一种基于抗菌肽制备的水产饲料的利记博彩app
【技术领域】
[0001] 本发明涉及饲料制备技术领域，尤其涉及一种基于抗菌肽制备的水产饲料。
【背景技术】
[0002] 我国是目前世界最大的水产品养殖国，水产养殖占全世界养殖总量和70%左右， 而为提高水产动物的抗病性和生长率，在养殖过程中通常使用一定剂量的抗生素等，从而 产生的细菌耐药性，水产品食品安全，生态安全等系列问题，使得养殖环境进入恶性循环， 养殖效益下降。
[0003] 抗菌肽（antibacterialpeptides，ABP)是生物免疫防御系统在受到外界刺激 时产生的一类具有生物活性的小分子多肽，分子量多在2000~7000Da，由20~60个氨基酸 残基组成，是生物体天然免疫防御系统的重要组成部分。乞今为止，已在许多生物包括昆 虫、鸟类、动物、植物及原核生物中发现2500多种抗菌肽。抗菌肽具有强碱性、热稳定性以 及广谱杀菌、抗菌等特点，对生物的天然免疫起关键作用，作用机理独特，不仅能杀死革兰 氏阳性及阴性菌，还具有抗真菌、病毒、原虫及抑制癌细胞的活性。对耐药菌株有明显的杀 伤作用，同时对生物体的正常细胞无害，提高动物免疫力等特点，具有广阔的发展前景。作 为一种新型饲料添加剂，其在水产养殖业的应用受到了普遍关注。与抗生素相比，具有无污 染、无毒副作用、不产生耐药性等优点，符合绿色环保饲料的要求，是理想的抗生素替代品 因此，现有技术还有待于改进和发展。
【发明内容】
[0004] 鉴于上述现有技术的不足，本发明的目的在于提供一种基于抗菌肽制备的水产饲 料，旨在解决目前水产养殖过程中传统饲料带来的水产生物免疫力下降、药物残留、微生态 失衡等问题。
[0005] 本发明的技术方案如下： 一种基于抗菌肽制备的水产饲料，其中，所述水产饲料按重量份数计包括： 豆柏 25-30份； 面粉 24. 55-30份； 次粉 10~15份 菜籽柏 20~30份 朽1檬酸 5-8份； 鱼粉 15-35份； 米糖柏 1CK14份； 酵母提取物 3-5份； 60%氯化胆碱 0. 5-1份； 肉骨粉 5-10份； 磷酸二氢钙 1-2份； 中药制剂 0. 05-0. 1份； 多维多矿预混剂 0. 5~1. 5份 氯化钾 0. 3~0. 5份 鱼油 1~2份 豆油 1~2份 抗菌肽制剂（CAD) 0? 025-0. 15份； 所述的基于对奸抗菌肽制备的水产饲料，其中，所述抗菌肽制剂效价为20000~40000u/g，其以玉米淀粉为载体。
[0006] 所述的基于对奸抗菌肽制备的水产饲料，其中，所述抗菌肽制剂中抗菌肽的氨基 酸序列为：KWKLFKKIEKVGQRVRDAVISAGPAVATVAQATALAKN 所述的基于对虾抗菌肽制备的水产饲料，其中，所述抗菌肽由如下核苷酸序列的基因 编码得到：ATGAAATGGAAGTTGTTCAAAAAGATTGAAAAGGTTGGTCAAAGAGTTAGAGACGCTGTCATCTCTGC TGGTCCTGCTGTTGCCACTGTTGCTCAAGCTACTGCCTTGGCTAAGAACTAA 所述的基于对虾抗菌肽制备的水产饲料，其中，所述抗菌肽的制备过程如下： A、 将该抗菌肽的编码基因与质粒PHIL-S1构建为表达载体； B、 将融合表达载体转化入毕赤酵母GS115,构建表达工程菌； C、 发酵培养表达工程菌，并进行甲醇诱导表达； D、 发酵产物经亲和层析得到纯化的抗菌肽融合蛋白，抗菌肽融合蛋白经纯化得到抗菌 肽产品。
[0007] 所述的基于对虾抗菌肽制备的水产饲料，其中，所述水产饲料按重量份数计包 括： 豆柏 30份； 面粉 24. 625份； 朽1檬酸 5份； 鱼粉 25份； 米糖柏 1〇份； 酵母提取物 3份； 60%氯化胆碱 0. 5份； 肉骨粉 8份； 磷酸二氢钙 1份； 中药制剂 〇. 05份； 多维多矿预混剂 〇. 5份 氯化钾 〇. 3份 鱼油 1份 豆油 1份 抗菌肽制剂（CAD) 0? 025份。
[0008] 所述的基于对虾抗菌肽制备的水产饲料，其中，所述豆柏的粗蛋白重量百分比为 48% 〇
[0009] 所述的基于对虾抗菌肽制备的水产饲料，其中，所述中药制剂按重量百分比计由 以下成分组成： 金银花 15-20% ; 五味子 6-10% ; 丹参 20-25% ; 仙人掌 35-40% ; 蜂胶 5-15%。
[0010] 所述的基于对虾抗菌肽制备的水产饲料，其中，所述中药制剂按重量百分比计由 以下成分组成： 金银花 18% ; 五味子 10% ; 丹参 20% ; 仙人掌 40% ; 蜂胶 12%。
