一种白花蛇舌草组培苗的快速繁殖方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及一种植物繁殖方法，特别是一种白花蛇舌草组培苗的快速繁殖方法。
【背景技术】
[0002]白花蛇舌草(Oldenlandia diffusa (Wild.) Roxb.)，始载于《广西中药志》，系茜草科(Rubiaceae)耳草属植物。其叶形似蛇舌，开白花，故别名蛇舌草、蛇利草、蛇总管、龙舌草等。其性甘寒、微苦，以全草供药用，具有清热解毒、利尿消肿、活血止痛的功能。临床应用广泛，主治恶性肿瘤、胃肠炎、阑尾炎、扁桃体炎、肺炎、泌尿系统感染等病症。生产于广东、广西、云南、福建、江苏、浙江等省区。目前商品白花蛇舌草以野生为主。由于广泛用于治疗癌症和肝炎等疾病，市场需求量剧增，中国药典2000年版己将白花蛇舌草作为中成药的原料药进行收载。野生资源经大量采集逐渐减少，供不应求，必须人工栽培，以满足市场供应。
【发明内容】
[0003]本发明的目的是提供一种白花蛇舌草组培苗的快速繁殖方法，它能够提高白花蛇舌草种苗的繁殖速度和质量，实现白花蛇舌草优质种苗的工厂化育苗，以满足生产上的需要。
[0004]本发明通过以下技术方案达到上述目的:一种白花蛇舌草组培苗的快速繁殖方法，包括以下步骤:
[0005](1)外植体的选择与消毒:取白花蛇舌草的成熟未开裂果实作为外植体，依次用2v/v%洗洁精水溶液浸泡5min、线状自来水冲洗15_30min、添加了 2_3滴吐温-20的100毫升0.1￥八％升汞消毒8-10min、无菌水冲洗3_5次，最后用消毒滤纸除去表面水分，得到外植体，其中无菌水为经高温高压灭菌的蒸馏水；
[0006](2)种子萌发获得无菌试管苗:将步骤(1)得到的外植体在超净工作台上剥开，将种子接种到MS培养基中，在培养温度为23-27°C，光照强度15001UX，光照时间为8_10小时/天的条件下培养30天，种子发芽后获得无菌试管苗，其中MS培养基中添加0.3mg/L的苄基腺嘌呤6-BA、30g/L蔗糖和3.4g/L的琼脂，培养基的pH值为5.8 ;
[0007](3)试管苗丛生芽快速繁殖培养:将步骤(2)中得到的无菌试管苗置于MS繁殖培养基中，在培养温度为23-27°C，光照强度15001UX，光照时间为8_10小时/天的条件下培养30天得到丛生芽，其中MS繁殖培养基中添加0.5-3.0mg/L的苄基腺嘌呤6-BA、
0.1-ο.5mg/L的吲哚乙酸IAA、0.1-0.5mg/L的激动素KT、30g/L蔗糖和3.4g/L的琼脂，培养基的pH值为5.8 ;
[0008](4)丛生芽生根培养:将步骤(3)中得到的丛生芽切成带顶芽或叶芽的茎段，置于1/2MS生根培养基中，在培养温度为23-27°C，光照强度15001ux，光照时间为12-14小时/天的条件下培养30天得到带根的完整植株，其中1/2MS生根培养基中添加0.1-1.0mg/L的吲哚乙酸IAA、0.1-1.0mg/L的生根粉ABT、30g/L蔗糖和3.4g/L的琼脂，培养基的pH值为5.8 ；
[0009](5)炼苗与移栽:将步骤(4)获得带根的完整植株在室温下炼苗2-4天，待表面角质形成后将苗取出，洗净根部培养基，移栽到苗床中，在苗床中生长一个月后移栽大田。移栽时的温度条件为20-28°C，相对湿度75-80%，遮阳率为80%。
[0010]移栽后一个星期内，每天早8点到晚6点喷雾3-5次，每次lOmin，此后每天早8点、晚6点各喷雾1次，每次lOmin。
[0011]本发明的突出优点在于:
[0012](1)采用组织培养技术繁育白花蛇舌草种苗具有繁殖速度快、种苗质量均一，且不受时间、空间、季节限制，缩短了种苗繁育周期，提高了种苗质量，实现规模化生产，满足生产上的需要。
[0013](2)采用本发明所述的培养方法得到的白花蛇舌草丛生芽增殖系数达到25-30倍，丛生芽健壮，接种到生根培养基后容易生根，生根率可达98.0%以上，炼苗后移栽苗床成活率达到95%。
