一种鸡皮磷脂提取物的制备方法
【专利说明】
一、技术领域
[0001]本发明涉及一种鸡皮磷脂提取物的制备方法，属于食品生物技术领域。
二、【背景技术】
[0002]功能性脂质包括磷脂、糖脂和其他衍生物，是构成人体生物膜的重要组成成分。而这些功能性脂质成分绝大多数均为极性脂质。磷脂的摄入可抑制血栓、活化防御机能、促进吞噬作用，并参与体内有关代谢，产生一系列生理活性物质，调节生理机能。代表性的磷脂有脑磷脂、卵磷脂、鞘磷脂、磷脂酰丝氨酸、缩醛磷脂等，这些磷脂在人体生命活动中发挥重要作用，经常使用能够促进脂肪的新陈代谢、改善大脑机能，对肝病、心脑血管疾病、神经性疾病、糖尿病、阿尔茨海默病(老年痴呆症)等病均有一定的疗效。
[0003]根据前人的研宄表明，功能性脂质主要存在于动物的脑、皮肤等其他组织，也存在于发芽的大豆籽粒中。鸡是人类驯化较早的家禽，养殖最规模大、消费量最多。近年来，我国鸡产品加工业发展很快，但鸡生产中的废弃物尚未得到充分的利用。鸡皮中含脂质成分最多，其中包括中性和极性脂肪、酰脂。多不饱和脂肪酸的含量较高。多不饱和脂肪酸相对饱和脂肪酸来说具有更多的功效，它可以降低血中胆固醇和甘油三脂，调节心脏功能，改善血液微循环，降低血液粘稠度，提高脑细胞的活性等。
[0004]发明专利“含类脂物的大豆提取物及其制造方法和药用及化妆品用组合物”(公开号:CN1335774A)，公开日:2002年2月13日，公开了大豆萃取物的制备方法，确定了鞘磷脂和磷脂的含量，但与本发明的磷脂提取对象和生产工艺完全不一样，发明专利“以来自皮的鞘磷脂含有物为有效成分的抗高血糖和/或抗高血脂症剂“(公开号:CN102421439A)公开日:2012年4月18日，专利提取原料为鸟皮，但提取工艺及应用领域完全不一样，且权利要求内容不同。
[0005]本发明所提供的方法为一种鸡皮中磷脂提取物的制备方法，操作方法简便，成本低，提取率较高，且可以合理的利用鸡加工副产物，适合工业化生产，生产出来的提取物可作为保健食品的原材料，广泛应用于保护血管、改善记忆等产品开发。
三、
【发明内容】
[0006]技术问题
[0007]本发明的目的是提供一种鸡皮中功能性磷脂的制备方法，可以合理的利用鸡加工副产物，本发明所提供的功能性磷脂的分离方法操作简便，成品低，提取率较高，能够广泛适用于鸡皮中功能性磷脂的分离纯化。
[0008]技术方案
[0009]1、本发明所提供的鸡皮中功能性磷脂的制备具体方法为:
[0010](I)备料:鸡皮均浆或剪碎至2?4mm ;
[0011](2)溶剂准备:提取液为氯仿:甲醇按适当体积比配制；
[0012](3)总脂质的提取:按合适的料液比添加，恒温振荡提取，静置收集上清液，重复2次，将三次上清液过滤合并，加入适当比例的氯仿、甲醇和水的混合液，静置过夜分层，收集脂质层；
[0013](4)干燥:将得到的总脂质旋转蒸发，真空干燥至恒重；
[0014](5)硅胶柱的制备:取适量硅胶于高温下活化，装柱；
[0015](6)极性脂质分离:称取一定量的总脂质，用氯仿和甲醇洗脱，中性脂质洗脱剂为氯仿，极性脂质洗脱剂为甲醇；
[0016](7)浓缩:将甲醇洗脱的极性脂质，用旋转蒸发仪浓缩，真空干燥至恒重；
[0017](8)储存:冷冻储存。
[0018]发明效果
[0019](I)本发明选取鸡皮为原料，鸡皮中含脂质成分最多，功能性脂质含量较高，合理的利用了鸡产品加工副产物，避免了农产品废弃物的浪费。
