一种纳米花状钯‑金包覆的白桦脂酸脂质体及其制备方法与流程

本发明属于医药技术领域，特别涉及一种纳米脂质体及其制备方法。

背景技术：

癌症是当前威胁人类健康的重大恶性疾病之一，目前所使用的传统化疗药物均存在严重的毒副作用，而纳米技术的出现为癌症的治疗提供了新思路。其中，脂质体是一种无毒，生物相容性很好，极具前景的纳米载药系统。但是，为了达到更好的治疗效果，常规的脂质体还存在一些缺陷，例如不稳定，靶向性差以及药物释放的不可控性等。

近年来，各种光热材料在生物医药领域逐渐得到应用。其中，近红外光响应的纳米材料研究最为广泛，例如贵金属纳米材料(金纳米材料)，石墨烯，碳纳米管以及稀土上转换发光材料。近红外光的“生物组织窗口”在650-900nm之间，组织对其吸收和散射小，进而能够达到肿瘤组织深处并对正常组织无毒副作用。这些光热材料的工作原理是将光能很好的转化为热能，从而抑制热敏的肿瘤细胞生长。但是，单纯的光热治疗不足以杀死肿瘤细胞。因此，开发新型的治疗方式以及研究针对癌症的高效联合治疗成为现阶段癌症治疗领域亟待解决的问题。

技术实现要素：

本发明的目的在于提供一种操作简单、反应易控制、重复性高，制备的纳米脂质体更易于在肿瘤部位积累、各向异性比较好、更加高效、低毒的纳米花状钯-金包覆的白桦脂酸脂质体及其制备方法。

本发明主要是利用乙醇注入法制备谷胱甘肽修饰的白桦脂酸纳米脂质体；然后将谷胱甘肽修饰的白桦脂酸纳米脂质体与钯纳米粒子溶液混合，避光孵育后加入氯化金溶液和盐酸羟胺溶液，得到药物释放可控且热疗/化疗协同治疗的纳米花状钯-金包覆的白桦脂酸脂质体。

本发明的白桦脂酸脂质体是一种在白桦脂酸纳米脂质体表面形成纳米花状钯-金合金壳体的纳米脂质体，其粒径为80-100nm，近红外吸收波长为500-900nm。

上述白桦脂酸脂质体的制备方法如下：

1、制备谷胱甘肽修饰的白桦脂酸纳米脂质体

(1)各原材料的质量比为：大豆卵磷脂：胆固醇：白桦脂酸＝12～20:1.3～2.1:1，按每毫升无水乙醇加入上述三种溶质质量的总和为14.3～23.1mg，加入无水乙醇并超声，超声功率为40～80W，超声时间为10-20min，使其完全溶解得到脂质溶液；

(2)取谷胱甘肽溶解于去离子水中，得到谷胱甘肽溶液，每毫升去离子水中含0.3～1mg谷胱甘肽；以脂质溶液与谷胱甘肽溶液的体积比为1:1.5～3.5，磁力搅拌并且温度控制在38～47℃，将步骤(1)获得的脂质溶液逐滴加入到的谷胱甘肽溶液中，得到脂质体悬液；

(3)将步骤(2)得到的脂质体悬液在28～35℃，100～130rpm，3～7小时进行磁力搅拌，除去脂质体悬液中的无水乙醇，得到谷胱甘肽修饰的白桦脂酸纳米脂质体。

2、制备纳米花状钯-金合金包覆的白桦脂酸纳米脂质体

(1)以氯化钯溶液与抗坏血酸溶液的体积比为100:1～4的比例，将摩尔浓度为50～100mM的抗坏血酸溶液，滴加到摩尔浓度为0.5～1.5mM的氯化钯溶液中，迅速混合均匀，直至颜色变为浅绿色，即得到钯纳米粒子溶液，置于常温贮存，备用；

(2)将步骤(1)得到的钯纳米粒子溶液与步骤1制得的谷胱甘肽修饰的白桦脂酸纳米脂质体按1:1～5的体积比混合均匀，置于摇床，25～30℃，85～115rpm，避光孵育8～16小时，即得到钯纳米粒子包覆的白桦脂酸纳米脂质体；

