艾日布林在治疗癌症中的用途的利记博彩app

癌症是用于描述特征分别为特定类型的细胞不受控制生长的各种疾病的术语。其开始于包含这样的细胞的组织，并且如果癌症在诊断时尚未扩散至任何其它组织，则可通过例如手术、辐射或另一类型的局部疗法治疗。然而，当有证据表明癌症已从其来源组织转移时，通常使用不同的治疗方法。事实上，因为不可能准确测定转移的程度，当检出任何扩散的证据时，通常采取系统治疗方法。这些方法可包括给予干扰快速分裂细胞(例如癌细胞)的生长的化学治疗药。其它方法包括使用免疫疗法，其中受试者针对癌性细胞的免疫反应被引发或增强。

软海绵素B是结构复杂的大环化合物，其最初自海洋的海绵Halichondria okadai分离，和随后在Axinella sp.、Phakellia carteri和Lissodendoryx sp.中发现。软海绵素B的完全合成公开于1992年(Aicher等，J.Am.Chem.Soc.114：3162-3164，1992)。软海绵素B已经显示抑制微管蛋白聚合、微管装配、β^S-微管蛋白交联、GTP和长春碱结合至微管蛋白、和微管蛋白依赖性GTP体外水解。该分子还已经显示在体外和体内具有抗-癌症性质。具有抗-癌症活性的软海绵素B类似物描述于美国专利号6,214,865 B1。

艾日布林是软海绵素B的合成类似物。艾日布林亦称为ER-086526，和已指定为CAS号253128-41-5和US NCI名称号NSC-707389。艾日布林的甲磺酸盐(甲磺酸艾日布林，其以商标名销售和亦称为E7389)在2010年11月获得FDA批准，用于治疗患有转移性乳腺癌的患者，所述患者之前已经在辅助或转移性背景下(in either the adjuvant or metastatic setting)接受至少两种治疗

艾日布林在治疗癌症中的用途

发明背景

癌症是用于描述特征分别为特定类型的细胞不受控制生长的各种疾病的术语。其开始于包含这样的细胞的组织，并且如果癌症在诊断时尚未扩散至任何其它组织，则可通过例如手术、辐射或另一类型的局部疗法治疗。然而，当有证据表明癌症已从其来源组织转移时，通常使用不同的治疗方法。事实上，因为不可能准确测定转移的程度，当检出任何扩散的证据时，通常采取系统治疗方法。这些方法可包括给予干扰快速分裂细胞(例如癌细胞)的生长的化学治疗药。其它方法包括使用免疫疗法，其中受试者针对癌性细胞的免疫反应被引发或增强。

软海绵素B是结构复杂的大环化合物，其最初自海洋的海绵Halichondria okadai分离，和随后在Axinella sp.、Phakellia carteri和Lissodendoryx sp.中发现。软海绵素B的完全合成公开于1992年(Aicher等，J.Am.Chem.Soc.114：3162-3164，1992)。软海绵素B已经显示抑制微管蛋白聚合、微管装配、β^S-微管蛋白交联、GTP和长春碱结合至微管蛋白、和微管蛋白依赖性GTP体外水解。该分子还已经显示在体外和体内具有抗-癌症性质。具有抗-癌症活性的软海绵素B类似物描述于美国专利号6,214,865 B1。

艾日布林是软海绵素B的合成类似物。艾日布林亦称为ER-086526，和已指定为CAS号253128-41-5和US NCI名称号NSC-707389。艾日布林的甲磺酸盐(甲磺酸艾日布林，其以商标名销售和亦称为E7389)在2010年11月获得FDA批准，用于治疗患有转移性乳腺癌的患者，所述患者之前已经在辅助或转移性背景下(in either the adjuvant or metastatic setting)接受至少两种治疗转移性疾病的化学治疗方案，所述方案应包括蒽环类抗生素和紫衫烷。

甲磺酸艾日布林的化学名称是11，15：18，21：24，28-三桥氧-7，9-桥亚乙基-12，15-桥亚甲基-9H，15H-呋喃并[3，2-i]呋喃并[2′，3′：5，6]吡喃并[4，3-b][1，4]二氧杂环二十五-5(4H)-酮，2-[(2S)-3-氨基-2-羟基丙基]二十六氢-3-甲氧基-26-甲基-20，27-双(亚甲基)-，(2R，3R，3aS，7R，8aS，9S，10aR，11S，12R，13aR，13bS，15S，18S，21S，24S，26R，28R，29aS)-甲磺酸盐，和其可描述如下：

发明概述

本发明部分地基于在某些其它药剂(例如卡培他滨、紫杉醇和卡铂)之前给予甲磺酸艾日布林显示改进的(例如，协同的)抗肿瘤作用的观察结果。本发明因此特征在于通过给予艾日布林或其药学上可接受的盐(例如，甲磺酸艾日布林)，接着给予一种或多种其它药剂[例如，卡培他滨、抗有丝分裂剂(例如，紫杉醇或多西他赛)、基于铂的抗肿瘤剂(例如，卡铂、顺铂或奥沙利铂)、多柔比星或伊沙匹隆(Ixabepilone)]来预防和治疗癌症的方法。

当术语“艾日布林”在本文中使用时，应被认为是指示艾日布林或其药学上可接受的盐(例如甲磺酸艾日布林)，除非上下文另外指示。

在第一方面，本发明提供用于治疗患有或有风险发生乳腺癌的受试者(例如，人类患者)(例如，经诊断患有乳腺癌、在乳腺癌治疗中或在乳腺癌治疗后恢复中的受试者)的方法。所述方法包括给予所述受试者(i)艾日布林或其药学上可接受的盐(例如，甲磺酸艾日布林)，和随后(ii)选自卡培他滨、抗有丝分裂剂(例如，紫杉醇或多西他赛)、基于铂的抗肿瘤剂(例如，顺铂、卡铂或奥沙利铂)、多柔比星和伊沙匹隆的第二种药剂。所述治疗可任选地在例如手术之前作为新辅助疗法进行。在各种实例中，乳腺癌是原发性肿瘤、局部晚期(local advanced)、转移和/或特征为雌激素受体阳性或阴性的、孕酮受体阳性或阴性的、HER-2阳性或阴性的或三阴性乳腺癌。

