一种短小芽孢杆菌可湿性粉剂的制备方法
【技术领域】
[0001] 本发明设及生物农药与微生物肥料领域，具体设及一种含有短小芽抱萌发剂的短 小芽抱杆菌可湿性粉剂及其制备方法。
【背景技术】
[0002] 我国每年使用大量的化学农药制剂与化肥，极易造成农药残留超标，生物富集，不 仅污染生态环境，还影响人类的健康。而生物农药副作用小，对人无害，是一种具有广阔前 景的绿色农药，日益成为全球农药发展的一种趋势。
[0003] 芽抱杆菌是目前生物农药与生物肥料中研究最多的一种微生物，它具有广谱抗菌 活性和极强的抗逆能力，其营养细胞能在真菌性病原菌丝体表面繁衍定殖，有效抑制病菌 生长，因此，在控制病害发生、促进植株生长，提高作物产量等方面显示出了广阔的应用前 景。
[0004] 短小芽抱杆菌是一种易在±壤中分离得到的微生物，通过研究发现，不仅能促进 小麦、甜菜、黄瓜，水稻，蕃茄等作物的生长，还能防治水稻稻攝病，黄瓜菌核病，苹果腐烂 病，茄子枯萎病，小麦赤霉病，白菜黑斑病和番茄灰霉病等。
[0005] 目前，国内外关于短小芽抱杆菌的研究主要集中在对其生防作用W及产生的木聚 糖酶的研究。肖爱萍等发现短小芽抱杆菌对稻攝病具有很好的防治效果，且其有效作用成 分为多肤类物质（肖爱萍等，2003)。崔云龙等发现短小芽抱杆菌D82对小麦根腐病有强抗生 作用，且发酵液稀释浓度100倍W下的平板抑菌效果为100%(崔云龙等，1995)。此外，徐长伦 等还发现一株短小芽抱杆菌的优化菌株PlO能对甜菜具有增产增糖的作用（徐长伦等， 1994);朱桂梅等分离得到一株短小芽抱杆菌TW-2对水稻稻攝病菌具有强烈的抑制作用，对 水稻稻攝病具有较高的防治效果。短小芽抱杆菌(BaciIlus pumiIus)近年来被陆续确定具 有括抗灰葡萄抱菌、腐霉菌等病原真菌的能力(Mari M，et al，1996;Walker R，et al， 1998)"A化tar M. S.报道(2008)将短小芽抱杆菌作为生物菌肥用于鹰嘴豆根腐病获得了 很好的防治效果。崔云龙等（1995)报道了短小芽抱杆菌D82对小麦根腐病菌有极强的括抗 作用。游春平等(2001)分离的短小芽抱杆菌对稻攝病菌有显著的抑制作用。王静等分离到 一株短小芽抱杆菌AR03,其菌体和发酵液对烟草黑腔病菌具有很强的括抗活性，在田间试 验结果显示具有较好的防治烟草黑腔病的能力。
[0006] 目前，国内已有关生产短小芽抱杆菌类产品的相关技术，如:潘W楼等在专利号： 201 21027 13964中公开了一种短短小芽抱杆菌水分散粒剂的制备方法，在专利号 2007100215091中公开了一种用于防治稻攝病的短短小芽抱杆菌TW菌株的制剂，该制剂对 水稻稻攝病的防治效果在60%-80%间。陆燕君等分离到一株短小芽抱杆菌A3对泡桐黑腐皮 壳的菌丝及分生抱子均有较强的括抗作用，A3的发酵液对泡桐黑腐皮壳病防治效果可达到 97.8%。李联泰等在专利号2013101282710中公开了一种短小芽抱杆菌E4及基培养方法与在 抑制弧菌上的应用。连玲丽等分离得到一株短小芽抱杆菌EN16,其可诱导番茄对细菌性青 枯病的抗性。黄海东等在专利号2012102903742中公开了一株短小芽抱杆菌LD-bl的发酵工 艺及其在防治黄瓜褐斑病，黄瓜灰霉病，黄瓜菌核病，苹果腐烂病，茄子枯萎病，小麦赤霉 病，白菜黑斑病和番茄灰霉病上的应用。曲发斌等考察了短小芽抱杆菌发酵液对番茄种子 萌发及幼苗生长的影响，结果表明：短小芽抱杆菌发酵液对番茄种子萌发，根芽生长及幼苗 的株高和株重具有明显的促进作用，其中W50倍稀释液的效果最为显著，而在幼苗施用方 式上叶面喷施的效果明显优于灌根和浸种。但还未有具体的有关短小芽抱杆菌的可湿性粉 剂的制备方法公开。
