本发明涉及生物技术领域，且特别是涉及一种胎盘水解超滤液及其制备方法、应用和女性护理凝胶。
背景技术：
成年女性随着年龄的增长，卵巢功能通常从28岁开始渐渐衰退，伴随的是皮肤容颜和心态的渐渐衰老。口服和注射各种性激素制剂可以替代衰退的卵巢功能，但是其对卵巢功能的抑制导致严重的“停药反跳”，目前已经被全面禁用。另外，口服一些类似性激素分子的天然提取物如植物甾醇，虽然对延缓卵巢功能的衰退有一定作用，但由于植物甾醇分子结构的差异，加上口服过程中消化系统对有效成分的破坏，作用十分有限。
因此现有技术还有待于改进和发展。
技术实现要素：
有鉴于此，本发明提供一种胎盘水解超滤液及其制备方法、应用和女性护理凝胶，旨在解决现有技术中通过口服或者注射各种性激素制剂导致干扰人体正常内分泌功能的潜在危害。
本发明解决技术问题所采用的技术方案如下：
一种胎盘水解超滤液的制备方法，包括以下步骤：
步骤1、称取新鲜或者冷冻胎盘，于洁净无菌环境下剔除筋膜及大血管，在4℃-10℃的无菌冰水中冲洗干净，得到清洗胎盘；
步骤2、将步骤1所得的清洗胎盘剪成小块，在捣碎机中绞碎，得到粉碎胎盘；
步骤3、向步骤2所得的粉碎胎盘中加入与步骤1中的新鲜或者冷冻胎盘等重的小分子团水，放置于无菌不锈钢器皿中，密封，于-20℃或以下的温度速冻过夜，然后置于4℃-10℃的环境下完全融化，反复速冻与融化操作多次，得到水解液；
步骤4、将步骤3中得到的水解液于离心机中进行离心30分钟-60分钟，获得上清液；其中，所述离心机的离心速度至少为3500rpm；
步骤5、将步骤4获得的上清液经定性滤纸抽滤后获得粗滤液，将粗滤液从10kd超滤柱中超滤后，弃穿透液留漏出液，获得分子量小于10kd的漏出液；将所述漏出液从1kd超滤柱中超滤后，弃漏出液留穿透液，获得分子量在1kd-10kd的超滤液。
所述的胎盘水解超滤液的制备方法，其中，所述步骤1中的冷冻胎盘需预先在4℃-10℃的环境下完全解冻。
一种胎盘水解超滤液，利用如上所述的胎盘水解超滤液的制备方法制备获得。
一种如上所述的胎盘水解超滤液的应用，所述胎盘水解超滤液在制备护肤品、女性生殖道局部洗消产品或者女性卵巢护理美容产品中的应用。
一种女性护理凝胶，其组分包括胎盘水解超滤液、小分子团水、保湿剂、皮肤调理剂、增稠剂、ph调节剂以及清凉剂，所述胎盘水解超滤液为如上所述的胎盘水解超滤液。
所述的女性护理凝胶，其中，按照各个组分在该女性护理凝胶中的质量百分含量计，包括：
所述胎盘水解超滤液，含量为30％～70％；
所述小分子团水，含量为10％～50％；
所述保湿剂，含量为8％～20％；
所述皮肤调理剂，含量为6％～9％；
所述增稠剂，含量为1％～3％；
所述ph调节剂，含量为0.05％～0.15％；
所述清凉剂，含量为0.02％～0.2％。
所述的女性护理凝胶，其中，所述保湿剂为甘油、丙二醇或者丁二醇中的一种或者两种以上的混合物。
所述的女性护理凝胶，其中，所述皮肤调理剂为甘油聚甲基丙烯酸酯、乙醇、氢氧化铵、n-丁醇、异丙醇、高山火绒草花叶提取物、苦参根提取物、鱼腥草提取物、水解胶原或者透明质酸中的一种或者两种以上的混合物。
所述的女性护理凝胶，其中，所述增稠剂为羟乙基纤维素或者聚丙烯酸钠接枝淀粉中的一种或者两种的混合物。