在某些实施方案中，艾日布林或其药学上可接受的盐(例如，甲磺酸艾日布林)通过静脉内输注给予(例如，持续约1-约20分钟，或约2-约5分钟)，其量的范围为约0.1mg/m²至约20mg/m²(例如，约1.1mg/m²或1.4mg/m²)，和/或21天周期的第1天和第8天各自一次。

在各种实施方案中，艾日布林或其药学上可接受的盐(例如，甲磺酸艾日布林)在给予第二种药剂之前完成，而在其它实施方案中，艾日布林或其药学上可接受的盐(例如，甲磺酸艾日布林)的给予在开始给予第二种药剂后继续进行。

在某些实施方案中，给予的第二种药剂是卡培他滨，其可例如每日给予，持续两周，接着停药一周。

在各种实施方案中，根据本发明的方法的治疗：(i)减少癌细胞数；(ii)减少肿瘤体积；(iii)增加肿瘤消退速率；(iv)减少或减慢癌细胞侵润至周围器官；(v)减少或减慢肿瘤转移；(vi)减少或抑制肿瘤生长；(vii)预防或延迟癌症的发生和/或复发，和/或延长无疾病或无肿瘤存活时间；(viii)增加总存活时间；(ix)减少治疗频率；和/或(x)减轻与癌症相关的一个或多个症状。

在另一方面，本发明还包括用于减少患有乳腺癌的受试者的肿瘤大小的方法。这些方法包括给予所述受试者(i)艾日布林或其药学上可接受的盐(例如，甲磺酸艾日布林)，和随后(ii)选自卡培他滨、抗有丝分裂剂(例如，紫杉醇或多西他赛)、基于铂的抗肿瘤剂(例如，顺铂、卡铂或奥沙利铂)、多柔比星和伊沙匹隆的第二种药剂。艾日布林或其药学上可接受的盐(例如，甲磺酸艾日布林)和/或其它药剂可任选按上文和本文他处所述给予，和可产生例如一种或多种上文所列的效果(i-x)。该治疗可任选在例如手术之前在新辅助疗法背景下进行。在各种实例中，乳腺癌是原发性肿瘤、局部晚期、转移和/或特征为雌激素受体阳性或阴性的、孕酮受体阳性或阴性的、HER-2阳性或阴性的，或三阴性乳腺癌。

在进一步的方面，本发明包括用于增加选自卡培他滨、抗有丝分裂剂(例如，紫杉醇或多西他赛)、基于铂的抗肿瘤剂(例如，顺铂、卡铂或奥沙利铂)、多柔比星和伊沙匹隆的药剂在治疗受试者的乳腺癌中的功效的方法。这些方法包括在所述药剂之前给予所述受试者艾日布林或其药学上可接受的盐(例如，甲磺酸艾日布林)。在各种实例中，艾日布林或其药学上可接受的盐(例如，甲磺酸艾日布林)和/或其它药剂按上文和本文他处所述的时间表和剂量给予，以及给予按上文和本文他处所述的特定受试者(以实现例如一种或多种上文所列的效果)。

在另一方面，本发明包括用于在患有乳腺癌的受试者中治疗乳腺癌或减少肿瘤大小的药盒。所述药盒包括(i)艾日布林或其药学上可接受的盐(例如，甲磺酸艾日布林)，和(ii)选自卡培他滨、抗有丝分裂剂(例如，紫杉醇或多西他赛)、基于铂的抗肿瘤剂(例如，顺铂、卡铂或奥沙利铂)、多柔比星和伊沙匹隆的第二种药剂，任选地呈剂量形式。任选地，所述药盒包括使用说明书和/或用于给予的装置或试剂。

本发明还包括如本文所述的艾日布林或其药学上可接受的盐(例如，甲磺酸艾日布林)和随后给予的第二种药剂在治疗如本文所述的患有或有风险发生乳腺癌的受试者中的用途，或在制备用于该目的的药物中的用途。

本发明的方法提供针对癌症的改进功效。在一些情况下，组合方法可例如用于获得协同效果，其中例如，所述效果大于单独给予的药物的效果的总和。导致加和效果的组合方法也是有益的。

根据以下详细描述、附图和权利要求书，本发明的其它特征和优点将是显而易见的。

附图简述

图1是显示在人乳腺癌细胞系MDA-MB-231皮下(s.c.)异种移植物模型中在艾日布林治疗后卡培他滨的抗肿瘤作用的图。

图2是显示在人乳腺癌细胞系MDA-MB-231皮下异种移植物模型中艾日布林和紫杉醇(PTX)的连续治疗的抗肿瘤作用的图。

图3A和3B是显示在人乳腺癌细胞系MDA-MB-231皮下异种移植物模型中艾日布林加卡铂(CBDCA)和紫杉醇加卡铂的连续治疗的抗肿瘤作用的图。图3A显示抗肿瘤作用，和图3B显示连续治疗的体重。

图4是显示在用艾日布林治疗后在MDA-MB-231肿瘤中卡铂的浓度的图。

详细描述

本发明提供用于预防和治疗癌症的方法，包括在第二种(或另外的)抗癌剂例如卡培他滨、抗有丝分裂剂(例如，紫杉醇或多西他赛)、基于铂的抗肿瘤剂(例如，卡铂、顺铂或奥沙利铂)、多柔比星或伊沙匹隆之前给予艾日布林或其药学上可接受的盐(例如，甲磺酸艾日布林)。根据本发明的方法，艾日布林可在新辅助疗法背景中，在用于乳腺癌疗法的一线、二线或三线的第二种抗癌剂之前给予，以提高第二种抗癌剂的功效。

根据本发明的方法的癌症治疗可(i)减少癌细胞数；(ii)减少肿瘤体积；(iii)增加肿瘤消退速率；(iv)减少或减慢癌细胞侵润至周围器官；(v)减少或减慢肿瘤转移；(vi)减少或抑制肿瘤生长；(vii)防止或延迟癌症的发生和/或复发，和/或延长无疾病或无肿瘤存活时间；(viii)增加总存活时间；(ix)减少治疗频率；和/或(x)减轻与癌症相关的一个或多个症状。