[0007] 虽然W芽抱杆菌为主制备的微生物农药产品不少，其剂型有水剂，粉剂，可湿性粉 剂，水分散粒剂，但目前芽抱杆菌的剂型W可湿性粉剂为主，运种剂型虽然便于储存和运 输，但在生产应用中存在很多制约因子。如施用的可湿性粉剂中大部份W芽抱作为衡量产 品中有效成分的惟一标准，若芽抱不能及时萌发，施用效果则不佳，如王倩利用枯草芽抱杆 菌TR21防治己西蕉枯萎病时，前期试验利用TR21菌株NB发酵液灌根和叶蔽接种都能有效防 治枯萎病，但是利用芽抱制备可湿性粉剂的灌根与叶蔽效果却不理想，证明了去掉发酵液 后的纯芽抱可能因为萌发困难而使防效下降。
[0008] 芽抱杆菌在自然界中分布广泛，当外部条件适合生长时，芽胞会由休眠状态经过 一系列复杂生理生化反应成长为营养体并恢复新陈代谢作用，运个过程称为萌发 (germination)。自然界中芽抱萌发受外源营养物质的影响，运类营养物质被称之为"萌发 剂"，通常营养诱导芽抱萌发包括氨基酸、糖类和嚷吟核巧的单一作用，也包括它们的协同 作用（例如:AGFK;A:L-天冬献胺;G:葡萄糖;F:果糖;K:钟离子）。当营养物质接触到芽抱 时，芽抱内部会发生一系列变化，（1 )、芽抱核内部H+和Zn2+释放出来，致使芽抱核内部抑由 弱酸性上升至弱碱性；（2)、芽抱核内部化h--DPA的大量释放；（3)、芽抱核水合，内部化 2+- DPA被水所替代，芽抱的耐热性下降；（4)、芽抱皮层的芽抱肤聚糖层水解，芽抱核膨胀；（5)、 芽抱核进一步水合，芽抱核内部蛋白质流动性增强，酶活性加强，合成ATP; (6)、降解SASP蛋 白，W释放芽抱DNA，进而引导芽抱生长过程中RNA、蛋白质、DNA的合成。
[0009] 芽抱和促进萌发的芽抱萌发剂混合后数秒钟之内，萌发剂快速跨过芽抱衣和皮层 到达芽抱内膜的表面，与位于芽抱内膜上的受体蛋白相互作用，激发芽抱进入萌发状态，接 着启动一连串萌发事件，之后的萌发过程不会因移走萌发剂而停止。
[0010] 在芽胞杆菌属中，枯草芽胞杆菌、苏云金芽胞杆菌、炭痘芽胞杆菌和蜡样芽胞杆菌 因与人类的生产生活息息相关而备受关注。研究表明，枯草芽胞杆菌的基因组包含一系列 与 抗生素及重要工业用酶相关的基因簇，炭痘芽胞杆菌和蜡样芽胞杆菌对人畜均有很强 的致病性，由于前者用于制造生物武器，而后者产生致人呕吐和腹泻的毒素，因此两者时刻 威胁着人类的健康和生命安全，当处于芽胞状态时它们均不具备感染能力，但当进入萌发 状态后开始具有感染人畜的能力，并最终产生致病甚至致人死亡的毒素;而昆虫的病原细 菌苏云金芽胞 杆菌对昆虫具有特异的毒杀作用，在寄主体内的芽胞萌发后能够引起败血症，并且它 们的芽胞能够有效提高杀虫晶体蛋白的毒力，芽胞的萌发在增效作用中可能是必要的。因 此，对芽胞杆菌萌发过程的研究为抑制其致病性，维护人类健康及生命安全具有至关重要 的理论意义与实际应用价值，因此运四种芽抱对其萌发机理与相关的萌发剂研究得比较 多，但有关短小芽抱杆菌的芽抱萌发剂还未见公开。也未有在短小芽抱杆菌可湿性粉剂中 加入芽抱萌发剂的研究的报道。
[0011] 另外，由于不同的芽抱杆菌与湿润剂，分散剂等助剂的相容性，载体对各类芽抱杆 菌吸附性各不相同，将现有的芽抱杆菌可湿性粉剂的配方或制备工艺无法用于制备含芽抱 萌发剂的短小芽抱杆菌可湿性粉剂;可湿性粉剂中有效菌的吸附量，存活率，对有害菌的防 治效果及可湿性粉剂量的稳定性差异较大，其整个可湿性粉剂的制备方法必须全盘考虑各 载体吸附能力，对短小芽抱杆菌的干燥过程中保护作用，湿润剂，分散剂对可湿性粉剂的悬 浮率，湿润时间的影响，并且对芽抱萌发剂进行全面的筛选才能够得到湿润时间短，悬浮率 高，芽抱保存时间久，使用后芽抱能快速萌发的，防效好的短小芽抱杆菌可湿性粉剂。
【发明内容】
[0012] 本发明所要解决的技术问题是:针对上述现有技术的不足，本发明提供一种含有 芽抱萌发剂的短小芽抱杆菌可湿性粉剂及其制备方法，芽抱萌发剂能使短小芽抱杆菌可湿 性粉剂融入水后，短小芽抱能快速萌发，大大提高短小芽抱的萌发率，其制备的短小芽抱杆 菌可湿性粉剂芽抱含量为不低于200亿CFU/克，悬浮率不低于75%，润湿时间不高于85S，细 度粉碎过400目筛，水分含量不高于5%，制备方法稳定，短