一种河蚬抗氧化肽的制备方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及一种河蚬抗氧化肽的制备方法，属于生物技术领域。
【背景技术】
[0002]河蚬是重要的经济水产品之一，在我国河蚬养殖产量大，资源极其丰富，其营养丰富、味道鲜美，具有很高的食用价值和保健作用。河蚬含有丰富的蛋白质、脂肪、糖原、必需氨基酸、牛磺酸、多种维生素以及钙、磷、铁、砸等具有特殊生理作用的矿物质，还含有活性肽等生理活性物质，具有醒酒护肝、降解重金属、抗疲劳、清除自由基、抗衰老等功能。
[0003]近年来从水产蛋白中提取抗氧化活性肽的研究也逐渐展开，如已从鳞鱼、鲭鱼、巨鱿鱼皮、白虾头和黄鳍金枪鱼骨架蛋白中提取出具有显著抗氧化活性的肽段，这充分证明水产品中的优质蛋白具有制备抗氧化肽的潜力。
[0004]目前，利用河蚬制备抗氧化钛的方法已有，主要是将河蚬肉清洁，通过绞碎成河蚬肉糜，内源酶和外源酶协同水解，灭酶，添加绿茶粉和活性炭脱色除臭，膜过滤，减压浓缩和离心喷雾干燥即可制备出抗氧化肽，利用这种方法需要将河蚬杀死，造成资源的浪费，同时所制备的河蚬抗氧化肽的活性不高。
【发明内容】
[0005]本发明主要解决的技术问题:针对目前河蚬抗氧化肽制备过程中，需要使用大量的新鲜河蚬肉，造成大量的资源浪费，同时制备出的河蚬抗氧化肽纯度低，活性不高的问题，提供了一种河蚬抗氧化肽的制备方法，该方法主要是通过制备可重复使用的固体物与河蚬饲料混合，喂养河蚬，将河蚬吐出物经过复合风味蛋白，并与盐酸溶液浸泡混合物后，进行酶解和进行离心分离，喷雾干燥，制成河蚬抗氧化肽，本发明所制成的河蚬抗氧化肽抗氧化活性高，lmg/mL的反应体系羟基自由基清除率达94%以上，同时所制备的固体混合物可重复利用，不会造成资源浪费。
[0006]为了解决上述技术问题，本发明所采用的技术方案:
(1)取200?300g固体物与400?600g河蚬饲料进行混合，利用其对2?4龄、壳长2?5cm的河蚬进行饲养，饲养I?2周，然后将所饲养的河蚬放入清洗池中，向其中加入去离子水，淹没I?2cm，待其河蚬完全吐沙后，收集河蚬的吐出物；
(2)使用荧光检测器筛选出含有荧光物的吐出物，将所筛选出的吐出物放入容器中，向其中加入筛选出的吐出物质量10?15%的复合风味蛋白酶，再使用质量分数为30?40%盐酸溶液浸泡混合物，在微波功率700?900W，40?60°C条件下酶解25?30min，酶解完成后在紫外灯下灭酶，并冷却至室温；
(3)接着将冷却至室温的混合物放入离心机中进行离心分离，转速设定为8000?10000r/min，时间5?lOmin，待分离结束后，取上清液，将所得的上清液进行喷雾干燥，即可制得一种河蚬抗氧化肽。
[0007]所述的步骤(I)中固体物的制备方法为: (1)取I?2kg高炉渣放入粉碎机中进行粉碎，过筛得80?100目颗粒物，再将其放入温度设定为110?120°C的烘箱中烘干I?2h，待烘干结束后，立即取出并将其放入质量分数为5?10%的温度为5?10 °C的丁二烯基三乙氧基硅烷乙醇溶液中，在转速550?700r/min 下，揽摔 40 ?50min ；
(2)待上述搅拌结束后，静置20?30min后过滤，将所得的过滤物放入容器中，向其中加入质量分数为30?45%的盐酸溶液浸泡过滤物，再向其中加入300?400g卤磷酸钙，搅拌均匀；
(3)接着分别向其中加入I?2L质量分数为10?15%的碳酸钠溶液，300?320mL质量分数为90?95%的2，5_ 二甲基_2，5 二叔丁基过氧化己烷的乙醇溶液，150?200mLl-乙烯基-3- 丁基咪唑氯及400?500mL质量分数为40?50%的四甲基乙二胺溶液，对容器进行密封，使用氧气将容器内的空气排出，搅拌I?2h，在搅拌过程中，保持温度为35?40°C，搅拌结束后过滤，使用去离子水对过滤物进行冲洗2?4次，自然风干，即可得到固体物。