药物组合物、剂量和方法

包含艾日布林和/或本文所述的其它药剂的药物组合物可使用本领域已知的标准方法制备，或可自市售来源获得。通常，用于本发明的艾日布林和其它药剂包括在分开的药物组合物中，但它们可任选地包括在单一的组合中。艾日布林、抗有丝分裂剂(例如，紫杉醇或多西他赛)、基于铂的抗肿瘤剂(例如，卡铂、顺铂和奥沙利铂)、多柔比星和伊沙匹隆通常以体液形式提供，用于静脉内给予，而卡培他滨通常以片剂形式提供，用于口服给予。

用于本发明的药物组合物可通过例如将具有所需纯度的活性成分混合或溶解在生理学上可接受的稀释剂、载体、赋形剂或稳定剂中制备(参见例如，Remington’s Pharmaceutical Sciences(第20版)，编辑A.Gennaro，2000，Lippincott，Williams&Wilkins，Philadelphia，PA)。可接受的稀释剂包括水和盐水，任选包括缓冲液例如磷酸盐、柠檬酸盐或其它有机酸；抗氧化剂，包括丁羟甲苯(BHT)、丁羟茴香醚(BHA)、抗坏血酸；低分子量(少于约10个残基)多肽；蛋白质，例如血清白蛋白、明胶或免疫球蛋白；亲水聚合物，例如聚乙烯吡咯烷酮；氨基酸，例如甘氨酸、谷氨酰胺、天冬酰胺、精氨酸或赖氨酸；单糖、二糖或其它碳水化合物，包括葡萄糖、甘露糖或糊精；螯合剂，例如EDTA；糖醇，例如甘露糖醇或山梨糖醇；成盐抗衡离子，例如钠；和/或非离子表面活性剂，例如TWEEN^TM、PLURONICS^TM或PEG。

在制备用于口服剂型的组合物(例如，包含卡培他滨的组合物)中，可使用任何常用的药用介质，例如水、二醇、油、醇、矫味剂、防腐剂、着色剂。此外，在口服固体制剂例如粉剂、胶囊剂和片剂的情况下可使用载体例如淀粉、糖、微晶纤维素、稀释剂、粒化剂、润滑剂、粘合剂、崩解剂等。

任选地，本发明的制剂包含药学上可接受的防腐剂。在一些实施方案中，防腐剂浓度范围为0.1 to 2.0％，通常v/v。合适的防腐剂包括制药领域已知的那些，例如苯甲醇、苯酚、间甲酚、对羟基苯甲酸甲酯和对羟基苯甲酸丙酯。此外，艾日布林和/或其它药物制剂可任选地包括药学上可接受的盐，例如氯化钠(例如约生理学浓度)。因此，在一个实例中，艾日布林(例如，甲磺酸艾日布林)在0.9％氯化钠注射液(USP)中配制。

上述制剂(和其它制剂)可用于药物的胃肠外给予。因此，药物可通过途径，其包括静脉内、瘤内、瘤周围、动脉内、皮内、膀胱内、经眼、肌内、皮内、腹膜内、经肺、皮下和经皮途径，给予。也可使用其它途径，包括例如经粘膜、经皮、吸入、阴道内、直肠和口服给予途径。

本文所述给予的艾日布林和其它药剂的剂量可显著不同，其取决于靶标疾病的类型，递送方法的选择，以及患者的年龄、性别和体重，症状的严重性，以及其它因素。

除了给予方案以外，用于本发明的方法的每种药物在下文描述。这些描述之后是根据本发明的组合方法可如何进行艾日布林预治疗的实例。

艾日布林

用于合成艾日布林的方法描述于例如美国专利号6,214,865；美国专利号7,982,060；美国专利号8,350,067；和美国专利号8,093,410，其各自通过引用结合到本文中。如上所述，甲磺酸艾日布林可市售获得，和作为出售。

如上所述，艾日布林可任选以盐形式用于本发明。对于使用的盐没有特别限制，无论是无机酸盐还是有机酸盐。例如，盐可选自甲磺酸盐(例如，甲磺酸艾日布林)、盐酸盐、硫酸盐、柠檬酸盐、氢溴酸盐、氢碘酸盐、硝酸盐、硫酸氢盐、磷酸盐、过磷酸盐、异烟酸盐、乙酸盐、乳酸盐、水杨酸盐、酒石酸盐、泛酸盐、抗坏血酸盐、琥珀酸盐、马来酸盐、富马酸盐、葡萄糖酸盐、糖精酸盐、甲酸盐、苯甲酸盐、谷氨酸盐、甲磺酸盐、乙磺酸盐、苯磺酸盐、对甲苯磺酸盐、扑酸盐等。此外，使用铝、钙、锂、镁、钠、锌和二乙醇胺的盐是可接受的。

艾日布林(例如，甲磺酸艾日布林)的每日剂量范围可为例如，0.001mg/m²至约100mg/m²(例如，范围为约0.1mg/m²至约50mg/m²或范围为约0.7mg/m²至约1.5mg/m²，或这些范围内的任何单一量(例如，1.4mg/m²或1.1mg/m²))。艾日布林可作为单剂量一天、一周、一月或一年给予一次，或每天、每周、每月或每年可给予超过一个剂量的艾日布林。例如，在一种给予方案中，艾日布林可在21天周期的第1天和第8天给予一次。更特别的，甲磺酸艾日布林的建议剂量是在21天周期的第1天和第8天经2-5分钟静脉内给予1.4mg/m²。在患有轻度肝损伤(Child-Pugh A)的患者中甲磺酸艾日布林的建议剂量是在21天周期的第1天和第8天经2-5分钟静脉内给予1.1mg/m²，而在患有中度肝损伤(Child-Pugh B)的患者中甲磺酸艾日布林的建议剂量是在21天周期的第1天和第8天经2-5分钟静脉内给予0.7mg/m²。此外，在患有中度肾损伤(肌酐清除为30-50mL/min)的患者中甲磺酸艾日布林的建议剂量是在21天周期的第1天和第8天经2-5分钟静脉内给予1.1mg/m²。这些或其它更低剂量的甲磺酸艾日布林可任选地用于根据本发明的方法的组合治疗的情况。

