本发明涉及保健食品技术领域，特别涉及一种多糖组合物及其制备方法和应用。
背景技术：
阳虚证是指体内阴气亏损，机体失却温养，推动、蒸腾、气化等作用减退，临床常表现出畏冷，肢凉，口淡不渴，或喜热饮，或自汗，小便清长或尿少不利，大便稀薄，面色晄白，舌淡胖，苔白滑，脉沉迟(或为细数)无力。可兼有神疲、乏力、气短等气虚的表现。
造成阳虚的因素主要有两方面，第一，先天禀赋不足，《景岳全书》中就提到：“禀赋素弱，多有阳衰阴盛者，此先天阳气不足也。”；第二，后天习性养成，如现代人常在空调环境下生活、饮食起居习惯没有规律、房事过度、工作生活压力过大等等因素都可促使健康状态朝阳虚发展。
对于处于亚健康的群体来说，使用保健食品或普通食品进行调理，以此来改善其症状，从而恢复机体健康状态是一种重要的保健方式，《千金方·食治》：“夫为医者，当须先洞晓病源，知其所犯，以食治之；食疗不愈，然后命药”。目前，改善症状的治疗方案多以药物为主(如金匮肾气丸、肾气丸等使用具有回阳救逆的附子)，鲜有单纯以保健食品资源和药食同源原料为主的治疗方案。
基于以上原因，发明一种保健食品来源的改善阳虚症状的多糖组合显得尤为必要。
技术实现要素：
有鉴于此，本发明的目的在于提供一种多糖组合物，使得所述多糖组合物各组分产生协同作用，显著提高对神疲、乏力、畏冷、形体消瘦、面色无光、毛发稀疏等症状的阳虚的功效、显著提高缓解下丘脑—垂体—肾上腺素轴和下丘脑—垂体—甲状腺轴功能紊乱以及camp和cgmp水平异常的功效，同时提供所述多糖组合物的制备方法和在上述各方面的应用。
肉桂，为樟科常绿乔木植物肉桂的树皮，味辛、甘，性热，归脾、肾、心、肝经，有补火助阳、散寒止痛、温经通脉功效，主治肾阳衰弱的阳痿宫冷、虚喘心悸，心腹冷痈，寒疝作痛，寒痹腰痛，胸痹，阴疽，闭经，痛经等；
巴戟天，为茜草科多年生藤本植物巴戟天的干燥根，味甘、辛，性微温，归肾、肝经，有补肾壮阳，祛风除湿功效，主治肾阳虚弱的阳痿、不孕，少腹冷痛，月经不调，阴阳两虚，筋骨萎软，风湿久痹等；
益智仁，为姜科植物益智的果实，味辛，性温，归脾、肾经，有温脾，暖肾，固气，涩精功效，主治冷气腹痛，中寒吐泻，多唾，遗精，小便余沥，夜多小便等；
白术，菊科多年生草本植物白术的干燥根茎，味苦、甘，性温，归脾、胃经，有补气健脾、燥湿利水、止汗、安胎功效，主治脾胃气虚、脾虚痰饮、水肿、小便不利、多汗、胎动不安等；
熟地，玄参科多年生草本植物地黄的干燥块根，味甘，性微温，归肝、肾经，有补血滋阴、益精填髓功效，主治血虚诸症，肾阴虚诸症，精血亏虚诸症；
枸杞，茄科植物宁夏枸杞的果实，味甘性平，归肝、肾经；有滋补肝肾，益精明目功效；主治虚劳精亏、腰膝酸痛、眩晕耳鸣、内热消渴、血虚萎黄、目昏不明等；
本发明精选上述六种中药原料，利用水提醇沉法提取多糖组分，组成多糖组合物。
为实现上述发明目的，本发明提供如下技术方案：
一种多糖组合物，由肉桂多糖、巴戟天多糖、益智仁多糖、白术多糖、熟地多糖、枸杞多糖组成。
作为优选，所述肉桂多糖、巴戟天多糖、益智仁多糖、白术多糖、熟地多糖、枸杞多糖的质量比为(1-2):(1-4):(1-2):(1-2):(1-5):(2-4)；更优选地，所述肉桂多糖、巴戟天多糖、益智仁多糖、白术多糖、熟地多糖、枸杞多糖的质量比为2:2:2:1:5:3、2:1:1:2:1:2、1:2:2:2:1:4或1:2:2:2:5:4。
在本发明具体实施过程中，按照重量份数，所述多糖组合物可由肉桂多糖10～20份、巴戟天多糖10～40份、益智仁多糖10～20份、白术多糖10～20份、熟地多糖10～50份、枸杞多糖20～40份组成；所述重量份每一份可以表示任何重量单位形式下的任何数值，例如一重量份可表示为1g、0.5kg、10公斤、0.5斤等。
在本发明具体实施方式中，所述多糖组合物可具体如下：
(1)肉桂多糖2g、巴戟天多糖2g、益智仁多糖2g、白术多糖1g、熟地多糖5g、枸杞多糖3g；
