一种甲基营养型芽孢杆菌可湿性粉剂的制备方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及生物农药与微生物肥料领域，具体涉及一种含芽孢萌发剂的甲基营养 型芽孢杆菌可湿性粉剂及其制备方法。
【背景技术】
[0002] 我国每年使用大量的化学农药制剂与化肥，极易造成农药残留超标，生物富集，不 仅污染生态环境，还影响人类的健康。而生物农药副作用小，对人无害，是一种具有广阔前 景的绿色农药，日益成为全球农药发展的一种趋势。
[0003] 芽孢杆菌是目前生物农药与微生物肥料中研究最多的一种微生物，它具有广谱抗 菌活性和极强的抗逆能力，其营养细胞能在真菌性病原菌丝体表面繁衍定殖，有效抑制病 菌生长，因此，在控制病害发生、促进植株生长，提高作物产量等方面显示出了广阔的应用 前景。
[0004] 甲基营养型芽孢杆菌是一种嗜温、好氧、产芽孢的杆状细菌，其生理特征多样，该 菌在自然界中广泛存在，具有独特的一碳代谢途径，能够将自然界中取之不尽的一碳化合 物如甲醇、甲醛等转变为菌体自身所需的营养物质，同时又会产生多种有益的代谢副产物 丝氨酸、维生素 B12、聚P羟基丁酸盐等。对人畜无毒无害，不污染环境，具备生命力强，能产 生多种抗菌素和酶，具有抗菌活性和极强的抗高温，抗强酸强碱能力，甲基营养型芽孢杆菌 不仅可以在土壤、植物根际体表等外界环境中广泛存在，而且是植物体内常用见内生细菌， 尤其是在植物的根、茎内部。甲基营养型芽孢杆菌通过成功定植于烟草、水稻等植物根际、 体表或体内，改变其周围菌群环境和种类，与病原菌竞争植物周围的位点，并且分泌多种抗 菌物质以抑制病原菌生长，同时诱导植物防御系统抵御病原菌入侵，从而达到改良土壤和 生防的目的，具有防病和促生作用。因此国内这几年对其研究较多，如吕倩等在南海深海分 离一株甲基型营养型芽孢杆菌具有较强抑制黄瓜炭疽病菌、立枯丝核菌、黄瓜枯萎病菌等 植物病原真菌的活性，有防治作物真菌病害的研发价值。
[0005] 王洪梅从土壤中分离筛选出一株对番茄青枯病病原菌有较强抑菌效果的甲基营 养型芽孢杆菌株N5。菌株N5具有产生铁载体、β-1，3_葡聚糖酶、纤维素酶、蛋白酶以及多种 脂肽类抗菌物质的能力。菌体发酵后与有机肥(猪粪:氨基酸肥料=1:1)混合后进行二次发 酵制成生物有机肥，并用盆栽试验验证其生防和促生效果。结果表明：利用菌株Ν5制备的生 物有机肥可以促进番茄的生长，提高根系的活力。生物有机肥可有效防治番茄青枯病，其中 营养钵使用生物有机肥的处理其生防效果优于大盆使用生物有机肥的处理，特别是营养钵 和大盆均使用生物有机肥的处理其生防效果达69%，而使用有机肥并不能有效防治番茄青 枯病。使用生物有机肥显著增加根际土壤中细菌、放线菌的数量，减少真菌和青枯劳尔氏菌 的数量。
[0006] 赵月菊等在专利号201410601775.4中公开了一株甲基营养型芽孢杆菌及其在防 治禾谷镰刀菌方面的应用，用于防治赤霉病，穗腐病或根腐病等。
[0007] 云利等(冯云利，2011)在研究烤烟品种NC297内生细菌种群组成时，发现该菌是烟 草内生细菌的优势种群，且对烟草黑腔病菌有抑制作用;Munusamy Madhai yan从水稻根际 土壤中获得具有利用甲醇和促生作用的新型细菌甲基营养型芽孢杆菌（Munusamy 1&1(11^丨7&11，2010);刘伟从烟草土壤中分离一株甲基营养型芽孢杆菌1^-6，采用温室盆栽试 验测定LW-6的抑菌和促生作用，结果显示该菌处理的烟草植株在接种烟草青枯病菌后防 治效果为70.37%;其可定植于烟草根际土壤，具有良好的定植能力；其对烟草有明显促生 作用。菌株LW-6在烟草青枯病防治中具有潜在的利用价值。