[0008]本发明的应用:取新鲜的猪肉，使瘦肉与肥肉的比例为4:1，向其中加入猪肉质量2%的上述制备的河蚬抗氧化肽，接着向其中加入质量分数为1.5%的食盐，混合均匀后再将肉糜制成肉饼，每份重40?50g，然后将肉饼放入油中制熟，冷却后放入塑料盒中，用保鲜膜封好，4°C下保存即可。将河蚬抗氧化肽加入至肉糜中，延缓了肉糜的氧化，并使肉糜保持鲜红的颜色。
[0009]本发明的有益效果是:
(1)河蚬抗氧化肽抗氧化活性高，lmg/mL的反应体系轻基自由基清除率达94%以上；
(2)所制备的固体混合物可重复利用，不会造成资源浪费；
(3)制备步骤简单，所需成本低。
【具体实施方式】
[0010]首先取200?300g固体物与400?600g河蚬饲料进行混合，利用其对2?4龄、壳长2?5cm的河蚬进行饲养，饲养I?2周，然后将所饲养的河蚬放入清洗池中，向其中加入去离子水，淹没I?2cm，待其河蚬完全吐沙后，收集河蚬的吐出物；使用荧光检测器筛选出含有荧光物的吐出物，将所筛选出的吐出物放入容器中，向其中加入筛选出的吐出物质量10?15%的复合风味蛋白酶，再使用质量分数为30?40%盐酸溶液浸泡混合物，在微波功率700?900W，40?60°C条件下酶解25?30min，酶解完成后在紫外灯下灭酶，并冷却至室温；接着将冷却至室温的混合物放入离心机中进行离心分离，转速设定为8000?10000r/min，时间5?lOmin，待分离结束后，取上清液，将所得的上清液进行喷雾干燥，即可制得一种河蚬抗氧化肽。
[0011]其中固体物的制备方法为:首先取I?2kg高炉渣放入粉碎机中进行粉碎，过筛得80?100目颗粒物，再将其放入温度设定为110?120°C的烘箱中烘干I?2h，待烘干结束后，立即取出并将其放入质量分数为5?10%的温度为5?10°C的丁二烯基三乙氧基硅烷乙醇溶液中，在转速550?700r/min下，搅拌40?50min ;待上述搅拌结束后，静置20?30min后过滤，将所得的过滤物放入容器中，向其中加入质量分数为30?45%的盐酸溶液浸泡过滤物，再向其中加入300?400g卤磷酸钙，搅拌均匀；接着分别向其中加入I?2L质量分数为10?15%的碳酸钠溶液，300?320mL质量分数为90?95%的2，5- 二甲基-2，5 二叔丁基过氧化己烷的乙醇溶液，150?200mLl-乙烯基-3- 丁基咪唑氯及400?500mL质量分数为40?50%的四甲基乙二胺溶液，对容器进行密封，使用氧气将容器内的空气排出，搅拌I?2h，在搅拌过程中，保持温度为35?40°C，搅拌结束后过滤，使用去离子水对过滤物进行冲洗2?4次，自然风干，即可得到固体物。
[0012]实例I
首先取300g固体物与600g河蚬饲料进行混合，利用其对4龄、壳长5cm的河蚬进行饲养，饲养2周，然后将所饲养的河蚬放入清洗池中，向其中加入去离子水，淹没2cm，待其河蚬完全吐沙后，收集河蚬的吐出物；使用荧光检测器筛选出含有荧光物的吐出物，将所筛选出的吐出物放入容器中，向其中加入筛选出的吐出物质量15 %的复合风味蛋白酶，再使用质量分数为40%盐酸溶液浸泡混合物，在微波功率900W，60°C条件下酶解30min，酶解完成后在紫外灯下灭酶，并冷却至室温；接着将冷却至室温的混合物放入离心机中进行离心分离，转速设定为10000r/min，时间lOmin，待分离结束后，取上清液，将所得的上清液进行喷雾干燥，即可制得一种河蚬抗氧化肽。
[0013]其中固体物的制备方法为:首先取2kg高炉渣放入粉碎机中进行粉碎，过筛得100目颗粒物，再将其放入温度设定为120°C的烘箱中烘干2h，待烘干结束后，立即取出并将其放入质量分数为10%的温度为10°C的丁二烯基三乙氧基硅烷乙醇溶液中，在转速700r/min下，搅拌50min ;待上述搅拌结束后，静置30min后过滤，将所得的过滤物放入容器中，向其中加入质量分数为45%的盐酸溶液浸泡过滤物，再向其中加入400g卤磷酸钙，搅拌均匀；接着分别向其中加入2L质量分数为15%的碳酸钠溶液，320mL质量分