一种如上所述的女性护理凝胶的制备方法，包括以下步骤：
步骤1、将胎盘水解超滤液、皮肤调理剂、清凉剂依次添加到小分子团水中，至完全溶解，混合均匀得到第一混合物；
步骤2、将保湿剂、增稠剂依次加入到步骤1中的第一混合物中，使其完全溶解，混合均匀得到第二混合物；
步骤3、将ph调节剂加入到第二混合物中，得到所述女性护理凝胶。
与现有技术相比，本发明具有以下优点：
通过将胎盘水解超滤液作为该女性护理凝胶的主要原料,且该胎盘水解超滤液采用特殊工艺制备，分子量在1kd至10kd，该胎盘水解超滤液有效去除了分子量在1kd以下的游离激素，不会导致“停药反跳”；且富含各种小分子有效成分如生长刺激和调节因子，通过给妇女生殖道局部用药，经黏膜吸收入血，快速到达卵巢，对恢复卵巢细胞活力、刺激卵巢细胞再生有特殊效力；另外，明显提升妇女卵巢各项功能，延缓卵巢功能的衰退，纠正女性失调的内分泌功能，使女性的身心更年轻、更健康。
具体实施方式
为使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚、明确，以下结合实施例对本发明进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。
本发明提供了一种胎盘水解超滤液的制备方法，包括以下步骤：
步骤1、称取新鲜或者冷冻胎盘，于洁净无菌环境下剔除筋膜及大血管，在4℃-10℃的无菌冰水中冲洗干净，得到清洗胎盘；
步骤2、将步骤1所得的清洗胎盘剪成小块，在捣碎机中绞碎，得到粉碎胎盘；
步骤3、向步骤2所得的粉碎胎盘中加入与步骤1中的新鲜或者冷冻胎盘等重的ph大于9.6的小分子团水，放置于无菌不锈钢器皿中，密封，于-20℃或以下的温度速冻过夜，然后置于4℃-10℃的环境下完全融化，反复速冻与融化操作多次，得到水解液；
步骤4、将步骤3中得到的水解液于离心机中进行离心30分钟-60分钟，获得上清液；其中，所述离心机的离心速度至少为3500rpm；
步骤5、将步骤4获得的上清液经定性滤纸抽滤后获得粗滤液，将粗滤液从10kd超滤柱中超滤后，弃穿透液留漏出液，获得分子量小于10kd的漏出液；将所述漏出液从1kd超滤柱中超滤后，弃漏出液留穿透液，获得分子量在1kd-10kd的超滤液。
其中，步骤1中的冷冻胎盘需预先在4℃-10℃的环境下完全解冻。
所述步骤2中得到的粉碎胎盘的粒度为60目-120目。
下面给出本发明胎盘水解超滤液的制备方法的几个实施例。
实施例1
步骤1、称取人的新鲜胎盘，于洁净无菌环境下剔除筋膜及大血管，在4℃的无菌冰水中冲洗干净，得到清洗胎盘；其中，所述粉碎胎盘的粒度为60目；
步骤2、将步骤1所得的清洗胎盘剪成小块，在捣碎机中绞碎，得到粉碎胎盘；
步骤3、向步骤2所得的粉碎胎盘中加入与步骤1中的新鲜胎盘等重的ph为12.5的小分子团水，放置于无菌不锈钢器皿中，密封，于-20℃的温度速冻过夜，然后置于4℃的环境下完全融化，反复速冻与融化操作3次，得到水解液；
其中，所述小分子团水是由3-6个水分子缔结而成，其运动速度快，具有极强的渗透力、扩散力、溶解力。小分子团水的ph值越高，水解的效率就越高。
步骤4、将步骤3中得到的水解液于离心机中进行离心30分钟，获得上清液；其中，所述离心机的离心速度为3500rpm；