[0020](2)本发明所制备的功能性磷脂，主要由磷脂酰乙醇胺、磷脂酰胆碱、磷脂酰丝氨酸、鞘磷脂和磷脂酰肌醇组成，是构成人体生物膜的重要组成成分，适量摄入可促进脂肪的新陈代谢、改善大脑机能，对心脑血管疾病、肝病、神经性疾病、糖尿病、老年痴呆等预防和治疗有一定的效果。
[0021](3)本发明对鸡皮中功能性磷脂提取物的制备方法进行了优化，确定了最佳料液比、中性脂质及极性脂质洗脱剂的用量等提取条件，总脂质的提取率较高，本发明采用柱层层析对总脂质进行分离，通过对洗脱剂用量及流速的控制，即可以有效去除中性脂质，同时不会引起极性脂质降解，操作简单，成本较低，且能够广泛适用于鸡皮中功能性磷脂的制备，总脂质的提取率为35%?45%，极性脂质约为2%?4%。
四、【附图说明】
[0022]图1为鸡皮中功能性脂质分离工艺流程图。
[0023]图2为鸡皮中功能性脂质的TLC图。
[0024]图3为鸡皮中功能性脂质的GC-MS总离子图。其中数字代表意义:1，肉豆蔻酸甲酯；2，十五烷酸甲酯；3，顺-7-十六碳烯酸甲酯；4，棕榈油酸甲酯；5，十六烷酸甲酯；6，十七烷酸甲酯；7，顺-9-十八碳二烯酸甲酯；8，油酸甲酯；9，11-十八碳烯酸甲酯；10，十八碳烯酸甲酯。
五、具体实施方案
[0025]下面具体说明本发明，但本发明不限定于下述例子。
[0026]实施例1:
[0027](I)备料:精密称取南京土鸡鸡胸体鸡皮50g，用剪刀剪碎至约4mm ；
[0028](2)溶剂准备:提取液为氯仿:甲醇按2: I体积比配制；
[0029](3)总脂质的提取:加入300mL氯仿:甲醇(2:1v: v)后在恒温振荡器提取lh，静置收集上清液，残渣加200mL氯仿:甲醇(2:1v: V)提取lh，重复2次，温度控制在35°C左右，将3次上清液过滤合并，用氯仿:甲醇:蒸饱水(8: 4: 3v: V: V)进行分层，收集脂质层；
[0030](4)干燥:将分离的脂质层用旋转蒸发仪浓缩，45°C真空干燥至衡重，得总脂质；
[0031](5)硅胶柱的制备:称取1g硅胶于烧杯，在120°C高温下活化2h，加入40ml氯仿溶解，倒入层析柱中；用氯仿溶液进行冲液，直至透明；
[0032](6)极性脂质分离:随后将500mg脂质滴入层析柱，用175mL氯仿及200mL甲醇溶液洗脱，流速大约每分钟3ml，中性脂质洗脱剂为氯仿，极性脂质洗脱剂为甲醇；
[0033](7)浓缩:将甲醇洗脱的极性脂质，用旋转蒸发仪浓缩，45°C真空干燥至恒重；
[0034](8)储存:_20°C冷冻储存
[0035](9)薄层色谱法(TLC)鉴定脂质成分:以鞘磷脂，卵磷脂，脑磷脂，磷脂酰肌醇为标样，样品点用量为20 μ I。氯仿:甲醇:蒸馏水￠5: 25: 4v/v/v)为展开剂，展开剂展开至巨薄层板上缘2cm处将板取出，晾干，用硫酸:乙醇(25: 75v/v)溶液喷雾后120°C烘干显色鉴定。
[0036](10)气相色谱-质谱联用(GC-MS)鉴定功能性脂质的脂肪酸组成:
[0037]根据上述鸡皮功能性磷脂提取物的制备方法，得到功能性脂质含量为2.61%。
[0038]实施例2:
[0039](I)备料:精密称取新疆拜城油鸡鸡胸体鸡皮10g，用剪刀剪碎至约4mm ；
[0040](2)溶剂准备:提取液为氯仿:甲醇按2: I体积比配制；
[0041](3)总脂质的提取:加入60mL氯仿:甲醇(2:1v: v)后在恒温振荡器提取lh，静置收集上清液，残渣加40mL氯仿:甲醇(2:1v: V)提取lh，重复2次，温度控