[0008] 周登博等在专利号201210247234.7中公开了一种防控香蕉枯萎病的甲基营养型 芽孢杆菌菌株4-L-16,还公开了该菌株在制备具有防控香蕉枯萎病作用的药物中的用途以 及含该菌株的微生物制剂，该制剂不仅对多种香蕉病原菌具有更好的拮抗作用，还对植株 生长具有促进作用。
[0009] 唐满仓等在专利号201410654499.8公开了一种含甲基营养型芽孢杆菌与叶枯唑 的杀细菌组合物及其在防治烟草青枯病，水稻白叶枯病或大白菜的软腐病的应用。在专利 号201210579898.3中公开了一种甲基营养型芽孢杆菌的可湿性粉剂，其可湿性粉剂是采用 特定的方法制得的甲基营养型芽孢杆菌的原粉，轻质碳酸钙，十二烷基苯磺酸钠，磷酸二氢 钾，磷酸氢二钾和分散剂亚甲萘磺酸钠组成，能较好的防治柑溃疡病的用途。在专利号 201210579899.8中公开了一种甲基营养型芽孢杆菌的生物菌剂及其制备方法。在专利号 201410654587.8中公开了一种甲基营养型芽孢杆菌的水分散粒剂及其制备方法和应用。 [0010] 林克明等在专利号201210550128.6中公开了一种甲基营养型芽孢杆菌三炬-04及 在防治辣椒的青枯病，柑橘的炭疽病上的应用。
[0011]姬广海等在专利号201210241442.6中公开了一种甲基营养型芽孢杆菌BWJ及其在 十字花科蔬菜根肿病防治的应用。杨德昌等在专利号201410303095.4中公开了一种甲基营 养型芽孢杆菌可湿性粉剂及其制备方法和对黄瓜灰霉病和苹果腐烂病具有较强的防治效 果。可湿性粉剂芽孢含量不低于30亿/克。
[0012] 阮志勇等在专利号201310628536.3中公开了一种甲基营养型芽孢杆菌及微生物 菌剂和它们的应用。邵海锋在专利号201410148228.5中公开了一种甲基营养型芽孢杆菌及 其制备生物型肥料增效剂的方法。
[0013] 单俊伟等在专利号201410148953.2中公开了一种耐盐性甲基营养型芽孢杆菌菌 株LJ及其在盐碱地改良，烟草细菌性病害、病毒性病害、真菌性病害防治上有较好的效果。
[0014] 植物病害生防甲基营养型芽孢杆菌的研究开发应用目前已取得了不少成就，但其 发展过程中仍存在不少问题。如我们生产的甲基营养型芽孢杆菌主要以芽孢数量的多少来 衡量，从上面我们发现现阶段甲基营养型芽孢杆菌发酵过程中的芽孢含量不高，不到1〇〇亿 cfu/ml;另外，经过我们试验发现有芽孢杆菌产品超过50%的芽孢施入地中由于没有及时萌 发而失去其效果。如王倩利用枯草芽孢杆菌TR21防治巴西蕉枯萎病时，前期试验利用TR21 菌株NB发酵液灌根和叶腋接种都能有效防治枯萎病，但是利用芽孢制备可湿性粉剂的灌根 与叶腋效果却不理想，显示了去掉发酵液后的纯芽孢可能因为萌发困难而使防效下降。
[0015] 芽孢杆菌在自然界中分布广泛，当外部条件适合生长时，芽孢会由休眠状态经过 一系列复杂生理生化反应成长为营养体并恢复新陈代谢作用，这个过程称为萌发 (germination)。自然界中芽孢萌发受外源营养物质的影响，这类营养物质被称之为"萌发 剂"，芽孢和促进萌发的芽孢萌发剂在液体中混合后数秒钟之内，萌发剂快速跨过芽孢衣和 皮层到达芽孢内膜的表面，与位于芽孢内膜上的受体蛋白相互作用，激发芽孢进入萌发状 态，接着启动一连串萌发事件，之后的萌发过程不会因移走萌发剂而停止。
[0016] 在现阶段，还没有公开报道有关甲基营养型芽孢杆菌的芽孢萌发剂的文献，也未 有在甲基营养型芽孢杆菌可湿性粉剂中加入芽孢萌发剂的研究的报道。
[0017] 另