本发明涉及脂质体领域，具体而言，涉及一种脂质体及其制备方法。
背景技术：
脂质体(Oiposomes)一般由复合磷脂组成,拥有仿生物膜的双分子层结构。脂质体作为药物载体,可以包封水溶性和脂溶性物质,并且具有靶向性、缓释性、无免疫原性和易降解等突出的特点。
脂质体根据结构和所包含的双层磷脂膜层数,可分为单室脂质体和多室脂质体。由一层双分子层构成的称为单室脂质体,根据粒径的不同单室脂质体又可以细分为大单室脂质体(粒径在0.1～1μm之间)和小单室脂质体(粒径在0.02～0.08μm,亦称为纳米脂质体)。与单室脂质体对应,含有多层双分子层的脂质体被称为多室脂质体,粒径在1～5μm之间。
制备脂质体的基本条件是使用优级或性能良好的磷脂,常用的有天然和合成的。合成磷脂不易氧化,组成固定,一直被认为是最佳的脂质体膜材,但是其价格昂贵。天然磷脂按照来源分为蛋黄磷脂和大豆磷脂,其中大豆磷脂胆固醇含量较低,脂肪酸含量较高,以其为膜材制备的脂质体具有很好的流动性和渗透性,不仅有利穿透表面屏障,而且有利于引发细胞之间生化反应。
因而，以大豆磷脂为原料制备脂质体一直也是人们研究的重点所在，人们在这方面也做出了很多的探索和研究。然而，现有的由大豆磷脂制备脂质体的方法还有很多缺陷。例如，在制备过程中，由于磷脂在水中难以溶剂，因而会产生磷脂分散性差、容易生成水溶性颗粒以及粘性物体沉淀等现象；同时，所制得的脂质体稳定性差，必须在低温条件下保存，且保质期较短。
有鉴于此，特提出本发明。
技术实现要素：
本发明的第一目的在于提供一种脂质体的制备方法，所述方法中，通过在将磷脂和水搅拌混合后，再研磨和打磨，从而可以使得磷脂能够在水体中有效分散，并与水体混合，进而也使得所制得的脂质体具有良好的稳定性，并且能够在常温下长期保存不变质。
本发明的第二目的在于提供一种脂质体，本发明脂质体由本发明方法制备得到，因而具有脂质体稳定性好，可以长期常温保存不变质等优点。
为了实现本发明的上述目的，特采用以下技术方案：
一种脂质体制备方法，所述方法包括如下步骤：将水与磷脂搅拌混合后，继续研磨以及打磨，即得所述脂质体。
本发明中，通过在将磷脂与水搅拌混合后，进一步采用研磨以及打磨的方法，可以使得磷脂能够充分在水中分散，并与水充分接触溶解，避免发生磷脂沉淀和分层现象；而这也使得进一步所制得的脂质体在水体中具有良好的分散和稳定性，并能够在常温下长期保存不变质。
可选的，本发明中，所述磷脂为大豆磷脂。
可选的，本发明中，所述将水与磷脂搅拌混合为将水加入磷脂中后再进行搅拌混合。
可选的，本发明中，所述水的体积升数与磷脂的质量克数比例为(80～120)：(5～100)；例如，本发明中，所述水的体积升数与磷脂的质量克数比例可以为，但不限于：(85、90、95、100、105、110或者115)：(5、10、15、20、25、30、35、40、45、50、55、60、65、70、75、80、85、90或者95)等。
本发明中，通过对磷脂和水用量的调整和优化，从而能够使得磷脂能够更加充分的在水体中分散以及溶解，进而能够提高所制得的脂质体的稳定性。
可选的，本发明中，所述水的体积升数与磷脂的质量克数比例为(90～105)：(5～30)。
本发明中，通过对所用原料磷脂和水用量的进一步调整和优化，从而能够进一步提高所制得的脂质体的稳定性。
可选的，本发明中，所述搅拌混合的时间为20～45min；例如，所述搅拌混合的时间可以为，但不限于22、25、27、30、32、35、37、40或者42min等。
本发明中，通过对搅拌混合时间的调整和优化，从而可以在实现水和磷脂的充分混合的同时，还不会由于搅拌混合时间过长所导致的脂质体整体制备效率的降低以及对脂质体结构的影响。
可选的，本发明中，所述搅拌混合的温度为20～40℃；例如，所述搅拌混合的温度可以为，但不限于22、25、27、30、32、35或者37℃等。
本发明中，通过对搅拌混合温度的选择和调整，从而可以使得原料磷脂具有较好的流动性。
可选的，本发明中，所述研磨的时间为3～10min；例如，所述研磨的时间可以为，但不限于4、5、6、7、8或者9min等。
