一种草珊瑚的组织培养繁殖方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及植物组织培养繁殖技术领域，具体是一种草珊瑚的组织培养繁殖方法。
【背景技术】
[0002]草珊瑚(Sarcandra glabra(Thunb.)Nakai)又名肿节风、九节茶，为金粟兰科草珊瑚，属多年生草本植物，其全株入药，具有清热凉血、活血消斑、祛风通络等功效，用于治疗血热紫斑、紫癜，风湿痹痛，跌打损伤等症。《中华人民共和国药典》2000年版(一部)收载其为法定药材使用。此外，肿节风还是广西重要的传统瑶药品种。广西瑶族民间流传有“五虎”、“九牛”、“十八钻”、“七十二风”等传统瑶药，肿节风就是“七十二风”中重要的风药品种之一，具有清热凉血，散淤消肿，祛风通络方面的功效，在广西壮瑶地区广泛应用。鉴于草珊瑚的良好疗效，市场需求量的不断增加，自然繁殖难以满足市场供求，为了更好地开发和利用中药草珊瑚资源，确保草珊瑚资源的可持续利用，发展家种是唯一途径。据此，通过现代生物技术对其进行组织培养快繁技术进行了研究，试图获得大量优质的种苗，为草珊瑚生产提供种源，以满足生产上的需要。
【发明内容】
[0003]本发明的目的是提供一种草珊瑚的组织培养繁殖方法，针对目前草珊瑚繁育存在的问题，通过组织培养繁殖，能够缩短培养周期并快速繁殖出草珊瑚优质种苗，进行规模化生产种苗，满足市场需求。
[0004]为解决上述技术问题，本发明的技术方案是:一种草珊瑚的组织培养繁殖方法，包括以下步骤:
[0005](1)外植体的取材与消毒:取草珊瑚剪切成2_3cm的带芽茎段，作为外植体进行消毒，首先将2-3滴洗洁精滴入装有50ml自来水的烧杯中，把外植体放入烧杯轻轻搅拌2min，再用棉花清洗外植体表面污垢，自来水轻微流水冲洗8-10min ;移置超净工作台，用75乂八％乙醇浸泡30s，无菌水冲洗一遍，然后再用添加了 1-2滴吐温-20的50ml浓度为
0.1￥八％升汞消毒6-8min、无菌水冲洗3-5次，最后放置在消毒好的不锈钢碟子，剪切成
1.0-1.5cm长的带芽茎段，获得无菌外植体；
[0006](2)无菌试管苗的获取:将消毒好的外植体置于诱导培养基中进行不定芽诱导发芽得到无菌试管苗，所述诱导培养基是以MS为基本培养基，添加5g.L 1琼脂，30g.L 1蔗糖，1.0mg.L 1的6-苄基腺嘌呤，培养基pH值为5.8，培养条件为:温度为22_24°C，光照强度1500-20001ux，光照时间为10-12h/d，培养时间为15_20d ；
[0007](3)试管苗增殖培养:将无菌试管苗置于增殖培养基中进行培养获得大量不定芽，所述增殖培养基是以MS为基本培养基，添加5g.!/琼脂，20g*L 1蔗糖，1.0-2.0mg.L 1的6-苄基腺嘌呤、0.1-0.5mg.L 1的萘乙酸、0.1-0.5mg.L 1的吲哚乙酸，培养基pH值为5.8，培养条件为:温度为22-24°C，光照强度1500-20001UX，光照时间为10_12h/d，培养时间为30d ；
[0008](4)试管苗壮苗培养:将繁殖后的不定芽置于壮苗培养基中进行壮苗培养得到健壮植株，所述壮苗培养基是以MS为基本培养基，添加5g.L 1琼脂，20g.L 1蔗糖，
1.0-2.0mg.L 1的6-苄基腺嘌呤、0.1-0.5mg.L 1的吲哚丁酸、0.1-0.5g.L 1的活性炭，培养基pH值为5.8，培养条件为:温度为22-24°C，光照强度1500-20001ux，光照时间为10_12h/d，培养时间为30d ;
[0009](5)试管苗生根培养:将健壮植株置于生根培养基中培养得到完整的带根苗，所述生根培养基是以1/2MS为基本培养基，添加5g.L 1琼脂，20g.L 1蔗糖，0.2-1.0mg.L 1的吲哚丁酸、0.1-0.5mg.L 1的萘乙酸、0-0.5g.L 1的活性炭，培养基pH值为5.8，培养条件为:温度为22-24°C，光照强度1500-20001UX，光照时间为10_12h/d，培养时间为25d ;