卡培他滨

卡培他滨(XELODA，Roche)，一种氟嘧啶氨基甲酸酯，是5’-脱氧-5-氟尿苷(5’-DFUR)的前药。卡培他滨的每日剂量不特别受到限制，但通常该药物可以1000-4000mg/m²(例如，1500-3500mg/m²、2000-3000mg/m²或2500mg/m²)的范围给予。其可作为单剂量一天、一周、一月或一年给予一次，或每日、每周、每月或每年可给予超过一个剂量(例如，2个剂量)的卡培他滨。例如，在一种给予方案中，每日口服(以两个分开的剂量)给予2500mg/m²卡培他滨，持续两周，接着停药1周，由此形成3周的周期。在各种实施方案中，根据艾日布林(例如，甲磺酸艾日布林)的共-给予，与标准剂量相比，卡培他滨的量可减少。

抗有丝分裂剂

紫杉醇

紫杉醇(Bristol-Myers Squibb)是一种有丝分裂抑制剂。紫杉醇的每日剂量不特别受到限制，但通常该药物可以50-300mg/m²(例如，100-250mg/m²、150-200mg/m²或175mg/m²)的范围给予。其可作为单剂量一天、一周、一月或一年给予一次，或每天、每周、每月或每年可给予超过一个剂量(例如，2个剂量)的紫杉醇。例如在一种给予方案中，每三个周经1-5(例如，3)小时静脉内给予135-175mg/m²紫杉醇，持续2-6(例如，4)个疗程。在另一实例中，50-120mg/m²(例如，70-100mg/m²或80-90mg/m²)紫杉醇每周给予，持续例如，6-12(例如，9)个周。在各种实施方案中，根据艾日布林(例如，甲磺酸艾日布林)的共-给予，与标准剂量相比，紫杉醇的量可减少。

多西他赛

多西他赛(Taxotere；Docefrez)是一种有丝分裂抑制剂。多西他赛的每日剂量不特别受到限制，但通常该药物可以50-300mg/m²(例如，60-250mg/m²、75-200mg/m²或100-150mg/m²)的范围给予。其可作为单剂量一天、一周、一月或一年给予一次，或每天、每周、每月或每年可给予超过一个剂量(例如，2个剂量)的多西他赛。例如，在一种给予方案中，每三个周经0.5-2(例如，1)小时静脉内给予60-100(例如，75)mg/m²多西他赛，持续2-6(例如，4)个疗程。在各种实施方案中，根据艾日布林(例如，甲磺酸艾日布林)的共-给予，与标准剂量相比，多西他赛的量可减少。

基于铂的抗肿瘤剂

可用于本发明的基于铂的抗肿瘤药(铂类)包括例如，顺铂、卡铂、奥沙利铂、沙铂、吡铂、奈达铂、triplatin和lipolatin。这些药物的剂量和给予方案是本领域众所周知的，和可容易地经适应用于本发明。在各种实施方案中，根据艾日布林(例如，甲磺酸艾日布林)的共-给予，与标准剂量相比，基于铂的抗肿瘤药的量可减少。例如在卡铂的情况下，可参考Calvert等，J.Clin.Oncol.7：1748-1756，1989，其说明了根据例如肾小球滤过率来决定剂量的众所周知的方法。作为具体的实例，基于铂的抗肿瘤药(例如，卡铂)可以AUC 4/5/6 IV Q3周的量给予。

多柔比星

多柔比星(Adriamycin；Rubex；Doxil，以脂质包囊形式)分类为蒽环类抗生素。多柔比星的每日剂量不特别受到限制，但通常该药物可每21-28天以40-60mg/m²IV的范围给予。或者，每21天60-75mg/m²IV一次。其可作为单剂量一天、一周、一月或一年给予一次，或每天、每周、每月或每年可给予超过一个剂量(例如，2个剂量)的多柔比星。在各种实施方案中，根据艾日布林(例如，甲磺酸艾日布林)的共-给予，与标准剂量相比，多柔比星的量可减少。

伊沙匹隆

伊沙匹隆(IXEMPRA)是一种属于epithilone类的抗肿瘤剂的微管抑制剂。Epothilones自粘杆菌纤维堆囊菌(Sorangium cellulosum)分离。伊沙匹隆是epothilone B(一种16元多聚乙酰大环内酯)的半合成类似物，其中天然存在的内酯置换为化学修饰的内酰胺。伊沙匹隆的每日剂量不特别受到限制，但通常该药物可以20-60(例如，40)mg/m²的范围每3个周经1-4(例如，2-3)小时静脉内给予。其可作为单剂量一天、一周、一月或一年给予一次，或每天、每周、每月或每年可给予超过一个剂量(例如，2个剂量)的伊沙匹隆。在各种实施方案中，根据艾日布林(例如，甲磺酸艾日布林)的共-给予，与标准剂量相比，伊沙匹隆的量可减少。

组合给予方案

如上所述，根据本发明的方法，艾日布林(例如，甲磺酸艾日布林)在本文所述的一种或多种其它药剂之前给予。因此，例如，艾日布林(例如，甲磺酸艾日布林)可在另一种药剂之前1、2、3、4、5或6天或1-12(例如，2-10或4-8)周给予，由本领域技术人员合适地确定。