本发明中，通过对研磨时间的调整和优化，从而可以在实现搅拌后的混合体系再次充分研磨混合的同时，还不会由于研磨时间过长所导致的脂质体整体制备效率的降低以及对脂质体结构的影响。
本发明中，所述研磨为将搅拌混合后所得混合体系在研磨机中进行研磨。
可选的，本发明中，所述研磨的温度为20～40℃；例如，所述研磨的温度可以为，但不限于22、25、27、30、32、35或者37℃等。
本发明中，通过对研磨温度的选择和调整，从而可以使得待研磨的混合体系具有良好的流动性，并使得磷脂能够与水体充分混合，并在在水体中进一步有效分散和溶解。
可选的，本发明中，所述打磨的时间为25～35min；例如，所述打磨的时间可以为，但不限于27、29、30、32或者34min等。
本发明中，所述打磨为将研磨后所得混合体系在打磨机中进行的打磨；具体的，是将研磨后的混合体系置于封闭容器中，并在离心圆周运动条件下在打磨机中进行打磨。
可选的，本发明中，所述打磨的温度为25～40℃；例如，所述打磨的温度可以为27、29、30、32、35或者37℃等。
同时，本发明还提供了一种脂质体，所述脂质体是由本发明所述方法制备得到的。
本发明脂质体由本发明所述方法制备得到，因此具有脂质体溶液稳定性好，不会发生沉淀以及分层等现象；同时，脂质体质量好，保质期长等优点。
进一步的，本发明脂质体的制备方法步骤如下：
(1)在20～40℃温度条件下，按照水的体积升数与磷脂的质量克数比例为(80～120)：(5～100)，将水与磷脂搅拌混合20～40min；
(2)将搅拌混合后所得混合体系引入研磨机中，并在20～40℃条件下，研磨3～10min；
(3)将研磨后所得混合体系引入打磨机中，即，在25～40℃的温度条件下，将研磨后所得混合体系置于封闭容器中，并在离心圆周运动条件下在打磨机中进行打磨25～35min，即得所述脂质体。
与现有技术相比，本发明的有益效果为：
(1)本发明中，通过在将磷脂与水搅拌混合后，进一步采用研磨以及打磨的方法，可以使得磷脂能够充分在水中分散，并使得进一步所制得的脂质体在水体中具有良好的分散和稳定性，并能够在常温下长期保存不变质；
(2)本发明中，通过对原料磷脂以及水用量的选择和调整，以及对搅拌混合、研磨以及打磨等制备步骤条件的进一步选择和调整，从而可以进一步优化反应流程，同时还能够提高所制得脂质体的稳定性；
(3)本发明中，通过采用本发明方法制备脂质体，具有所制得的脂质体溶液稳定性好，不会发生沉淀以及分层等现象；同时，脂质体质量好，保质期长等优点。
具体实施方式
下面将结合实施例对本发明的实施方案进行详细描述，但是本领域技术人员将会理解，下列实施例仅用于说明本发明，而不应视为限制本发明的范围。实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市售购买获得的常规产品。
实施例1
按照如下所述方法制备实施例1的脂质体：
(1)在20～30℃条件下，按照水的体积升数与磷脂的质量克数比例为100：10，将水加入磷脂中，并搅拌混合30min；
(2)将搅拌混合后所得混合体系引入研磨机中，并在20～40℃条件下，研磨4～5min；
(3)将研磨后所得混合体系引入打磨机中，并在25～30℃的温度条件下，打磨25～35min，即得实施例1脂质体。
同时，实施例1脂质体制备过程中，并未发现反应体系出现浑浊或者沉淀；将实施例1所制得的脂质体放置60min后，并未出现沉淀。
实施例2
按照如下所述方法制备实施例2的脂质体：
(1)在20～30℃条件下，按照水的体积升数与磷脂的质量克数比例为100：50，将水加入磷脂中，并搅拌混合30min；
(2)将搅拌混合后所得混合体系引入研磨机中，并在20～40℃条件下，研磨4～5min；
(3)将研磨后所得混合体系引入打磨机中，并在25～30℃的温度条件下，打磨25～35min，即得实施例2脂质体。
同时，实施例2脂质体制备过程中，并未发现反应体系出现浑浊或者沉淀；将实施例2所制得的脂质体放置60min后，并未出现沉淀。
实施例3
按照如下所述方法制备实施例3的脂质体：
(1)在20～30℃条件下，按照水的体积升数与磷脂的质量克数比例为100：80，将水加入磷脂中，并搅拌混合30min；