[0010](6)试管苗炼苗移栽:筛选完整的带根苗进行炼苗后移植于基质中培养，再移栽至大田；
[0011 ] 步骤(6)中的炼苗移栽按以下操作进行:经过步骤(5)获得带根的完整植株，待苗长至4-5cm，根长至3-5cm时，选择生长良好、整齐、健壮的瓶苗，在室温为23-25 °C的室内进行炼苗，并在瓶中加水淹没培养基，炼苗5-7d，取出试管苗，洗净根部培养基，移栽到基质中生长40-50d，再移栽至大田。
[0012]所述基质为按泥炭土:蛭石=1: 1的比例混合。
[0013]本发明的突出优点在于:
[0014]<1>通过草珊瑚不定芽的诱导和繁殖，能保持原始品种的性状，能够在短期内繁殖得到大量性状一致的植株，满足生产需要，并为提供优良性状的草珊瑚工厂化育苗提供参考。
[0015]〈2>所用MS和1/2MS培养基包含大量和微量元素，添加的6-苄基腺嘌呤、萘乙酸、吲哚乙酸和吲哚丁酸等化学药剂，成本较低廉、浓度适宜，具体作用如下:在增殖培养基中添加6-BA、NAA和IAA能够促进芽的增殖；在壮苗培养基中添加6-BA和IBA能够促进苗壮和芽的再次增殖；在1/2MS生根培养基中添加IBA和NAA可促进苗生根，经炼苗后移栽至装基质的营养杯。
[0016]<3>培养30d芽繁殖系数达6.5倍，经过扩繁、壮苗和生根培养，组培苗生根率达94.7?100%，移栽基质后成活率在88.3?9 2%，，有效解决了草珊瑚的规模化育苗问题。
【具体实施方式】
[0017]下面结合实施例对本发明的技术方案进一步说明。
[0018]实施例1
[0019]本发明所述的草珊瑚的组织培养繁殖方法的一个实例，包括如下步骤:
[0020](1)外植体的取材与消毒:取草珊瑚剪切成2_3cm的带芽茎段作为外植体进行消毒；首先将2-3滴洗洁精滴入装50ml自来水的烧杯中，把外植体放入烧杯轻轻搅拌2min，再用棉花清洗外植体表面污垢，自来水轻微流水冲洗8-10min ;移置超净工作台，用75v/
醇浸泡30s，无菌水冲洗一遍，然后再用添加了 1-2滴吐温-20的50ml浓度为0.lv/^%升汞消毒6-8min、无菌水冲洗3-5次，最后放置消毒好的不锈钢碟子，剪切成1.0-1.5cm长的带芽茎段，获得无菌外植体。所述无菌水为经高温高压灭菌后的蒸馏水。
[0021](2)无菌试管苗的获取:将消毒好的外植体置于诱导培养基中进行不定芽诱导发芽，在温度为23-25°C，光照强度1500-20001UX，光照时间为10_12h/d的条件下培养15-20d，得到无菌试管苗；
[0022](3)试管苗增殖培养:将无菌试管苗置于增殖培养基中进行培养，在温度为23-25°C，光照强度1500-20001ux，光照时间为10_12h/d的条件下培养30d，获得大量不定芽，不定芽增殖系数为6.3 ；
[0023](4)试管苗壮苗培养:将繁殖后的不定芽置于壮苗培养基中进行壮苗培养，在温度为23-25°C，光照强度1500-20001ux，光照时间为10_12h/d的条件下培养30d，得到健壮植株，不定芽二次增殖系数为4.4 ；
[0024](5)试管苗生根培养:将健壮植株置于MS生根培养基中培养25d，在温度为23-25°C，光照强度1500-20001ux，光照时间为10_12h/d的条件下培养25d，得到完整的带根苗，生根率为94.7% ；
[0025](6)试管苗炼苗移栽:经过步骤(5)获得带根的完整植株，待苗长至4-5cm，根长至3-5cm时，选择生长良好、整齐、健壮的瓶苗，在室温为23-25°C的室内进行炼苗，并在瓶中加入少量自来水淹没培养基，炼苗5-7d，用镊子取出试管苗，洗净根部培养基，移栽到基质中生长40-50d，再移栽至大田，成活率为92%。所述基质为按泥炭土:蛭石=1: 1的比例混合，并且基质疏松透气、排水良好。
[0026]其中，各阶段使用的培养基配方如下:
[0027]所述诱导培养基是以MS为基本培养基，添加5g.!/琼脂，30g*L 1鹿糖，1.0mg *L 1的6-苄基腺嘌呤，培养基pH值为5.8 ;