一种茄子花药诱导培养基及配制方法
【技术领域】
[0001] 本发明设及一种茄子花药诱导培养基及配制方法，具体设及一种可W显著提高茄 子花药培养效率的花药诱导培养基及其配制方法，属于农业科学技术领域。
【背景技术】
[0002] 茄子（Solanum melongene L.)，别名落苏、伽、酪酥、昆仑瓜、小潇等，是茄科茄属 W浆果为产品的一年生草本植物。茄子起源于亚洲东南的印度、细甸及其临近的热带地区。 古印度为最早的驯化地，至今印度仍有茄子野生种和近源种。茄子除鲜食外，还可W加工制 成酱茄子、騰茄或茄子干等。茄子果实富含人体所需的蛋白质、维生素、粗纤维和矿物质等， 特别是其中富含的维生素 P在果蔬中含量最高，可W增加毛细血管的弹性和细胞间的黏力， 防止微血管破裂，特有的维生素 D可W降低血液中的胆固醇含量，经常食用茄子可防止动脉 硬化和屯、血管疾病，还能增强肝脏生理功能，预防多种肝脏疾病，是一种良好的保健蔬菜。
[0003] 茄子在全世界都有分布，W亚洲最多，占世界总产量的74%。茄子在我国栽培历史 悠久，类型品种繁多，是我国非常重要的果菜类蔬菜，在我国南北各地普遍栽培，2005年种 植面积达到105.4万公顷，栽培面积在蔬菜作物中排第四位，产量居世界之首，是我国夏秋 的主要栽培蔬菜之一。茄子除了作为一种重要的果菜类蔬菜外，在遗传育种、细胞学等方面 也是很重要的研究对象，因此，开展茄子育种一直是蔬菜育种领域的重点工作。
[0004] 我国的茄子育种方式一直W来都W常规杂交育种为主，周期长、见效慢，不能切实 满足生产上对茄子良种的迫切需求，单倍体育种是解决运一问题的重要的育种方法之一。 单倍体育种可W大大提高育种选择的效率，缩小育种群体的规模，并缩短育种年限。花药培 养和小抱子培养是获得单倍体的主要途径。经花药培养得到的花粉株系间性状变异幅度 大，超亲现象和出现特殊优良性状的频率要显著高于常规育种，株系内性状整齐，世代间稳 定性强，通过花药或小抱子培养选育出的自交系具有高度的纯和性，W此配制的杂交组合 往往具有更强的杂种优势。
[0005] 茄子花药培养的研究开始于20世纪70年代初。1973年Raina和Lyer通过花药培养 经愈伤组织获得了茄子单倍体植株。同年，我国的王纪方等通过培养茄子花药也成功的获 得了纯合的单倍体植株。1975年北京市农科院蔬菜所单倍体育种组W六叶茄、九叶茄为材 料经花药培养同样获得了单倍体植株，经花药培养培育出品种尤丹茄一号，该品种已在生 产上推广应用。1987年，Tuberosa R等进行茄子花药培养试验，成功地通过胚状体途径成 苗，得到了单倍体植株。1996年，Miyoshi通过直接培养游离小抱子的方法，经愈伤组织途径 获得了再生植株;2004年，连勇等W四倍体茄子为材料进行了游离小抱子培养，获得了再生 植株;2007年，孙振英等利用茄子离体小抱子培养技术，通过愈伤组织途径再生获得了茄子 二倍体栽培种的再生植株。
[0006] 茄子花药培养研究虽取得了较大进展，但在理论和应用上仍存在一些问题。至今， 关于茄子小抱子由配子体发育途径向抱子体途径转变，进而形成单倍体植株的发育调控机 理尚不明确，培养基成分及培养条件间相互作用关系不清楚，茄子花药培养愈伤组织、不定 芽诱导率低的问题仍然不能很好的解决，运严重的影响着茄子花药培养技术的进一步发 展。因此，加快茄子花培育种机理研究，开发出花药愈伤诱导率分化率更高的培养基，具有 重要的现实需求。
【发明内容】
[0007] 本发明的目的是针对目前茄子花培育种中花药诱导愈伤组织效率较低的现状，提 供了一种茄子花药诱导培养基及配制方法。
[0008] 本发明的目的是通过W下方式实现的： 一种茄子花药诱导培养基及配制方法，其特征在于:所述培养基的组成为： 大量元素：KN03 1800~2000mg/L，NH4N〇3 1600~1700mg/L，K出P〇4 650~750mg/L， MgS〇4.7出0 350~400mg/L，CaCl2.2出0 400~480mg/l; 微量元素：MnS〇4.4出0 20~25mg/L，ZnS〇4.7出0 8.0~9.0mg/L，曲B03 11 ~13mg/L，KI 0.75~0.85mg/L，CuS〇4.5此0 0.02~0.03mg/L，CoCl.細2〇 0.02~0.03mg/L，NaMo〇4.2出0 0.2~0.3mg/X; 铁盐及络合剂：FeS〇4.7出0 50~60mg/L，化2-邸TA.2出0 70~80mg/L; 有机成分:肌醇230~270mg/L，维生素 BI 0.45~0.55mg/L，维生素 B6 0.45~0.55mg/ L，维生素 C 40~50mio1/L，烟酸0.45~0.55mg/L，叶酸0.25~0.35mg/L，丝氨酸55~ 65mg/L，丙氨酸 14~18mg/l; 无机添加物:AgN〇3 7.5~8.5mg/L，活性炭1.6~2.0g/L; 植物生长调节剂：2,4-D 0.45~0.55mg/L，IAA 0.35~0.45mg/L，ZT 0.35~0.45mg/L; 生理活性物质：马铃馨提取液45~55g/L，挪乳23~27g/l; 碳源:葡萄糖45~55g/L，纤维二糖18~22g/l; 凝固剂及其它添加物：植物凝胶4.7~5.3g/L，甘露醇35~45g/L，水解蛋白0.9~ l.lg/Lo