在各种实例中，一个或多个(例如，1-8、2-7、3-6或4-5个)剂量或全周期的艾日布林治疗可在一个或多个(例如，1-8、2-7、3-6或4-5个)剂量或全周期的本文所述的一种或多种其它药剂治疗之前给予。因此，在一个实例中，艾日布林(例如，甲磺酸艾日布林；例如，1.4mg/m²或1.1mg/m²经例如2-5分钟给予)在21天周期的第1天和第8天给予，和进行1-8、2-7、3-6或4-5(例如，4)个全周期。然后停止艾日布林治疗，和开始使用本文所述的不同药剂治疗。在一个实例中，然后开始每周给予紫杉醇(例如，80mg/m²)，持续1-20(例如，2-18、3-16、4-14、5-12、6-11或7-9)个周。因此，在该实例中，艾日布林预-治疗在开始紫杉醇给予之前完成。在该方法的变化中，在艾日布林给予的第1天开始给予第三种药剂(例如，基于铂的抗肿瘤剂，例如卡铂、顺铂或奥沙利铂；例如，AUC 6)，和在艾日布林和紫杉醇治疗的整个疗程期间每三个周继续进行。在其它实例中，艾日布林(例如，甲磺酸艾日布林；例如，1.4mg/m²或1.1mg/m²经例如2-5分钟给予)在21天周期的第1天和第8天给予，和进行1-8、2-7、3-6或4-5(例如，4)个全周期。在最后一个艾日布林周期后，进行一个或多个(例如，1-8、2-7、3-6或4-5)个周期的卡培他滨、多西他赛、基于铂的抗肿瘤剂(例如，卡铂、顺铂或奥沙利铂)、多柔比星或伊沙匹隆给予，如上文关于每种这些药剂所述。

在其它实例中，在使用另一药剂开始治疗的同一时间开始艾日布林治疗和继续进行(无论是在周期的过程期间还是在周期的开始)。在该方法的一个实例中，艾日布林在21天周期的第1天给予。在该周期的第8天，再次给予艾日布林，和开始使用其它药剂之一的治疗过程。在卡培他滨的情况下，例如，给予可每日进行，持续2个周，和上述1周停药期可在开始另一个艾日布林21天周期之前或重叠进行。在另一实例中，艾日布林在21天周期的第1天给予。在该周期的第8天，再次给予艾日布林，和还在该天给予第二种药物(例如，紫杉醇、多西他赛、顺铂、卡铂、奥沙利铂、多柔比星或伊沙匹隆)，和然后每三个周给予所述第二种药物，与另外的艾日布林给予周期重叠进行。任选地，在紫杉醇、多西他赛、多柔比星或伊沙匹隆治疗之前的艾日布林预-治疗的情况下，基于铂的抗肿瘤药(例如，顺铂、卡铂、奥沙利铂)在该21天周期中给予一次。该给予可在周期的第一天或在任何天数发生，其由本领域技术人员合适地确定。该治疗过程可重复进行，由本领域技术人员根据耐受性和有效性来确定。

除了艾日布林和上述药剂(即卡培他滨、抗有丝分裂剂(例如，紫杉醇或多西他赛)、基于铂的抗肿瘤剂(例如，卡铂、顺铂或奥沙利铂)、多柔比星或伊沙匹隆)之外，本发明的方法还可包括给予一种或多种另外的治疗剂。在这些药剂中，免疫调节剂(例如，抗体或疫苗)、化学治疗剂/抗肿瘤剂、抗菌剂、镇吐药和抗炎剂是合适的。在其它实例中，艾日布林(例如，甲磺酸艾日布林)和所述药剂(卡培他滨、抗有丝分裂剂(例如，紫杉醇或多西他赛)、基于铂的抗肿瘤剂(例如，卡铂、顺铂或奥沙利铂)、多柔比星或伊沙匹隆)可作为唯一的治疗(例如，唯一的抗-癌症)药剂用于治疗方案。因此，本发明的方法可由给予以下药剂组成：(i)艾日布林或其药学上可接受的盐(例如，甲磺酸艾日布林)，和(ii)卡培他滨、抗有丝分裂剂(例如，紫杉醇或多西他赛)、基于铂的抗肿瘤剂(例如，卡铂、顺铂或奥沙利铂)、多柔比星或伊沙匹隆。

本发明的方法可用于治疗(包括例如，延迟进展)或预防受试者(例如，人类患者)的癌症和/或减少肿瘤大小。受试者可被诊断患有癌症、处于发生癌症的风险中、在癌症治疗中或在癌症治疗后恢复中。此外，该方法可用于治疗或预防转移和/或复发。该治疗可以是单独的化学疗法，但也预期该治疗与除去或减少肿瘤大小的手术、辐射疗法、免疫疗法和/或部分切除术疗法(ablation therapy)组合。

如上所述，本发明的方法可用于治疗乳腺癌。根据本发明的方法可治疗的乳腺癌的类型包括例如，雌激素受体阳性或阴性的、孕酮受体阳性或阴性的、HER-2阳性或阴性的，或三阴性乳腺癌。本发明的方法可进一步用于治疗局部晚期或转移乳腺癌。在各种实例中，本发明的方法可在新辅助疗法的背景下进行，和因此在另一种主要治疗例如手术之前进行。

药盒

本发明还提供了药盒，其包括含艾日布林(例如，甲磺酸艾日布林)的容器和/或含本文所述的一种或多种其它药剂(卡培他滨、抗有丝分裂剂(例如，紫杉醇或多西他赛)、基于铂的抗肿瘤剂(例如，卡铂、顺铂或奥沙利铂)、多柔比星或伊沙匹隆的容器。在这样的药盒中艾日布林和/或其它药剂可以足以治疗有需要的患者的癌症的量(例如，对于单次给予或多次给予足够的量)提供。所述药盒因此可包括多个容器，其各自包括有效量的单剂量艾日布林和/或其它药剂药物组合物。任选地，给予所述药物组合物所需要的工具和/或装置也可包括在药盒中。此外，药盒可包括其它组分，例如用艾日布林和/或本文所述的其它药剂治疗癌症患者的说明书或给予时间表。

本发明通过以下实施例进行说明，其绝不意图限制本发明。

实验实施例

材料和方法

化合物、细胞系和动物

艾日布林(E7389，)和卡培他滨由Eisai Co.，Ltd(Tokyo，Japan)生产，和紫杉醇和卡铂分别购自LC Laboratories(Woburn，MA)和BMS(Tokyo，Japan和Sigma-Aldrich，St.Louis，MO)。人乳腺癌细胞系MDA-MB-231获自ATCC(Rockville，MD)。雌性无胸腺裸鼠获自Charles River Laboratories JAPAN Inc.(Kanagawa，Japan)，Taconic(Germantown，NY)或Japan SLC Co.，Ltd.(Shizuoka，Japan)。所有的动物实验按照Eisai Co.，Ltd.或Eisai Inc的动物实验指南进行。