(3)按氯化金溶液与钯纳米粒子包覆的白桦脂酸纳米脂质体的体积比为1:0.5～1.5的比例，向步骤(2)获得的钯纳米粒子包覆的白桦脂酸纳米脂质体中加入摩尔浓度为2～8mM氯化金溶液，充分混匀；随后向混合液中加入摩尔浓度为50～100mM盐酸羟胺溶液，充分混合均匀，盐酸羟胺溶液与氯化金溶液的体积比为1～5：10，将其置于摇床，25～30℃，85～115rpm，孵育6～12小时，制得纳米花状钯-金包覆的白桦脂酸脂质体。

在常规药物脂质体的基础上，制备了谷胱甘肽修饰的白桦脂酸脂质体。纳米花状钯-金合金包覆的白桦脂酸纳米脂质体在500-900nm宽波长范围内处存在近红外吸收，从而具有良好的光热转化性能。通过近红外光照射升高脂质体温度，进而促进所包载药物在靶位点的可控释放，同时，能够利用光热引起的升温导致肿瘤细胞发生热融合和死亡，可见，该载药系统可将光热治疗与化疗相结合，实现癌症的协同治疗效果，与单一光热疗技术或单纯化疗相比更加高效，且对人体的副作用小。

本发明与现有技术相比具有如下优点：

1、在常温、常压及温和条件下完成制备，操作简单，反应易控制，重复性高。

2、制备的纳米花状钯-金包覆的白桦脂酸脂质体的粒径更易于在肿瘤部位积累，达到更好的治疗效果。

3、制备的纳米花状钯-金包覆的白桦脂酸脂质体与现有的球壳状药物载体相比，各向异性比较好，其在500-900nm宽波长范围内处存在近红外吸收，具有良好的光热转化性能，使包载的抗肿瘤药物白桦脂酸实现可控释放。

4、制备的纳米花状钯-金包覆的白桦脂酸脂质体在近红外激光照射下，能够将光热治疗与化疗结合协同治疗癌症，与单一光热疗技术或单纯化疗相比更加高效、低毒。

附图说明

图1是本发明实施例1制得的纳米花状钯-金包覆的白桦脂酸脂质体透射电子显微镜图。

图2是本发明实施例2制得的纳米花状钯-金包覆的白桦脂酸脂质体粒径分布图。

图3是本发明实施例3制得的纳米花状钯-金包覆的白桦脂酸脂质体紫外可见光谱图。

图4是本发明实施例3制得的纳米花状钯-金包覆的白桦脂酸脂质体的光热转化图。

具体实施方式

实施例1

将4mg白桦脂酸(购自南京泽朗生物科技有限公司)、5.2mg胆固醇(购自天津市大茂化学仪器供应站)和48mg大豆卵磷脂(购自上海艾韦特医药科技有限公司)，溶解于4mL无水乙醇中并进行超声，超声功率40W，超声10min，得到脂质溶液；取6mg谷胱甘肽溶解于20mL去离子水中，得到谷胱甘肽溶液；38℃磁力搅拌，将10mL脂质溶液逐滴加入到的15mL谷胱甘肽溶液中，得到脂质体悬液；随后将得到的脂质体悬液在28℃，100rpm，磁力搅拌3小时，以除去脂质体悬液中的无水乙醇，得到谷胱甘肽修饰的白桦脂酸纳米脂质体；

将10μL摩尔浓度为50mM的抗坏血酸溶液滴加到1000μL摩尔浓度为0.5mM的氯化钯溶液中，迅速混合均匀，直至颜色变为浅绿色，即得到钯纳米粒子溶液，置于常温贮存，备用；将得到的钯纳米粒子溶液与谷胱甘肽修饰的白桦脂酸纳米脂质体按1:1的体积比混合均匀，置于摇床，25℃，85rpm，避光孵育8小时，即得到钯纳米粒子包覆的白桦脂酸纳米脂质体。

取500μL钯纳米粒子包覆的白桦脂酸纳米脂质体，加入1000μL摩尔浓度为2mM的氯化金溶液，充分混匀，随后将向混合液中加入100μL摩尔浓度为50mM的盐酸羟胺溶液，充分混合均匀，将其置于摇床，25℃，85rpm，孵育6小时，即得到纳米花状钯-金包覆的白桦脂酸脂质体。