(2)肉桂多糖2g、巴戟天多糖1g、益智仁多糖1g、白术多糖2g、熟地多糖1g、枸杞多糖2g；
(3)肉桂多糖1g、巴戟天多糖2g、益智仁多糖2g、白术多糖2g、熟地多糖1g、枸杞多糖2g；
(4)肉桂多糖1g、巴戟天多糖2g、益智仁多糖2g、白术多糖2g、熟地多糖5g、枸杞多糖4g；
本发明所述多糖组合物中各多糖组分可按照常规方法提取获得，但是在本发明具体实施过程中给出了如下获得方法：
将肉桂、巴戟天、益智仁、白术、熟地或枸杞加入其12倍量水煎煮1.0～2.0h过滤，得滤液和滤渣；滤渣加入其10倍量水煎煮0.5～1.0h，过滤，合并两次的滤液，在80℃条件下减压浓缩水提液，然后边搅拌边加入4倍体积70％乙醇，静置12h；分离沉淀，70％乙醇洗涤，真空冷冻干燥获得肉桂多糖、巴戟天多糖、益智仁多糖、白术多糖、熟地多糖或枸杞多糖。
本发明由肉桂多糖、巴戟天多糖、益智仁多糖、白术多糖、熟地多糖、枸杞多糖组成的多糖组合物能显著改善模型大鼠的症状：改善动物活动减少，喜欢扎堆，体型消瘦，毛稀疏、缺少光泽等阳虚症状，对应于阳虚患者的神疲、乏力、畏冷、形体消瘦、面色无光以及毛发稀疏等症状；所述多糖组合物不仅能够显著调节模型动物下丘脑—垂体—肾上腺素轴(hpa)和下丘脑—垂体—甲状腺轴(hpt)水平，改善功能紊乱，还能够缓解camp和cgmp水平异常。而且多糖组合物对模型动物的症状改善情况与每种多糖单独使用比较，作用更全面，效果更显著。由实验结果可以看出，多糖组合物与各多糖单独使用的剂量相同，但是在上述各方面均表现出更加优异的特性，这表明在大幅度减少多糖组合物中各多糖组分的使用量的前提下，对于上述各方面的功效反而得到提高，表现出明显的协同增效的作用。
基于上述优异的技术效果，本发明分别提出了所述多糖组合物在如下几个方面的应用：
(1)在制备改善阳虚症状药物和/或保健食品中的应用；在该应用中，所述阳虚症状为阳虚动物活动减少，喜欢扎堆，体型消瘦，毛稀疏、缺少光泽等症状，对应于阳虚患者的神疲、乏力、畏冷、形体消瘦、面色无光以及毛发稀疏等症状；
(2)在制备改善下丘脑—垂体—肾上腺素轴和下丘脑—垂体—甲状腺轴功能紊乱的药物和/或保健食品中的应用；
(3)在制备缓解camp和cgmp水平异常的药物和/或保健食品中的应用。
同时，本发明还提供了所述多糖组合物的制备方法，包括：
将原料加入原料12倍量水煎煮1.0～2.0h过滤，得滤液和滤渣；滤渣加入其10倍量水煎煮0.5～1.0h，过滤，合并两次的滤液，在80℃条件下减压浓缩水提液，然后边搅拌边加入4倍体积70％乙醇，静置12h；分离沉淀，70％乙醇洗涤，真空冷冻干燥获得多糖提取物，所述原料为肉桂、巴戟天、益智仁、白术、熟地或枸杞；
将肉桂多糖、巴戟天多糖、益智仁多糖、白术多糖、熟地多糖和枸杞多糖混合，获得所述多糖组合物。
由以上技术方案可知，本发明选择保健食品资源和药食同源的六种原料制备多糖提取物并组成多糖组合物，其可以显著改善阳虚模型大鼠的活动减少，喜欢扎堆，体型消瘦等症状、显著缓解下丘脑—垂体—肾上腺素轴(hpa)和下丘脑—垂体—甲状腺轴(hpt)的功能紊乱以及显著缓解camp和cgmp水平异常，与每种多糖单独使用比较，作用更全面，效果更显著。
具体实施方式
本发明公开了一种多糖组合物及其制备方法和应用，本领域技术人员可以借鉴本文内容，适当改进工艺参数实现。特别需要指出的是，所有类似的替换和改动对本领域技术人员来说是显而易见的，它们都被视为包括在本发明。本发明所述组合物及应用已经通过实施例进行了描述，相关人员明显能在不脱离本发明内容、精神和范围内对本文所述的组合物和应用进行改动或适当变更与组合，来实现和应用本发明技术。
在具体实施方式中，本发明所述多糖组合物中各多糖组分均采用水提醇沉法提取获得，具体为将干燥药材加入原生药的12倍量水煎煮1.0～2.0h,过滤，得滤液；第二次加入原生药的10倍量水煎煮0.5～1.0h，过滤，合并两次的滤液。在80℃条件下减压浓缩水提液，然后边搅拌边加入4倍体积70％乙醇，静置12h；分离沉淀，70％乙醇洗涤沉淀3次，真空冷冻干燥获得多糖样品。