[0011] 有益效果：本发明提供一种基于抗菌肽制备的水产饲料，本发明结合特定的抗菌 肽制剂制备得到水产饲料，适用于养殖鱼、虾等水生动物，增强水生动物的免疫力，有效预 防疾病，提高养殖效益，有效解决动物规模化健康养殖与食品安全与生态安全问题。同时本 发明的水产饲料可提高养殖动物增重率、成活率，降低饲料系数，并大幅提高水产品质量， 从而提尚养殖效益。
【具体实施方式】
[0012] 本发明提供一种基于对虾抗菌肽制备的水产饲料，为使本发明的目的、技术方案 及效果更加清楚、明确，以下对本发明进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施 例仅仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。 本发明提供一种基于抗菌肽制备的水产饲料，其中，所述水产饲料按重量份数计包 括： 豆柏 25-30份； 面粉 24. 55-30份； 朽1檬酸 5-8份； 鱼粉 25-35份； 米糖柏 1CK14份； 酵母提取物 3-5份； 60%氯化胆碱 0. 5-1份； 肉骨粉 5-10份； 磷酸二氢钙 1-2份； 中药制剂 0. 05-0. 1份； 多维多矿预混剂 0. 5~1. 5份 氯化钾 0. 3~0. 5份 鱼油 1份 豆油 1份 抗菌肽制剂（CAD) 0? 025-0. 15份； 其中，所述抗菌肽制剂效价为20000~40000u/g，其以玉米淀粉为载体。进一步分析得 到上述抗菌肽制剂中抗菌肽的氨基酸序列为：KWKLFKKIEKVGQRVRDAVISAGPAVATVAQATALAKN 通过对编码基因序列分析，所述抗菌肽由如下核苷酸序列的基因编码得到：ATGAAATGG AAGTTGTTCAAAAAGATTGAAAAGGTTGGTCAAAGAGTTAGAGACGCTGTCATCTCTGCTGGTCCTGCTGTTGCCAC TGTTGCTCAAGCTACTGCCTTGGCTAAGAACTAA 该抗菌肽的制备可通过如下过程实现： 构建表达载体：根据该抗菌肽的编码序列ATGAAATGGAAGTTGTTCAAAAAGATTGAAAAGGTTG GTCAAAGAGTTAGAGACGCTGTCATCTCTGCTGGTCCTGCTGTTGCCACTGTTGCTCAAGCTACTGCCTTGGCTAAG AACTAA与pHIL-Sl质粒重组，转化大肠杆菌DH5a，在含有Amp平板上挑选转化子，提取质 粒，用EcoRI及XhoI酶切，和PCR扩增，电泳获得141bp的特异区带。再与pPICZa-A质 粒重组，得到PACAD5，经酶切，电泳后，确认本抗菌肽基因正确，用锂盐法将pACAD5基因转 化于毕赤酵母GS115,用Zeocin平板筛选转化子，获得抗菌肽CAD基因毕赤酵母工程菌株。
[0013] 发酵培养表达工程菌，并进行甲醇诱导表达。在培养基中37°C、200转/分发酵 培养表达工程菌约24小时至0D600达到0. 6 ;加入终浓2%甲醇、继续诱导表达96小时。
[0014] 抗菌肽的纯化，采用CM-SephroseFF树脂，是阳离子交换树脂，用0?lmol/L乙 酸-乙酸铵饱和后，注入抗菌肽发酵液，吸附饱和后，用0. 1~1. 0m〇l/L的乙酸-乙酸盐梯 度洗脱，流速5mL/min，收集，喷雾干燥即得 另外，所述酵母提取物的加工过程是将以糖蜜为原料发酵的新鲜酵母，每10L计，经 过滤、洗脱离心处理后，离心机转速为5000r/min，离心20min，在离心洗脱后的菌体中加入 木瓜蛋白酶30000IU、胰蛋白酶100000IU，在反应器中保温反应，温度控制在45°C，反应20 小时；随后提高温度到95°C，再保温反应2小时，然后喷雾干燥，喷雾干燥的喷头转速为 15000r/min，进口温度为220°C，出口温度为100°C，负压90mpa，即得到酵母提取物，将所 得的酵母提取物冷却后包装。
[0015] 本发明使用的豆柏优选二级豆柏（cp48,粗蛋白质含量彡48%)。
[0016] 优选实施例中，所述水产饲料按重量份数计包括： 豆柏 30份； 面粉 14. 625份； 次粉 10份 朽1檬酸 5份； 鱼粉 25份； 米糖柏 1〇份； 酵母提取物 3份； 60%氯化胆碱 0. 5份； 肉骨粉 8份； 磷酸二氢钙 1份； 中药制剂 〇. 05份； 多维多矿预混剂 〇. 5份 氯化钾 〇. 3份 鱼油 1份 豆油 1份 抗菌肽制剂（CAD) 0.025份； 其中，所述中药制剂按重量