[0009] 所述的培养基的组分的最佳含量为： 大量元素：KN03 1900mg/L，NH4N〇3 1650mg/L，K此P〇4 700mg/L，MgS〇4.7此0 375mg/L， CaCl2.2出0 440mg/L; 微量元素：MnS〇4.4H2〇 22.5mg/L，ZnS〇4.7此0 8.5mg/L，曲B03 12mg/L，KI 0.8mg/L， 化504.5出0 0.025111邑/1，(：〇(：1.6出0 0.025111邑/1，船]\1〇04.2出0 0.25111邑/1; 铁盐及络合剂:FeS〇4.7出0 55mg/L，化2-邸TA.2出0 75mg/L; 有机成分:肌醇250mg/L，维生素 BI 0.5mg/L，维生素 B6 0.5mg/L，维生素 C 8mg/L，烟 酸 0.5mg/L，叶酸 0.3mg/L，丝氨酸 60mg/L，丙氨酸 16mg/l; 无机添加物:AgN〇3 8mg/L，活性炭1.8g/l; 植物生长调节剂：2,4-D 0.5mg/L，IAA 0.4mg/L，ZT 0.4mg/L; 生理活性物质：马铃馨提取液50g/L，挪乳25g/l; 碳源:葡萄糖50g/L，纤维二糖20g/l; 凝固剂及其它添加物:植物凝胶5g/L，甘露醇40g/L，水解蛋白Ig/L。
[0010]所述的培养基配方的配制抑值为：5.6~6.0，最佳配制抑值为5.8。
[0011]所述的培养基的配制方法包括如下步骤： (1) 配制母液 大量元素、微量元素、铁盐及络合剂母液分别配制成ioaooao倍的母液;肌醇单独配 制成40倍母液，其它有机成分配制成500倍母液；IAA和ZT分别将称量好后用少量无水酒精 溶解，然后用热的蒸馈水定容，2,4-D称量好后加入Imol/L的NaOH,磁力揽拌器揽拌IOh即溶 解，2，4-D、ZT和IAA母液均配制成0.5g/L; 所有母液预先配制，4 °C冷藏保存备用，IAA需用栋色容量瓶装，避光保存； (2) 制备生理活性物质 马铃馨提取液的制备：将马铃馨块茎洗净后称取50g，带皮切成碎片，加入100mL蒸馈 水，煮沸20min，用4~6层纱布过滤静置，待沉淀后将取上清液； 挪乳的提取:将新鲜挪汁从挪壳中取出放入容器中，加热至80°C左右，稍静置后过滤至 密封塑料瓶中，-20°C冷藏保存备用； (3) 配制培养液 先在烧杯中加入一些蒸馈水，分别量取所需量的大量元素、微量元素、铁盐及络合剂、 肌醇母液、有机成分母液加入烧杯中，将称量好的AgN〇3、活性炭、薦糖、纤维二糖、甘露醇、 水解蛋白、马铃馨提取液和挪乳加入烧杯中，揽拌溶解定容至IL后用P的十调节pH值； (4) 培养液加热溶解与分装 将称量好的植物凝胶加入配好的培养液中，用电炉加热至沸腾，边加热边用玻璃棒揽 拌，直到液体呈透明状后停止加热，稍微冷却后，按照25ml培养基/瓶分装入100mLS角瓶 中，封口膜密封，扎紧； (5) 培养基高压蒸汽灭菌 将S角瓶置于溫度为12rC、压力为15k化高压蒸汽条件下灭菌20min，而后降溫至55°C 左右取出，置于超净工作台中； (6) 培养基内添加 IAA 按照25ml培养基/瓶的用量计算需加入的IAA母液用量，无菌操作下加入已灭菌的IAA 母液，趁热摇匀，密封后自然冷却。
[0012] 所述步骤6中的IAA母液的灭菌方法为：用灭菌的0.22WI1的微孔滤膜无菌操作，过 滤灭菌。
[0013] 本发明所述的培养基具有高效率地诱导茄子花药产生花粉愈伤、培养基褐化轻的 优点，可W显著提高茄子花药培养效率，加快茄子花培育种进程。
【具体实施方式】
[0014] 下面结合实施案例对本发明作进一步说明，而非限制本发明。
[001引实施例1 (1)配制母液 大量元素母液：按照培养基中大量元素的配方:KN03 1900mg/L，NH4W)3 1650mg/L， K出P04 700mg/L，MgS04,7出0 375mg/L，CaCl2,2出0 440mg/L配制大量元素母液，各成分溶解 在一起，配制为10倍的母液； 微量元素母液：按照培养基中微量元素的配方:MnSCk ? 4出0 22.5mg/L，ZnS04 ? 7出0 8.5111邑/1^，出803 12111邑/1^，1(10.8111邑/1^，化504.5出0 0.025111邑/1^，〔0〔1.6出0 0.025111邑/1^，胞1004 ? 2出O 0.25mg/L配制微量元素母液，各成分溶解在一起，配制为100倍的母液； 铁盐及络合剂母液:按照培养基中铁盐及络合剂的配