在具体实施方式中，各试验试剂、仪器、动物、原料等均可由市场购得。其中，雄性sd大鼠，体重180～220g，由湖北省疾病预防与控制中心提供；肉桂多糖(生产日期：2016年8月15日)、巴戟天多糖(生产日期：2016年9月25日)、益智仁多糖(生产日期：2016年9月25日)、白术多糖(生产日期：2016年9月25日)、熟地多糖(生产日期：2016年9月25日)、枸杞多糖(生产日期：2016年9月25日)均由无限极(中国)有限公司提供；氢化可的松注射液，2ml/10mg/支，10支/盒，华中药业股份有限公司，国药准字h42021507；电子分析天平，bs124s，德国startorius公司；超低温冷冻冰箱，美国thermofisherscientific；超纯水机，mill-qⅱ，milipore，bedford，ma，usa.。
如未特别说明，在试验中所有多糖组分均采用相同方法在相同环境下提取获得。
以下就本发明所提供的一种多糖组合物及其制备方法和应用做进一步说明。
实施例1：本发明所述多糖组合物
按照水提醇沉法制备各多糖组分，称取肉桂多糖2g、巴戟天多糖2g、益智仁多糖2g、白术多糖1g、熟地多糖5g、枸杞多糖3g，混合制得多糖组合物。
实施例2：本发明所述多糖组合物
按照水提醇沉法制备各多糖组分，称取肉桂多糖2g、巴戟天多糖1g、益智仁多糖1g、白术多糖2g、熟地多糖1g、枸杞多糖2g，混合制得多糖组合物。
实施例3：本发明所述多糖组合物
按照水提醇沉法制备各多糖组分，称取肉桂多糖1g、巴戟天多糖2g、益智仁多糖2g、白术多糖2g、熟地多糖1g、枸杞多糖2g，混合制得多糖组合物。
实施例4：本发明所述多糖组合物
按照水提醇沉法制备各多糖组分，称取肉桂多糖1g、巴戟天多糖2g、益智仁多糖2g、白术多糖2g、熟地多糖5g、枸杞多糖4g，混合制得多糖组合物。
实施例5：本发明所述多糖组合物功效试验
1、动物分组及处理
分组：雄性sd大鼠(体重180-220g)随机分为正常对照组(简称正常组)、模型组(简称模型组)、肉桂多糖组、巴戟天多糖组、益智仁多糖组、白术多糖组、熟地多糖组、枸杞多糖组、多糖组合i组、多糖组合ii组、多糖组合iii组、多糖组合iv组、多糖组合v组、多糖组合vi组。其中，多糖组合i组(即实施例1，按照组比例为2:2:2:1:5:3的配比获得)、多糖组合ii组(即实施例2，按照组比例为2:1:1:2:1:2的配比获得)、多糖组合iii组(即实施例3，按照组比例为1:2:2:2:1:4的配比获得)、多糖组合iv组(即实施例4，按照组比例为1:2:2:2:5:4的配比获得)、多糖组合v组(即对比例1，按照肉桂多糖、巴戟天多糖、益智仁多糖、白术多糖、熟地多糖、枸杞多糖比例为1:1:1:6:12:10的配比获得)、多糖组合vi组(即对比例2，按照山茱萸多糖、肉桂多糖、牡丹皮多糖、枸杞多糖、女贞子多糖、熟地多糖比例为1:2:2:3:4:6的配比获得)、多糖组合vii组(即对比例3，按照肉桂多糖、巴戟天多糖、益智仁多糖、熟地多糖、枸杞多糖比例为2:2:2:5:3的配比获得)。每组动物10只。
处理：1)造模：除正常组臀部肌肉注射等体积生理盐水，其他组别臀部肌肉注射氢化可的松注射液(2.5mg/100g)，每日1次，自由饮食，连续15天。2)干预：正常组每日灌胃等体积生理盐水；模型组在造模同时每天灌胃等体积生理盐水；药物组造模的同时每天灌胃相应的多糖溶液，给药剂量为85mg/kg。共干预4周。
整个实验过程中控制好给药时间，注意保持实验环境的安静和实验装置的清洁，从而减少外界环境对实验结果的影响。
2、数据分析