试验化合物给药制剂的制备

将艾日布林以浓度0.1mg/mL溶于盐水。将卡培他滨悬浮于包含5％阿拉伯胶的40mmol/L柠檬酸盐缓冲液(pH 6.0)，以得到54mg/mL的浓度。将紫杉醇(PTX)以浓度40mg/mL溶于Cremophore EL∶乙醇＝1∶1和用5％葡萄糖溶液稀释10倍。预制的10mg/mL卡铂溶液用于该测定。该溶液以100mg/kg的浓度注射。

在人乳腺癌细胞系MDA-MB-231皮下异种移植物模型中在艾日布林治疗后卡培他滨的抗肿瘤作用

MDA-MB-231细胞用包含10％(v/v)FBS的RPMI 1640培养基培养。将培养的肿瘤细胞以密度10×10⁷个细胞/mL悬浮于50％(v/v)BD Matrigel(BD bioscience，San Jose，CA)用于皮下接种至裸鼠。将0.1-mL等份的细胞悬浮液皮下移植到小鼠的右侧区。肿瘤体积按照下式计算：(宽[mm]²×长[mm])/2。肿瘤重量按照下式计算：肿瘤体积(mm³)×1(mg/mm³)。在MDA-MB-231异种移植物模型中，在第1天当平均肿瘤体积达到100和300mg之间(1mm³＝1mg)时，将裸鼠随机分成各组。在第1天给予对照(无治疗)；卡培他滨，540mg/kg，QD8，p.o.；或艾日布林，1.0mg/kg，QD1，i.v.。在艾日布林组中，艾日布林处理的小鼠随机分成两个组。在第12天(作为图1中新的第1天)，当肿瘤大小恢复至初始水平，两个艾日布林组如下处理：(i)艾日布林后对照和(ii)艾日布林后卡培他滨，540mg/kg，QD8，p.o.。给予体积(0.1mL/10g体重)根据给予前体重计算。肿瘤体积每周测量两次。各组的小鼠数是6。显示的数据是平均值+/-SEM(图1)。数据通过Dunnett多重比较检验进行分析，以比较两个组(GraphPad Prism版本6.02(GraphPad Software Inc.，La Jolla，CA))。*＜0.05的值被认为是统计学显著的。

在人乳腺癌细胞系MDA-MB-231皮下异种移植物模型中艾日布林和紫杉醇的连续治疗的抗肿瘤作用

MDA-MB-231细胞用包含10％(v/v)FBS的RPMI 1640培养基培养。将培养的肿瘤细胞以密度10×10⁷个细胞/mL悬浮于50％(v/v)GelTrex(Life Technologies，Tokyo，Japan)中用于皮下接种至裸鼠。将0.1-mL等份的细胞悬浮液皮下移植至小鼠的右侧区。肿瘤体积按照下式计算：(宽[mm]²×长[mm])/2。按照下式计算肿瘤重量：肿瘤体积(mm³)×1(mg/mm³)。在MDA-MB-231异种移植物模型中，在第0天当平均肿瘤体积达到100和300mg之间(1mm³＝1mg)时，将裸鼠随机分成各组。在第0天和第7天给予对照(无治疗)；艾日布林，1mg/kg i.v.；或PTX，40mg/kg i.v.。给予体积(0.1mL/10g体重)根据给予前体重计算。肿瘤体积每周测量两次。各组的小鼠数是5。显示的数据为平均值+SD(图2)。治疗组之间肿瘤生长曲线的差异通过重复测量ANOVA分析。*＜0.05的值(双向)被认为是统计学显著的。使用GraphPad Prism版本6.02(GraphPad Software Inc.，La Jolla，CA)进行统计学分析。

在人乳腺癌细胞系MDA-MB-231皮下异种移植物模型中艾日布林加卡铂和紫杉醇加卡铂的连续治疗的抗肿瘤作用

MDA-MB-231细胞用包含10％(v/v)FBS的RPMI 1640培养基培养。将培养的肿瘤细胞以密度10×10⁷个细胞/mL悬浮于50％(v/v)GelTrex(Life Technologies，Tokyo，Japan)用于皮下接种至裸鼠。将0.1-mL等份的细胞悬浮液皮下移植至小鼠的右侧区。肿瘤体积按照下式计算：(宽[mm]²×长[mm])/2。肿瘤重量按照下式计算：肿瘤体积(mm³)×1(mg/mm³)。在MDA-MB-231异种移植物模型中，在第0天当平均肿瘤体积达到100和300mg之间(1mm³＝1mg)时，将裸鼠随机分成各组。在第0天给予对照(无治疗)；艾日布林，1mg/kg i.v.；或PTX，40mg/kg i.v.，和在第7天给予卡铂，100mg/kg i.v.。给予体积(0.1mL/10g体重)根据给予前体重计算。肿瘤体积每周测量两次。进行分析直到第35天。各组的小鼠数为5。显示的数据为平均值+SD(图3)。治疗组之间肿瘤生长曲线的差异通过重复测量ANOVA分析。*＜0.05的值(双向)被认为是统计学显著的。使用GraphPad Prism版本6.02(GraphPad Software Inc.，La Jolla，CA)进行统计学分析。