应用透射电子显微镜对纳米花状钯-金包覆的白桦脂酸脂质体进行表征，如图1所示，可以看出在白桦脂酸纳米脂质体表面形成花状钯-金合金壳体，形貌规则。

实施例2

将4mg白桦脂酸(购自南京泽朗生物科技有限公司)、6.8mg胆固醇(购自天津市大茂化学仪器供应站)和64mg大豆卵磷脂(购自上海艾韦特医药科技有限公司)，溶解于4mL无水乙醇中并进行超声60W，15min，得到脂质溶液。取12mg谷胱甘肽溶解于20mL去离子水中，得到谷胱甘肽溶液；42℃磁力搅拌，将10mL脂质溶液逐滴加入到的25mL谷胱甘肽溶液中，得到脂质体悬液；随后将得到的脂质体悬液在31℃，115rpm，磁力搅拌5小时，以除去脂质体悬液中的无水乙醇，得到谷胱甘肽修饰的白桦脂酸纳米脂质体；

将25μL摩尔浓度为75mM的抗坏血酸溶液滴加到1000μL摩尔浓度为1mM的氯化钯溶液中，迅速混合均匀，直至颜色变为浅绿色，即得到钯纳米粒子溶液，置于常温贮存，备用；将得到的钯纳米粒子溶液与谷胱甘肽修饰的白桦脂酸纳米脂质体按1:3的体积比混合均匀，置于摇床，27℃，105rpm，避光孵育12小时，即得到钯纳米粒子包覆的白桦脂酸纳米脂质体；

取1000μL钯纳米粒子包覆的白桦脂酸纳米脂质体，加入1000μL摩尔浓度为5mM的氯化金溶液，充分混匀。随后将向混合液中加入300μL摩尔浓度为75mM的盐酸羟胺溶液，充分混合均匀，将其置于摇床，27℃，105rpm，孵育9小时，即得到纳米花状钯-金包覆的白桦脂酸脂质体。

采用激光粒度仪对纳米花状钯-金包覆的白桦脂酸脂质体进行表征，如图2所示，从粒径分析结果可知其粒径约在98nm，更有利于在肿瘤部位的积累，达到理想的治疗效果。

实施例3

将4mg白桦脂酸(购自南京泽朗生物科技有限公司)、8.4mg胆固醇(购自天津市大茂化学仪器供应站)和80mg大豆卵磷脂(购自上海艾韦特医药科技有限公司)，溶解于4mL无水乙醇中并进行超声80W，20min，得到脂质溶液；取20mg谷胱甘肽溶解于20mL去离子水中，得到谷胱甘肽溶液；47℃磁力搅拌，将10mL脂质溶液逐滴加入到的35mL谷胱甘肽溶液中，得到脂质体悬液。随后将得到的脂质体悬液在35℃，130rpm，磁力搅拌7小时，以除去脂质体悬液中的无水乙醇，得到谷胱甘肽修饰的白桦脂酸纳米脂质体；

将40μL摩尔浓度为100mM的抗坏血酸溶液，滴加到1000μL摩尔浓度为1.5mM的氯化钯溶液中，迅速混合均匀，直至颜色变为浅绿色，即得到钯纳米粒子溶液，置于常温贮存，备用；将得到的钯纳米粒子溶液与谷胱甘肽修饰的白桦脂酸纳米脂质体按1:5的体积比混合均匀，置于摇床，30℃，115rpm，避光孵育16小时，即得到钯纳米粒子包覆的白桦脂酸纳米脂质体；

取1500μL钯纳米粒子包覆的白桦脂酸纳米脂质体，加入1000μL摩尔浓度为8mM的氯化金溶液，充分混匀；随后将向混合液中加入500μL摩尔浓度为100mM的盐酸羟胺溶液，充分混合均匀，将其置于摇床，30℃，115rpm，孵育12小时，即得到纳米花状钯-金包覆的白桦脂酸脂质体。

采用紫外可见光谱仪对纳米花状钯-金包覆的白桦脂酸脂质体进行表征，如图3所示，可以看出当形成纳米花状钯-金合金壳体之后，其在500-900nm宽波长范围内处存在近红外吸收；同时，对纳米花状钯-金包覆的白桦脂酸脂质体光热转化进行检测，如图4所示，在10分钟时此纳米载药系统温度能够升高到51.3℃，因而具有良好的光热转化性能。