一种提高牛樟芝产量及其生物活性物质含量的方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及牛樟芝的培养方法，具体涉及一种提高牛樟芝产量及其生物活性物质 含量的方法。
【背景技术】
[0002] 牛樟树是台湾特有植物，受到极度的重视，并列为保育类植物，而牛樟芝菌又只长 于牛樟树，其他树木无法长出牛樟芝，牛樟芝对抑制癌症、预防癌症的转移、B型肝炎、糖尿 病、高血压等疾病具有功效，并在抗氧化、抗血液中凝血、及肠胃疾病上也有相当的功效，牛 樟芝的成份复杂，其中重要成份包括有：三萜类化合物、超氧歧化酵素、腺甘、β-D-葡聚糖 等营养成份；其中三萜类化合物是牛樟芝最重要的化学成份之一，也是牛樟芝的萃取物中 苦味成份的来源。以目前的研宄结果得知，在每种灵芝内的三萜类含量约1-3%，而单牛樟 芝一种就拥有15-45%的三萜类含量，三萜类的主要功能有抑制癌细胞的生长、抑制组织胺 的释放，防止过敏、促进肝功能、促进血小板凝集、以及降血脂等作用，因此三萜类的含量及 种类愈多，则愈有医疗价值。
[0003] 现有牛樟芝人工栽培方法包括椴木栽培法、固态栽培法以及液态发酵法。椴木栽 培法是使用枯死的牛樟树椴木，将牛樟芝菌体植入椴木中，使牛樟芝在椴木中生长，借此取 得牛樟芝子实体。利用该种方法所得到的牛樟芝子实体，其所含有的成分与野生牛樟芝相 似，然而，该种培养方式的成本高、培养时间长，不利于量产与推广。特别是牛樟树椴木取得 不易，使得牛樟芝相关产品的价格高居不下。固态培养法主要是利用含有营养物质的太空 包来培养牛樟芝所得到的牛樟芝其外观虽然与野生牛樟芝相似，但其三帖类化合物的含量 低，并且其他主要成分与野生牛樟芝子实体并不相同。液态发酵法培养牛樟芝虽然可在短 时间内收成牛樟芝液体发酵产品，但其主要产物为多醣类，并不含有三帖类化合物，并且其 他主要成分与野生牛樟芝子实体相去甚远。
【发明内容】
[0004] 本发明的目的在于克服现有技术的不足，提供一种加速牛樟芝生长速度，并且其 主要成分如三帖类化合物、多醣体、腺苷等与野生牛樟芝相似的提高牛樟芝产量及其生物 活性物质含量的方法。
[0005] 为实现上述目的，本发明采用如下技术方案： 一种提高牛樟芝产量及其生物活性物质含量的方法，包括以下步骤： 1)制备五叶松提取液： 将五叶松的根、茎、叶粉碎至粒径35~60 μπι，混合均匀后溶解于浓度20%的酒精 中进行超声波破碎处理，破坏其细胞壁，使得五叶松脂溶出，所述超声波破碎条件为温度 25-30°C，时间20-25min ;超声破碎后再经过超临界流体萃取，提取五叶松脂，所述超临界 流体萃取具体为：以液态二氧化碳为溶剂，在压力4000-5000psi下萃取30-35min，得到不 同pH的五叶松提取液； 其中，根：茎：叶的比例为93-95 :4-6 :1时，得到pH = 5. 5的五叶松提取液； 根遂：叶的比例为45-50 :35-40 :15时，得到pH = 6. O的五叶松提取液； 根：茎：叶的比例为38-40 :30-32 :30时，得到pH = 6. 5的五叶松提取液； 2) 牛樟芝菌繁殖及活化 切取外围完整厚实的牛樟芝菌丝做为菌种，接入液体培养基中，于25-30?下培养 13-15天，形成牛樟芝菌丝球，完成菌丝活化；所述培养过程，控制二氧化碳浓度为1~5%， 氧气浓度为5~15% ; 3) 初发酵 将步骤2)形成的牛樟芝菌丝球移至pH = 5. 5的谷类培养基进行初发酵，并接上pH值 自动感应器，当牛樟芝生长环境pH值低于5时，自动添加 pH = 6. 0的五叶松提取液，待牛樟 芝子实体直径大于IOcm时，自动添加 pH = 6. 