在人乳腺癌细胞系MDA-MB-231皮下异种移植物模型中在给予艾日布林后卡铂在肿瘤中的药代动力学研究

雌性裸鼠在适应后，在右侧区使用26-号针头，按1∶1比率(各自50μL)以0.1mL的体积在磷酸盐缓冲盐水中皮下注射5x10⁶MDA-MB-231细胞与基质胶。这确保可获得足够的带有体积范围大约200～300mm³的肿瘤的小鼠用于研究。当肿瘤达到大约250mm³的平均尺寸时，选择30只小鼠。研究包括包含24只小鼠的初始实验。第一组接受作为3mg/kg的单剂量i.v.给予的甲磺酸艾日布林；对于20g动物，给予200μL的0.3mg/mL甲磺酸艾日布林溶液。为控制肿瘤大小(to control for tumor size)，在卡铂给药前引入由27只小鼠组成的溶媒对照组(溶媒B)。该组的小鼠经选择使得它们的肿瘤大小与甲磺酸艾日布林-治疗小鼠组的肿瘤大小匹配。溶媒B组被分成2个组，第一组3只小鼠，其接受溶媒(盐水)i.v.注射；和第二组24只小鼠，其接受卡铂i.v.注射。在溶媒B的第1天或在艾日布林治疗后第15天，静脉内给予100mg/kg卡铂至所有小鼠和在麻醉下在指定的时间点0.083，0.25，0.5，1，4，8，24和48小时收集肿瘤样品(对于各时间点n＝3)。用3倍各个肿瘤的重量的1x PBS使用Mini Bead Beater-96将肿瘤匀化，和各肿瘤匀浆液中卡铂的浓度通过经验证的LC-MS方法进行分析。

药代动力学参数的计算

卡铂在肿瘤中的PK参数使用非区室方法计算(Pheonix/WinNonlin v.6.3，Pharsight；Mountain View，CA)。卡铂浓度最高的时间点表示为tmax。卡铂的最高浓度表示为Cmax。从时间零至最后可计量的时间点(AUC(0-t))和至无限(AUC(0-inf))的肿瘤浓度相对时间的曲线下观察到的面积使用梯形法计算。AUC(0-inf)计算为AUC(0-t)+AUC extrap，其中AUC extrap表示从最后可计量的时间点(Clast)至无限外推的AUC，和计算为Clast/λZ。Lamda z(λZ)，在终末阶段期间浓度相对时间的曲线的斜率，通过线性回归确定。

肿瘤浓度的均值、标准偏差(SD)和百分比变异系数(％CV)使用Excel 2010(Microsoft，Redmond，WA)计算。卡铂的PK参数的均值、SD和％CV用WinNonlin或Excel 2010确定。由于WinNonlin和Excel之间的舍入和格式化(formatting)差异，均值、SD和％CV值可出现较小差异。然而，这些差异被认为是不显著的，其并不损害研究的整合性(integrity)。

仪器操作和测定条件

HPLC系统

使用Shimadzu HPLC系统(Shimadzu Scientific Instruments，Columbia，MD)，其由自动采样器(型号：SIL HTc)、柱隔室单元(型号：CTO-20AC)、脱气器(型号：DGU-20A3)和泵(型号：LC-20AD)构成。

MS/MS条件

将AB Sciex(Foster City，CA)API5000质谱仪，其具有在正离子模式下的电喷射电离，用于样品分析。将使用N2的碰撞活化解离(CAD)用于产生结构特征性产物离子，用于定量。

卡铂浓度的计算

卡铂的峰面积使用Analyst 1.6(AB Sciex，Foster City，CA)积分，和该面积被输入Watson 7.2(Thermo Fisher Scientific，Waltham，MA)。将内标甲苯磺丁脲加入至各样品，除了没有IS的空白之外，然而由于在所有分析运行中甲苯磺丁脲的不一致的仪器响应，IS不用于定量。校准曲线通过将卡铂的峰面积针对在肿瘤匀浆物中校准标准品的浓度作图而建立。1/x2加权的线性回归(Y＝aX+b)用于计算在肿瘤匀浆物中的参数a和b。各样品中卡铂的浓度自各个标准曲线的回归方程计算。Excel 2010(Microsoft，Redmond，WA)用于计算均值、SD、百分比差异(％Diff)和％CV。所有报告的数据经过舍入。

结果

在人乳腺癌细胞系MDA-MB-231皮下异种移植物模型中在艾日布林治疗后卡培他滨的抗肿瘤作用

我们评价了有或没有用1.0mg/kg艾日布林预治疗的情况下540mg/kg卡培他滨在MDA-MB-231模型中的抗肿瘤活性，以检查艾日布林预治疗是否将改变肿瘤细胞对化学治疗剂的药物敏感性和提高卡培他滨的抗肿瘤活性。在MDA-MB-231异种移植物模型中，与没有预治疗的情况下实现的抗肿瘤活性相比，艾日布林的预治疗显著提高卡培他滨的抗肿瘤活性(图1)。

在人乳腺癌细胞系MDA-MB-231皮下异种移植物模型中艾日布林和紫杉醇的连续治疗的抗肿瘤作用

接下来，我们研究了在MDA-MB-231模型中以下连续治疗的抗肿瘤活性：Gr.1；在第0天和第7天溶媒，Gr.2；在第0天1mg/kg艾日布林和在第7天40mg/kg紫杉醇和Gr.3；在第0天40mg/kg紫杉醇和在第7天1mg/kg艾日布林。两种连续组合治疗显示显著的抗肿瘤作用，和艾日布林和紫杉醇的连续组合治疗显示清楚的抗肿瘤活性，具有肿瘤收缩(图2)。针对在无胸腺小鼠中异种移植的人乳腺癌细胞系MDA-MB-231，艾日布林接着紫杉醇治疗的抗肿瘤活性显著强于紫杉醇接着艾日布林治疗的抗肿瘤活性。

在人乳腺癌细胞系MDA-MB-231皮下异种移植物模型中艾日布林加卡铂和紫杉醇加卡铂的连续治疗的抗肿瘤作用

然后，我们研究了在MDA-MB-231模型中在第0天1mg/kg艾日布林加在第7天100mg/kg卡铂和在第0天40mg/kg紫杉醇加在第7天100mg/kg卡铂的连续治疗的抗肿瘤活性。两种连续组合治疗显示显著的抗肿瘤作用，和艾日布林加卡铂的连续组合治疗显示清楚的抗肿瘤活性，具有肿瘤收缩(图3)。针对在无胸腺小鼠中异种移植的人乳腺癌细胞系MDA-MB-231，艾日布林接着卡铂的治疗的抗肿瘤活性显示显著强于紫杉醇接着卡铂的治疗的抗肿瘤活性。

