心肌缺氧、充血性心力衰竭、脓毒症 和视神经脊髓炎以及偏头痛。
[0016] 本发明还提供了一些苯基苯甲酰胺类在抑制水通道蛋白、特别是AQP4和AQP2中 的用途。
[0017] 本发明特别提供了治疗或控制由水通道蛋白介导的疾病或病症的方法，所述疾病 或病症例如水失衡疾病或病症和其它疾病，例如：
[0018] 脑或脊髓水肿，例如脑水肿，例如颅脑损伤、缺血性发作、神经胶质瘤、脑膜炎、急 性高山病、癫痫性发作、感染、代谢紊乱、缺氧（包括广泛性全身性缺氧和因心跳骤停导致 的缺氧）、水中毒、肝功能衰弱、肝性脑病、糖尿病酮症酸中毒、脓肿、子痫、克雅氏病、狼疮性 脑炎或侵入性中枢神经系统操作后的脑水肿，所述侵入性中枢神经系统操作例如神经外科 手术、血管内凝块除去、脊髓穿刺、动脉瘤修复或深部脑刺激，或例如脊髓创伤、例如脊髓压 迫症后脊髓水肿；或大脑和/或视神经微重力和/或射线照射后水肿；或
[0019] 视网膜水肿；或
[0020] 例如心力衰竭（HF)、肝硬化、肾疾病或抗利尿素分泌异常症（SIADH)后的低钠血 或过量液体潴留；或
[0021] 癫痫症、视网膜缺血或与眼内压和/或组织水化异常相关的其它眼病、心肌缺血、 心肌缺血/再灌注损伤、心肌梗死、心肌缺氧、充血性心力衰竭、脓毒症或视神经脊髓炎；
[002