一种石上柏活性组分及其制备方法和用图
【技术领域】
[0001] 本发明涉及一种中药提取物，具体涉及一种石上柏活性组分制备方法及其应用。
【背景技术】
[0002] 石上柏是卷柏属（植物深绿卷柏（t/oetfer/eiflii Hieron)的干燥全草。它主产于福建、台湾、广东等地。全年均可采收，洗净，鲜用或晒干入 药。具有清热解毒，祛风除湿，止血，抗癌等功效。其是中医抗癌方中常用的抗癌药物。现 代药理研究也发现石上柏或其组方能增强癌症病人机体代谢和网状内皮系统功能，而同时 未见有毒副作用的报道。
[0003] 研究表明其主要成分为双黄酮化合物：穗花杉双黄酮（amentoflavone)，橡胶树 双黄酮（heveafla V〇ne)、7，4，，7' 4"'-四-0-甲基-穗花杉双黄酮（7，4，，7"， 4"，-tetra-〇-methyl-amentoflavone)、delicaflavone 等。该黄酮类成分为石上柏中的高 效、低毒抗癌活性成分，是值得深入研究开发的活性组分。目前，对石上柏抗肿瘤活性化合 物和组分尚无新药开发研究的报道，存在物质基础不明确，质量不可控等弊端，缺乏制备高 含量总黄酮活性组分的方法及专利报道。
【发明内容】
[0004] 本发明的目的是提供一种石上柏活性组分。
[0005] 本发明的另一目的是提供一种上述石上柏活性组分的制备方法。
[0006] 本发明的再一目的是提供一种含有以上石上柏活性组分的药物或药物组合物。
[0007] 本发明还提供了含有该石上柏活性组分的制剂及该组分的用途。
[0008] 本发明的目的是这样实现的，所述的一种石上柏抗肿瘤活性组分的制备方法，其 特征在于包括以下步骤：（1)脱脂：将自然晾干的石上柏粉碎后，用8~15倍量石油醚浸泡 后回流，过滤，挥干有机溶剂得药渣；（2)成分提取：将步骤（1)石上柏提取后的药渣，用乙 醇溶液冷凝回流提取，提取次数为至少1~3次或者提取次数为1-3次，每次提取时间为1~3 小时，合并乙醇提取液浓缩成石上柏流浸膏；（3)柱层析：石上柏流浸膏用水复溶后上聚酰 胺柱，采用水-乙醇溶液体系梯度洗脱；（4)组分类别鉴定：步骤（3)的水-乙醇溶液体系 梯度洗脱得到6个不同极性部位，经过检测发现有2个组分含有黄酮类化合物；（5)含量测 定：测定步骤（3)获得组分的黄酮类化合物的含量。
[0009] 所述步骤（2)中每次乙醇提取时、每次加乙醇水溶液量是药渣的6-10倍量，优选 8-10倍量。
[0010] 所述步骤（2)中，每次加入的乙醇溶液体积百分浓度60%-85%，或者浓度为 60%-85wt%，优选体积百分浓度60%-85%，或者优选乙醇浓度为70%-85wt%。
[0011] 所述步骤（3)中，水-乙醇溶液体积百分浓度梯度分别为0-10%、20-30%、40-50%、 60-70%、80-90% 和 100%，优选为 10%、30%、50%、70%、90%和100%。
[0012] 所述步骤（4)中得到的6个极性部位，分别为Fr. 1，Fr. 2, Fr. 3, Fr. 4, Fr. 5和 Fr. 6,分别经过体外活性筛选，得到组分Fr. 4, Fr. 5或组分Fr. 4和Fr. 5的混合组分为石上 柏抗肿瘤活性组分。
[0013] 所述步骤（4)中得到的6个组分中Fr. 4和Fr. 5组分总黄酮含量占石上柏总黄酮 含量的70-95%。
[0014] 所述活性提取物是以石上柏脱脂后的药渣作为起始原料提取的，提取液过滤浓 缩，柱层析、乙醇水溶液梯度洗脱、分别浓缩，得6个极性部位，通过体外抗肿瘤活性验证和 黄酮类的含量测定，得到总黄酮含量占石上柏总黄酮含量70-95%的石上柏活性组分。
[0015] 上述的制备方法制得的石上柏抗肿瘤活性组分的药物和药学上可接受的载体或 和其它活性药物及药学上可接受的载体。
[0016] 上述的药物或药物组合物制成任一种药学上可接受的制剂。
[0017] 上述的制备方法制得的药物或药物组合物在制备抗肿瘤物中的应用。
[0018] 具体地说，本发明还可提供如下技术方案： 本发明的石上柏活性提取物中主要含有黄酮类成分。其中，以重量百分比计，黄酮类成 分的含量为70%以上，优选的，黄酮类成分的含量为70%_95%。