在人乳腺癌细胞系MDA-MB-231皮下异种移植物模型中在给予艾日布林后卡铂在肿瘤中的药代动力学研究

如下表1和图4所示，艾日布林预治疗组小鼠在肿瘤中具有高的卡铂暴露。如表1所示，在艾日布林预治疗组中，Cmax为溶媒B组的约2.20倍，和AUC(0-8)为溶媒B组的约1.37倍。

表1：在人乳腺癌细胞系MDA-MB-231皮下异种移植物模型中在给予艾日布林后卡铂在肿瘤中的药代动力学研究

其它实施方案

尽管本发明已经结合其具体的实施方案进行了描述，但将理解，其能够进一步改变，和本申请意欲涵盖总体上遵循本发明的原理和包括在本发明所述领域内的已知或惯常实践内的与本公开内容的偏离的本发明的任何变化、用途或改编(adaptations)，并可适用于本文所述的必要特征。

本说明书中提及的所有出版物和专利申请通过引用结合到本文中，至如同各独立的出版物或专利申请明确和单独地指出通过引用以其整体结合到本文中一样的程度。

本文中单数形式例如“a”和“the”的使用不排除指示相应的复数形式，除非上下文有相反指示。类似地，复数词语的使用不排除指示相应的单数形式。

在以下编号的段落中进一步描述本发明。

1.用于治疗患有或有风险发生乳腺癌的受试者的方法，所述方法包括给予所述受试者(i)艾日布林或其药学上可接受的盐，和随后(ii)选自卡培他滨、抗有丝分裂剂、基于铂的抗肿瘤剂、多柔比星和伊沙匹隆的第二种药剂。

2.段落1的方法，其中所述受试者是人类患者。

3.段落1或2的方法，其中所述受试者经诊断患有乳腺癌、在乳腺癌治疗中或在乳腺癌治疗后恢复中。

4.段落1-3中任一项的方法，其中所述治疗作为手术前新辅助疗法进行。

5.段落1-4中任一项的方法，其中所述乳腺癌是原发性肿瘤。

6.段落1-4中任一项的方法，其中所述乳腺癌是局部晚期的。

7.段落1-4中任一项的方法，其中所述乳腺癌是转移的。

8.段落1-7中任一项的方法，其中所述乳腺癌是雌激素受体阳性或阴性的、孕酮受体阳性或阴性的、HER-2阳性或阴性的或三阴性乳腺癌。

9.段落1-8中任一项的方法，其中艾日布林的所述药学上可接受的盐是甲磺酸艾日布林。

10.段落1-9中任一项的方法，其中所述艾日布林或所述其药学上可接受的盐通过静脉内输注给予。

11.段落10的方法，其中所述静脉内输注持续约1-约20分钟。

12.段落11的方法，其中所述静脉内输注持续约2-约5分钟。

13.段落1-12中任一项的方法，其中所述艾日布林或所述其药学上可接受的盐以约0.1mg/m²至约20mg/m²的范围的量给予。

14.段落13的方法，其中所述艾日布林或所述其药学上可接受的盐以约1.1mg/m²或1.4mg/m²的量给予。

15.段落1-14中任一项的方法，其中所述艾日布林或所述其药学上可接受的盐在21天周期的第1天和第8天各自给予一次。

16.段落1-15中任一项的方法，其中艾日布林或所述其药学上可接受的盐的给予在所述第二种药剂的给予之前完成。

17.段落1-15中任一项的方法，其中艾日布林或所述其药学上可接受的盐的给予在开始给予所述第二种药剂后继续进行。

18.段落1-17中任一项的方法，其中给予的所述第二种药剂是卡培他滨。

19.段落18的方法，其中所述卡培他滨每日给予，持续2周，接着停药1周。

20.段落1-17中任一项的方法，其中给予的所述第二种药剂是抗有丝分裂剂。

21.段落20的方法，其中所述抗有丝分裂剂是紫杉醇或多西他赛。

22.段落1-17中任一项的方法，其中所述第二种药剂是基于铂的抗肿瘤剂。

23.段落22的方法，其中所述基于铂的抗肿瘤剂选自顺铂、卡铂和奥沙利铂。

24.段落1-17中任一项的方法，其中所述第二种药剂是多柔比星。

25.段落1-17中任一项的方法，其中所述第二种药剂是伊沙匹隆。

26.段落1-25中任一项的方法，其中在1-8、2-7、3-6或4-5个剂量或全周期的所述第二种药剂之前，给予1-8、2-7、3-6或4-5个剂量或全周期的艾日布林。

27.段落1-26中任一项的方法，其中所述治疗：(i)减少癌细胞数；(ii)减少肿瘤体积；(iii)增加肿瘤消退速率；(iv)减少或减慢癌细胞侵润至周围器官；(v)减少或减慢肿瘤转移；(vi)减少或抑制肿瘤生长；(vii)预防或延迟癌症的发生和/或复发，和/或延长无疾病或无肿瘤存活时间；(viii)增加总存活时间；(ix)减少治疗频率；和/或(x)减轻与癌症相关的一个或多个症状。

28.用于减少患有乳腺癌的受试者的肿瘤大小的方法，所述方法包括给予所述受试者(i)艾日布林或其药学上可接受的盐，和随后(ii)选自卡培他滨、抗有丝分裂剂、基于铂的抗肿瘤剂、多柔比星和伊沙匹隆的第二种药剂。

29.用于增加选自卡培他滨、抗有丝分裂剂(例如，紫杉醇或多西他赛)、基于铂的抗肿瘤剂(例如，顺铂、卡铂或奥沙利铂)、多柔比星和伊沙匹隆的药剂在治疗受试者的乳腺癌中的功效的方法，所述方法包括在所述药剂之前给予所述受试者艾日布林或其药学上可接受的盐。

30.用于在患有乳腺癌的受试者中治疗乳腺癌或减少肿瘤大小的药盒，所述药盒包括(i)艾日布林或其药学上可接受的盐，和(ii)选自卡培他滨、抗有丝分裂剂(例如，紫杉醇或多西他赛)、基于铂的抗肿瘤剂(例如，顺铂、卡铂或奥沙利铂)、多柔比星和伊沙匹隆的第二种药剂，任选地呈剂量形式。

其它实施方案在随附权利要求的范围内。