步骤5、将步骤4获得的上清液经定性滤纸抽滤后获得滤液，将滤液从10kd超滤柱中过滤后，获得分子量小于10kd的漏出液；将所述漏出液从1kd超滤柱中过滤后，获得分子量为1kd-10kd的胎盘水解超滤液；
实施例2
步骤1、称取动物的冷冻胎盘，预先在4℃的环境下完全解冻，然后于洁净无菌环境下剔除筋膜及大血管，在10℃的无菌冰水中冲洗干净，得到清洗胎盘；
步骤2、将步骤1所得的清洗胎盘剪成小块，在捣碎机中绞碎，得到粉碎胎盘；其中，所述粉碎胎盘的粒度为120目；
步骤3、向步骤2所得的粉碎胎盘中加入与步骤1中的冷冻胎盘等重的ph为10的小分子团水，放置于无菌不锈钢器皿中，密封，于-25℃的温度速冻过夜，然后置于7℃的环境下完全融化，反复速冻与融化操作4次，得到水解液；
步骤4、将步骤3中得到的水解液于离心机中进行离心45分钟，获得上清液；其中，所述离心机的离心速度为4000rpm；
步骤5、将步骤4获得的上清液经定性滤纸抽滤后获得粗滤液，将粗滤液从10kd超滤柱中超滤后，弃穿透液留漏出液，获得分子量小于10kd的漏出液；将所述漏出液从1kd超滤柱中超滤后，弃漏出液留穿透液，获得分子量在1kd-10kd的超滤液。
实施例3
步骤1、称取动物的冷冻胎盘，预先在10℃的环境下完全解冻，然后于洁净无菌环境下剔除筋膜及大血管，在5℃的无菌冰水中冲洗干净，得到清洗胎盘；
步骤2、将步骤1所得的清洗胎盘剪成小块，在捣碎机中绞碎，得到粉碎胎盘；其中，所述粉碎胎盘的粒度为80目；
步骤3、向步骤2所得的粉碎胎盘中加入与步骤1中的冷冻胎盘等重的ph为9.6的小分子团水，放置于无菌不锈钢器皿中，密封，于-30℃的温度速冻过夜，然后置于10℃的环境下完全融化，反复速冻与融化操作5次，得到水解液；
步骤4、将步骤3中得到的水解液于离心机中进行离心60分钟，获得上清液；其中，所述离心机的离心速度为5000rpm；
步骤5、将步骤4获得的上清液经定性滤纸抽滤后获得粗滤液，将粗滤液从10kd超滤柱中超滤后，弃穿透液留漏出液，获得分子量小于10kd的漏出液；将所述漏出液从1kd超滤柱中超滤后，弃漏出液留穿透液，获得分子量在1kd-10kd的超滤液。
本发明还提供了一种胎盘水解超滤液，利用如上所述的胎盘水解超滤液的制备方法制备获得。
本发明的胎盘水解超滤液通过强极性的小分子团水可以强力水解胎盘的生物大分子，避免了传统技术中由于采用强酸强碱来水解的做法导致引入污染物和其它有害因子；同时结合了-20℃与4℃的反复多次冻融，避免了高温对生物活性物质的破坏，最大限度地保留了胎盘中生物分子的活性；且配合使用10kd和1kd两个超滤柱进行分子筛截留操作，使得最终得到的胎盘水解超滤液尽可能地保留了胎盘中小分子物质的生物活性，同时又剔除了胎盘中游离的激素成分，消除了游离激素干扰人体正常内分泌功能的潜在危害。
对本发明的胎盘水解超滤液做四十一种糖皮质激素检测实验，以证明其不含任何皮质激素，四十一种糖皮质激素的种类见表1所示。
表1
四十一种糖皮质激素
利用gb/t24800.2-2009，液相色谱/串联质谱法的测定方法对本发明的胎盘水解超滤液做四十一种糖皮质激素检测实验，结果显示均未检测出表1所示的四十一种糖皮质激素。