实验结果皆以均数±标准差(±s)表示，均采用spss20.0统计软件进行统计学处理。先进行正态性检验，正态分布数据两组以上的比较，采用单因素方差分析，组间两两比较，方差齐性的采用其项下的lsd检验；方差不齐的则采用其项下的dunnett’st3(3)检验。非正态分布数据采用非参数检验，两组以上的比较，采用kruskal-wallis1-wayanova(ksamples)进行检验，组间两两比较，采用其项下的stepwisestep-down检验。以上均采用levene法进行方差齐性检验。
假设检验采用双侧检验，检验水准为0.05。显著意义标识为p≤0.05。
3、结果
(1)对阳虚模型大鼠一般情况的影响
与正常对照组比较，各造模组大鼠从造模第5天开始出现自由活动减少，喜欢扎堆，肛周污秽等表现。至实验结束时，模型组大鼠大多明显消瘦，毛稀疏、缺少光泽，采食及饮水量均减少，大便稀，下腹部皮毛潮湿，而其他给药组脱毛现象减少，饮食、饮水、活动情况均较好，与正常组差异不明显。
(2)对阳虚模型大鼠体重的影响
实验结束后称取动物体重，结果见表1。与正常组比较，模型组体重显著降低(p<0.01)；与模型组比较，除熟地多糖组外，其他多糖组体重显著增加(p<0.05)，4个多糖组合(多糖组合i组、多糖组合ii组、多糖组合iii组、多糖组合iv组)对大鼠体重增长的恢复作用明显强于多糖单独使用以及其他多糖组合。
表1多糖对阳虚模型大鼠体重的影响(mean±sd，n＝10)
注：与正常组比较，#p＜0.05，##p＜0.01；与模型组比较，*p＜0.05，**p＜0.01。
(3)对阳虚大鼠下丘脑—垂体—肾上腺素轴(hpa)和下丘脑—垂体—甲状腺轴(hpt)的影响
实验结束后称取动物体重，水合氯醛麻醉后心尖取血至抗凝管，静置30分钟，3000r/min离心10分钟，取上层血浆，置于-80℃冰箱中保存备用。测定血浆中环腺苷酸(camp)、环磷鸟嘌呤核苷(cgmp)、促肾上腺皮质激素释放激素(crh)、促肾上腺皮质激素(acth)含量、血清皮质醇(cort)、血清游离三碘甲腺原氨酸(ft3)、血清游离甲状腺素(ft4)。
表2可以看出，与正常组比较，臀部肌肉注射氢化可的松注射液可致模型组大鼠hpa轴功能低下，即crh、acth、cort均显著下降(p<0.01)，hpt轴功能下降，即ft3、ft4均显著下降(p<0.01)。各多糖组对hpa及hpt轴均有一定的改善作用，与模型组比较，各多糖组crh、acth、cort、ft3、ft4水平显著上升，表明各多糖组可增强大鼠hpa轴亢进功能，增强hpt功能。但是综合hpa轴及hpt轴数据，4个多糖组合(多糖组合i组、多糖组合ii组、多糖组合iii组、多糖组合iv组)对大鼠hpa轴及hpt轴功能的调节作用明显强于多糖单独使用以及其他多糖组合。
表2多糖对阴虚模型大鼠hpa及hpt值的影响(mean±sd，n＝10)
注：与正常组比较，#p＜0.05，##p＜0.01；与模型组比较，*p＜0.05，**p＜0.01。
(4)对阳虚模型大鼠血管氧化相关因子camp、cgmp的影响
实验结束后称取动物体重，水合氯醛麻醉后心尖取血至抗凝管，静置30分钟，3000r/min离心10分钟，取上层血浆，置于-80℃冰箱中保存备用。测定血浆中环腺苷酸(camp)、环磷鸟嘌呤核苷(cgmp)含量。
由表3可知，与正常组比较，模型组大鼠血浆camp显著降低、cgmp显著升高、camp/cgmp显著降低，各多糖组均能上调大鼠camp水平、下调cgmp水平，说明各多糖组均能缓解camp、cgmp紊乱引起的症状，但是综合camp、cgmp、camp/cgmp数据，4个多糖组合(多糖组合i组、多糖组合ii组、多糖组合iii组、多糖组合iv组)对大鼠camp、cgmp、camp/cgmp的调节作用明显强于多糖单独使用及其他多糖组合。
表3多糖对阳虚模型大鼠血管氧化相关因子camp、cgmp(mean±sd，n＝10)
注：与正常组比较，#p＜0.05，##p＜0.01；与模型组比较，*p＜0.05，**p＜0.01。
以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。