5的五叶松提取液；同时，所述初发酵过程，采 用震荡发酵，震荡速度为150_200r/min，温度28-30°C，同时控制二氧化碳浓度为1~5%， 氧气浓度为5~15 %，发酵3-5天； 其中，所述谷类培养基的制备方法如下：将谷类高温灭菌后与马铃薯葡萄糖琼脂培养 基混合均匀，放置冷却成型，即为谷类培养基； 4) 后发酵 初发酵3-5天后，将牛樟芝菌移植到新的谷类培养基进行后发酵，所述后发酵过程，当 牛樟芝生长环境PH值低于5时，自动添加 pH = 5. 5的五叶松提取液，同时，控制二氧化碳 浓度为1~5%，氧气浓度为5~15%，发酵40-45天以上。
[0006] 所述五叶松的根、茎、叶在温度5~10°C，真空条件下进行粉碎。
[0007] 所述步骤2)形成的牛樟芝菌丝球直径为0. 5-1. 0cm。
[0008] 所述步骤2)中的液体培养基是指含蛋白胨及葡萄糖含量分別为5-7%和10-12% 的营养液。
[0009] 所述谷类是指玉米、小麦、薏仁、糙米、黑芝麻、荞麦、绿豆、黄豆中的一种或两种以 上的组合。
[0010] 本发明采用以上技术方案，将五叶松的根、茎、叶以不同的比例混合，提取五叶松 月旨，得到不同PH的五叶松提取液，由于牛樟芝菌生长所需最适pH值为5-7之间，而生长过 程会产酸导致PH值降低至5以下，减缓生长速度及生物活性物质的形成，本发明借助不同 PH的五叶松提取液来控制牛樟芝生长过程的pH环境，同时牛樟芝菌还可以充分吸收利用 五叶松提取液，加速合成三萜类及腺苷等生物活性成分。
[0011] 本发明还具有以下优点： 1、本发明通过五叶松提取液结合谷类培养基，使得牛樟芝菌富含各种营养素，能够快 速生长，取代传统牛樟椴木栽培，可以大幅度提升产量。
[0012] 2、本发明严格控制牛樟芝菌特殊生长条件pH值（5-7)及环境中二氧化碳和氧气 浓度，可以加速牛樟芝菌生长速度。
[0013] 3、本发明克服了传统台湾牛樟芝椴木培养方法，生物活性成分偏低，生长速度慢 的缺陷，达到促使牛樟芝快速生长，同时提高活性成分（三萜类化合物、多醣体、腺苷）含量 的目的，本发明培养的牛樟芝，总三萜类含量大于8000ppm，多醣体含量大于16000ppm，腺 苷含量大于2000ppm。
【具体实施方式】
[0014] 本发明的一种提高牛樟芝产量及其生物活性物质含量的方法，包括以下步骤： 1) 制备五叶松提取液： 将五叶松的根、茎、叶在低温5~10°C，真空条件下粉碎至粒径35~60 μ m，混合均匀 后溶解于20%酒精中进行超声波破碎处理，破坏其细胞壁，使得五叶松脂溶出，所述超声 波破碎条件为温度25-30°C，时间20-25min ;超声破碎后再经过超临界流体萃取，提取五叶 松脂，所述超临界流体萃取具体为：以液态二氧化碳为溶剂，在压力4000-5000psi下萃取 30-35min，得到不同pH的五叶松提取液； 其中，根：茎：叶的比例为93-95 :4-6 :1时，得到pH = 5. 5的五叶松提取液； 根遂：叶的比例为45-50 :35-40 :15时，得到pH = 6. 0的五叶松提取液； 根：茎：叶的比例为38-40 :30-32 :30时，得到pH = 6. 5的五叶松提取液； 2) 牛樟芝菌繁殖及活化 切取外围完整厚实的牛樟芝菌丝做为菌种，其大小约为5mm X 5mm，将上述菌种接入液 体培养基中，于25-30°C下培养13-15天，形成直径0. 5-1. Ocm的牛樟芝菌丝球，完成菌丝活 化；所述液体培养基是指含蛋白胨及葡萄糖含量分別为5-7%和10-12%的营养液； 所述培养过程，控制二氧化碳浓度为1~5%，氧气浓度为5~15% ; 3) 初发酵 将步骤1)形成的牛樟芝菌丝球移至pH = 5. 5的谷类培养基进行初发酵，并接上pH值 自动感应器