由此可知，本发明制备的胎盘水解超滤液不含任何皮质激素，长期使用不会伤害皮肤细胞。
本发明提供了一种胎盘水解超滤液的应用，所述胎盘水解超滤液在制备护肤品、女性生殖道局部洗消产品或者女性卵巢护理美容产品中的应用。
本发明还提供了一种女性护理凝胶，其组分包括胎盘水解超滤液、小分子团水、保湿剂、皮肤调理剂、增稠剂、ph调节剂以及清凉剂，所述胎盘水解超滤液为上述具体实施例中所述的胎盘水解超滤液，在此不再赘述。
其中，所述胎盘水解超滤液作为该女性护理凝胶的主要原料(卵巢护理剂),其采用特殊工艺制备，分子量在1kd至10kd，该胎盘水解超滤液有效去除了分子量在1kd以下的游离激素，不会导致“停药反跳”；且富含各种小分子有效成分如生长刺激和调节因子，通过给妇女生殖道局部用药，经黏膜吸收入血，快速到达卵巢，对恢复卵巢细胞活力、刺激卵巢细胞再生有特殊效力；另外，明显提升妇女卵巢各项功能，延缓卵巢功能的衰退，纠正女性失调的内分泌功能，使女性的身心更年轻、更健康。
用本发明制备的女性护理凝胶应用于试用者,以证明本发明的女性护理凝胶的功效，具体操作如下所示：
1、试用志愿者选择
本次试用共119名志愿者参加，均为已婚，年龄31-57岁(中位数47.5岁),试用前均签署知情同意书。选择试用一个周期者27名，选择试用两个周期者31名，选择试用三个周期者61名。所有119名志愿者均需提交试用前后的血清e2检验单，并完成“试用效果体验调查表”的填写。
2、试用凝胶的选择
选用本发明的女性护理凝胶
3、试用方法
(1)所有试用者建立档案，载明年龄、月经史和婚育史；
(2)所有试用者于月经干净后第7天采静脉血，送当地三甲医院检验血清雌二醇e2水平；
(3)所有试用者于月经干净后第8天开始试用凝胶，可以自主选择隔1天用一次或隔2天用一次，每次用量1支(5ml)，至行经期停用为第一个周期；
(4)用完第一个周期后自愿停止使用的，于本次月经干净后第7天采静脉血，送当地三甲医院检验血清雌二醇e2水平；
(5)用完一个周期后自愿继续试用的，于本次月经干净后第8天继续试用凝胶，同样隔1天用一次或隔2天用一次(跟第一个周期保持一致)，每次用量1支(5ml)，至行经期停用为第二个周期；
(6)用完第二个周期后自愿停止使用的，于本次月经干净后第7天采静脉血，送当地三甲医院检验血清雌二醇e2水平；
(7)用完第二个周期后自愿继续试用的，于本次月经干净后第8天继续试用凝胶，同样隔1天用一次或隔2天用一次(跟第一个周期保持一致)，每次用量1支(5ml)，至行经期停用为第三个周期；
(8)用完第三个周期后均于本次月经干净后第7天采静脉血，送当地三甲医院检验血清雌二醇e2水平；
(9)每试用完一个周期，均需试用者填写“试用效果体验调查表”如表2所示：
表2
卵巢护理凝胶试用效果体验调查表
4.结果统计、分析
(1)试用一般情况说明
本次所有119名志愿者均提交了试用前后的血清e2检验单，且均完成了“试用效果体验调查表”的填写。
(2)试用前后血清雌激素水平的统计、分析
将试用1个月、2个月和3个月的试用者在试用凝胶前后血清e2水平的值做配对比较，结果如表3所示：
表3
试用者在试用凝胶前后血清e2水平的值
由表3所示,可以看出试用凝胶后血清e2均有不同程度提高。试用1个月者77.8％的试用者血清e2水平显著提高，试用2个月者90.3％，试用3个月者达95.1％。