[0019] 本发明所述石上柏活性的制备方法，包括以下步骤：（1)脱脂：将自然晾干的石上 柏粉碎后，用8~15倍量石油醚浸泡后回流提取，过滤，挥干有机溶剂得药渣；（2)成分提取： 将石上柏提取后的药渣，加8-10倍量乙醇溶液冷凝回流提取，提取次数为1~3次，每次提取 时间为1~3小时合并乙醇提取液浓缩成流浸膏；（3)柱层析：石上柏流浸膏用水复溶后上聚 酰胺柱，采用乙醇水溶液体系（乙醇含量分别为：0-10%、20-30%、40-50%、60-70%、80-90%和 100%)梯度洗脱；（4)组分类别鉴定：得到6个不同极性组分（Fr. l，Fr. 2，Fr. 3，Fr. 4，Fr. 5， Fr. 6)。（5)含量测定：采用HPLC-DAD测定上述6个组分，发现Fr. 4可能含有8个以上的黄 酮类成分，其黄酮含量达60-80%，占浸膏总黄酮含量的70-85% ;Fr. 5含有极性较小的2个 双黄酮成分，总黄酮含量为70-95%，占浸膏总黄酮含量的10-16%。Fr. 4和Fr. 5组分富集了 石上柏药材中70-95%黄酮类化合物。体外活性筛选，发现Fr. 4和Fr. 5组分是石上柏抗肿 瘤活性组分。
[0020] 本发明所述石上柏组分Fr. 4, Fr. 5以及Fr. 4和Fr. 5混合组分可以作为活性成 分，加入药剂学上可以接受的辅料，按照药剂学上记载的制剂的制备方法制成制剂。
[0021] 本发明所述石上柏活性组分还可以作为活性成分之一，加入药剂学上接受的辅 料，按照药剂学上记载的制剂的制备方法制成制剂。
[0022] 所述的制剂包括注射液、滴注液、粉针剂、颗粒剂、片剂、散剂、口服剂、糖衣片剂、 薄膜衣片剂、肠溶衣片剂、胶囊剂、硬胶囊剂、软胶囊剂、口含剂、颗粒剂、丸剂、膏剂、丹剂、 喷雾剂、滴丸剂、崩解剂、口崩剂、微丸等。
[0023] 本发明的石上柏活性组分及其制剂可在制备抗肿瘤药物中应用。
[0024] 本发明具有的有益效果是：提取精制方法是一种工艺简单易行、提取率高、能规模 化生产。
【具体实施方式】
[0025] 下面将结合实施例进一步说明本发明的实质内容和有益效果，该实施例仅用于说 明本发明而非对本发明的限制。
[0026] 实施例1石上柏活性组分的制备 (1)脱脂：将自然晾干的石上柏粉碎后，用8倍量石油醚（即石油醚的重量是石上柏粉 碎后的重量的8倍）浸泡后回流提取，过滤，挥干有机溶剂得药渣；（2)成分提取：将石上柏 脱脂后的药渣，加入8倍量体积百分浓度为70%的乙醇溶液（即体积百分浓度为70%的乙醇 溶液的重量是石上柏脱脂后的药渣的重量的8倍）冷凝回流提取，提取次数为1次，提取时 间为3小时，合并乙醇提取液浓缩成流浸膏；（3)柱层析：石上柏流浸膏用水复溶后上聚酰 胺柱，采用乙醇体积百分浓度含量分别为10%、30%、50%、70%、90%和100%水溶液（即无水乙 醇)体系梯度洗脱，分别收集不同极性的洗脱液，旋转蒸发挥去溶剂，得到6个极性部位的石 上柏组分；（4)组分类别鉴定：上述得到的6个不同极性部位，经过检测发现Fr. 4和Fr. 5 组分极性洗脱液含有黄酮类化合物，其中Fr. 4可能含有8个以上的黄酮类成分，其黄酮含 量达78%，占浸膏总黄酮含量的83% ;Fr. 5含有极性较小的2个双黄酮成分，总黄酮含量为 92%，占浸膏总黄酮含量的15% ; (5)含量测定：经过HPLC-DAD检测，Fr. 4和Fr. 5组分黄酮 类化合物含量达到药材总黄酮含量的70%。
[0027] 实施例2石上柏活性组分的制备 (1)脱脂：将自然晾干的石上柏粉碎后，用15倍量石油醚浸泡后回流提取，过滤，挥干 有机溶剂得药渣；（2)成分提取：将石上柏脱脂后的药渣，加入10倍量乙醇溶液冷凝回流提 取，提取次数为3次，每次提取时间为1小时，合并乙醇提取液浓缩成流浸膏；（3)柱层析 ： 石上柏流浸膏用水复溶后上聚酰胺柱，采用体积百分浓度为85%的乙醇配制成的乙醇体积 百分浓度含量分别为〇%、20%、40%、60%、80%和100%水溶液体系梯度洗