【具体实施方式】
[0014]下面结合实施例对本发明的技术方案进一步说明。
[0015]实施例1
[0016]本发明所述的白花蛇舌草的组织培养快速繁殖方法的一个实例，包括以下步骤:
[0017](1)外植体的选择与消毒:取白花蛇舌草的成熟未开裂果实作为外植体，依次用2v/v%洗洁精水溶液浸泡5min、线状自来水冲洗15_30min、添加了 2_3滴吐温-20的100毫升0.1￥八％升汞消毒8-10min、无菌水冲洗3_5次，最后用消毒滤纸除去表面水分，得到外植体，其中无菌水为经高温高压灭菌的蒸馏水。
[0018](2)种子萌发获得无菌试管苗:将步骤(1)得到的外植体在超净工作台上剥开，将种子接种到MS培养基中，在培养温度为23-27°C，光照强度15001UX，光照时间为8_10小时/天的条件下培养30天，种子发芽后获得无菌试管苗，其中MS培养基中添加0.3mg/L的苄基腺嘌呤6-BA、30g/L蔗糖和3.4g/L的琼脂，培养基的pH值为5.8。
[0019](3)试管苗丛生芽快速繁殖培养:将步骤(2)中得到的无菌试管苗置于MS繁殖培养基中，在培养温度为23-27°C，光照强度15001ux，光照时间为8_10小时/天的条件下培养30天得到丛生芽，其中MS繁殖培养基中添加0.5mg/L的苄基腺嘌呤6_BA、0.lmg/L的吲哚乙酸IAA、0.lmg/L的激动素KT、30g/L蔗糖和3.4g/L的琼脂，培养基的pH值为5.8，丛生芽增殖系数为23.2。
[0020](4)丛生芽生根培养:将步骤(3)中得到的丛生芽切成带顶芽或叶芽的茎段，置于1/2MS生根培养基中，在培养温度为23-27°C，光照强度15001ux，光照时间为12-14小时/天的条件下培养30天得到带根的完整植株，其中1/2MS生根培养基中添加0.lmg/L的吲哚乙酸IAA、0.5mg/L的生根粉ABT、30g/L蔗糖和3.4g/L的琼脂，培养基的pH值为5.8，生根率为94.0%。
[0021](5)炼苗与移栽:步骤(4)获得带根的完整植株后，在室温为25°C的室内打开瓶盖，炼苗2-4天，表面角质形成后将苗取出，洗净根部培养基，移栽到苗床中，在苗床中生长一个月后移栽大田，移栽成活率为95.5%。
[0022]实施例2
[0023]本发明所述的白花蛇舌草的组织培养快速繁殖方法的另一个实例，包括以下步骤:
[0024](1)外植体的选择与消毒:取白花蛇舌草的成熟未开裂果实作为外植体，依次用2v/v%洗洁精水溶液浸泡5min、线状自来水冲洗15_30min、添加了 2_3滴吐温-20的100毫升0.1￥八％升汞消毒8-10min、无菌水冲洗3_5次，最后用消毒滤纸除去表面水分，得到外植体，其中无菌水为经高温高压灭菌的蒸馏水。
[0025](2)种子萌发获得无菌试管苗:将步骤(1)得到的外植体在超净工作台上剥开，将种子接种到MS培养基中，在培养温度为23-27°C，光照强度15001UX，光照时间为8_10小时/天的条件下培养30天，种子发芽后获得无菌试管苗，其中MS培养基中添加0.3mg/L的苄基腺嘌呤6-BA、30g/L蔗糖和3.4g/L的琼脂，培养基的pH值为5.8。
[0026](3)试管苗丛生芽快速繁殖培养:将步骤(2)中得到的无菌试管苗置于MS繁殖培养基中，在培养温度23-27°C，光照强度15001ux，光照时间为8_10小时/天的条件下培养30天得到丛生芽，其中MS繁殖培养基中添加1.5mg/L的苄基腺嘌呤6_BA、0.3mg/L的吲哚乙酸IAA、0.5mg/L的激动素KT、30g/L蔗糖和3.4g/L的琼脂，培养基的pH值为5.8，丛生芽增殖系数为25.8。
[0027](4)丛生芽生根培养:将步骤(3)中得到的丛生芽切成带顶芽或叶芽的茎段，置于1/2MS生根培养基中，在培养温度为23-27°C，光照强度15001ux，光照时间为12-14小时/天的条件下培养30天得到带根的完整植株，其中1/2MS生根培养基