(3)试用者使用体验的统计、分析
将试用1个月、2个月和3个月的试用者在试用凝胶前后色斑淡化、皱纹减少、滋润、更光滑、更有弹性和光泽的值做配对比较，结果如表4所示：
表4
由表4所示，可以看出试用者效果最快、最明显的体验是“滋润”，其次是“更光滑、更有弹性和光泽”，它们在试用三个月者的体验均达到100％。“皱纹减少”的体验在试用2个月后即达64.5％，三个月达80.3％。“色斑淡化”的体验在2个月达到58.1％，3个月达到65.6％。
由于血清e2水平是卵巢功能的标志，其主要作用是维持月经周期和女性第二性征，其水平的提高可以使女性皮肤更嫩更白更有弹性，心态更年轻。综上所示，可以看出本试用调查的血清e2水平变化与试用者体验有正相关关系，说明本发明的女性护理凝胶可以显著调高卵巢功能，恢复成年女性第二性征。
优选的，按照各个组分在该女性护理凝胶中的质量百分含量计，包括：
所述胎盘水解超滤液，含量为30％～70％；
所述小分子团水，含量为10％～50％；
所述保湿剂，含量为8％～20％；
所述皮肤调理剂，含量为6％～9％；
所述增稠剂，含量为1％～3％；
所述ph调节剂，含量为0.05％～0.15％；
所述清凉剂，含量为0.02％～0.2％。
优选的，所述保湿剂为甘油、丙二醇或者丁二醇中的一种或者两种以上的混合物。所述皮肤调理剂为甘油聚甲基丙烯酸酯、乙醇、氢氧化铵、n-丁醇、异丙醇、高山火绒草花叶提取物、苦参根提取物、鱼腥草提取物、水解胶原或者透明质酸中的一种或者两种以上的混合物。
优选的，所述增稠剂为羟乙基纤维素或者聚丙烯酸钠接枝淀粉中的一种或者两种的混合物。所述清凉剂为冰片或者薄荷醇中的一种或者两种的混合物；所述ph调节剂为柠檬酸。
优选的，所述小分子团水的ph值为9.5。
本发明的女性护理凝胶的制备方法，包括以下步骤：
步骤1、将胎盘水解超滤液、皮肤调理剂、清凉剂依次添加到小分子团水中，至完全溶解，混合均匀得到第一混合物；
步骤2、将保湿剂、增稠剂依次加入到步骤1中的第一混合物中，使其完全溶解，混合均匀得到第二混合物；
步骤3、将ph调节剂加入到第二混合物中，得到所述女性护理凝胶。
下面以四个实施例对本发明女性护理凝胶的组分、制备方法做进一步详细的描述。
实施例1
本实施例中的女性护理凝胶，按照各个组分在该女性护理凝胶中的质量百分含量计，包括：
胎盘水解超滤液，含量为30％；
小分子团水，含量为37.65％；
保湿剂，含量为20％；
皮肤调理剂，含量为9％；
增稠剂，含量为3％；
ph调节剂，含量为0.15％；
清凉剂，含量为0.2％。
本实施例中的女性护理凝胶的制备方法如下所示：
步骤1、将含量为30％的胎盘水解超滤液、含量为9％的皮肤调理剂、含量为0.2％的清凉剂依次添加到含量为37.65％的小分子团水中，至完全溶解，混合均匀得到第一混合物；
步骤2、将含量为20％的保湿剂、含量为3％的增稠剂依次加入到步骤1中的第一混合物中，使其完全溶解，混合均匀得到第二混合物；
步骤3、将含量为0.15％的ph调节剂加入到第二混合物中，得到所述女性护理凝胶。
实施例2
本实施例中的女性护理凝胶，按照各个组分在该女性护理凝胶中的质量百分含量计，包括：
胎盘水解超滤液，含量为70％；