(2)将搅拌混合后所得混合体系引入研磨机中，并在20～40℃条件下，研磨4～5min；
(3)将研磨后所得混合体系引入打磨机中，并在25～30℃的温度条件下，打磨25～35min，即得实施例3脂质体。
同时，实施例3脂质体制备过程中，并未发现反应体系出现浑浊或者沉淀；将实施例3所制得的脂质体放置60min后，并未出现沉淀。
实施例4
按照如下所述方法制备实施例4的脂质体：
(1)在20～30℃条件下，按照水的体积升数与磷脂的质量克数比例为100：10，将水加入磷脂中，并搅拌混合30min；
(2)将搅拌混合后所得混合体系引入研磨机中，并在20～40℃条件下，研磨4～5min；
(3)将研磨后所得混合体系引入打磨机中，并在25～30℃的温度条件下，打磨50min，即得实施例4脂质体。
同时，实施例4脂质体制备过程中，并未发现反应体系出现浑浊或者沉淀；将实施例4所制得的脂质体放置60min后，并未出现沉淀。
实施例5
按照如下所述方法制备实施例5的脂质体：
(1)在20～30℃条件下，按照水的体积升数与磷脂的质量克数比例为100：10，将水加入磷脂中，并搅拌混合30min；
(2)将搅拌混合后所得混合体系引入研磨机中，并在20～40℃条件下，研磨15min；
(3)将研磨后所得混合体系引入打磨机中，并在25～30℃的温度条件下，打磨25～35min，即得实施例5脂质体。
同时，实施例5脂质体制备过程中，并未发现反应体系出现浑浊或者沉淀；将实施例5所制得的脂质体放置60min后，并未出现沉淀。
实验例1
分别将实施例1-5所制得脂质体在常温下保存，并分别在12、24、36个月后对实施例1-5的脂质体进行检测，结果如下：
由实验例1可知，本发明方法所制得的脂质体具有良好的稳定性，可以在室温下长期(＞12个月)保存，同时还不会发生浑浊、沉淀或者脂质体悬浮现象。
对比例1
在20～30℃条件下，按照水的体积升数与磷脂的质量克数比例为100：10，将水加入磷脂中，并搅拌混合。在搅拌10min后，即发现混合体系已经为浑浊液体；静置放置60min后，发现磷脂和水已经明显分离，并且出现粘结状沉淀物。
对比例2
在20～30℃条件下，按照水的体积升数与磷脂的质量克数比例为100：10，将水加入磷脂中，搅拌混合50min，并反复搅拌5次；然后，静置放置60min后，发现混合体系出现少量油、水以及磷脂分层现象，并且出现了粘结状沉淀物。
对比例3
按照对比例2所述方法，并加快搅拌速度，以进行对比例3脂质体的制备实验。结果发现，所制得的混合体系中，仍有分层以及粘结状沉淀现象。
对比例4
按照如下所述方法制备对比例4的脂质体：
(1)在20～30℃条件下，按照水的体积升数与磷脂的质量克数比例为100：10，将水加入磷脂中，并搅拌混合30min；
(2)将搅拌混合后所得混合体系引入研磨机中，并在20～40℃条件下，研磨4～5min，即得对比例4的脂质体。
对比例4脂质体制备过程中，并未发现反应体系出现浑浊或者沉淀；将对比例4所制得的脂质体放置60min后，出现油水分层现象；进一步将对比例4所制得脂质体放置12h后，出现少量悬浮物；放置3d后，出现粘结状沉淀物。
对比例5
按照如下所述方法制备对比例5的脂质体：
(1)在20～30℃条件下，按照水的体积升数与磷脂的质量克数比例为100：10，将水加入磷脂中，并搅拌混合30min；
(2)将搅拌混合后所得混合体系引入打磨机中，并在25～30℃的温度条件下，打磨25～35min，即得对比例5的脂质体。
对比例5脂质体制备过程中，并未发现反应体系出现浑浊或者沉淀；将对比例5所制得的脂质体放置12h后，出现油水分层现象；进一步将对比例5所制得脂质体放置5d后，出现少量悬浮物；放置30d后，出现粘结状沉淀物。
本发明方法操作简便，而且由本发明方法所制得的脂质体具有稳定性好，可以长期常温保存不变质等优点。
尽管已用具体实施例来说明和描述了本发明，然而应意识到，在不背离本发明的精神和范围的情况下可以作出许多其它的更改和修改。因此，这意味着在所附权利要求中包括属于本发明范围内的所有这些变化和修改。