小分子团水，含量为10％；
保湿剂，含量为12.93％；
皮肤调理剂，含量为6％；
增稠剂，含量为1％；
ph调节剂，含量为0.05％；
清凉剂，含量为0.02％。
本实施例中的女性护理凝胶的制备方法如下所示：
步骤1、将含量为70％的胎盘水解超滤液、含量为6％的皮肤调理剂、含量为0.02％的清凉剂依次添加到含量为10％的小分子团水中，至完全溶解，混合均匀得到第一混合物；
步骤2、将含量为12.93％的保湿剂、含量为1％的增稠剂依次加入到步骤1中的第一混合物中，使其完全溶解，混合均匀得到第二混合物；
步骤3、将含量为0.05％的ph调节剂加入到第二混合物中，得到所述女性护理凝胶。
实施例3
本实施例中的女性护理凝胶，按照各个组分在该女性护理凝胶中的质量百分含量计，包括：
胎盘水解超滤液，含量为34.8％；
小分子团水，含量为50％；
保湿剂，含量为8％；
皮肤调理剂，含量为6％；
增稠剂，含量为1％；
ph调节剂，含量为0.1％；
清凉剂，含量为0.1％。
本实施例中的女性护理凝胶的制备方法如下所示：
步骤1、将含量为34.8％的胎盘水解超滤液、含量为6％的皮肤调理剂、含量为0.1％的清凉剂依次添加到含量为50％的小分子团水中，至完全溶解，混合均匀得到第一混合物；
步骤2、将含量为8％的保湿剂、含量为1％的增稠剂依次加入到步骤1中的第一混合物中，使其完全溶解，混合均匀得到第二混合物；
步骤3、将含量为0.1％的ph调节剂加入到第二混合物中，得到所述女性护理凝胶。
实施例4
本实施例中的女性护理凝胶，按照各个组分在该女性护理凝胶中的质量百分含量计，包括：
胎盘水解超滤液，含量为50％；
小分子团水，含量为24.23％；
保湿剂，含量为16％；
皮肤调理剂，含量为7.5％；
增稠剂，含量为2％；
ph调节剂，含量为0.12％；
清凉剂，含量为0.15％。
本实施例中的女性护理凝胶的制备方法如下所示：
步骤1、将含量为50％的胎盘水解超滤液、含量为7.5％的皮肤调理剂、含量为0.15％的清凉剂依次添加到含量为24.23％的小分子团水中，至完全溶解，混合均匀得到第一混合物；
步骤2、将含量为16％的保湿剂、含量为2％的增稠剂依次加入到步骤1中的第一混合物中，使其完全溶解，混合均匀得到第二混合物；
步骤3、将含量为0.15％的ph调节剂加入到第二混合物中，得到所述女性护理凝胶。
与现有技术相比，本发明的女性护理凝胶具有以下优点：
通过将胎盘水解超滤液作为该女性护理凝胶的主要原料,且该胎盘水解超滤液采用特殊工艺制备，分子量在1kd至10kd，该胎盘水解超滤液有效去除了分子量在1kd以下的游离激素，不会导致“停药反跳”；且富含各种小分子有效成分如生长刺激和调节因子，通过给妇女生殖道局部用药，经黏膜吸收入血，快速到达卵巢，对恢复卵巢细胞活力、刺激卵巢细胞再生有特殊效力；另外，明显提升妇女卵巢各项功能，延缓卵巢功能的衰退，纠正女性失调的内分泌功能，使女性的身心更年轻、更健康。
最后说明的是，以上实施例仅用来说明本发明的技术方案而非限制，尽管参照较佳实施例对本发明进行了详细说明，本领域的普通技术人员应当理解，可以对本发明的技术方案进行修改或者等同替换，而不脱离本发明技术方案的宗旨和范围，其均应涵盖在本发明的权利要求范围当中。