一种花生慢生型根瘤菌剂,其制备方法和用图
【技术领域】
[0001] 本发明涉及一种高效固氮花生根瘤菌剂其制备方法和用途，上述根瘤菌剂 中的活性成分是慢生型大豆根瘤菌（Bradyrhizobium japonicum)、圆明慢生根瘤菌 (Bradyrhizobium yuanmingense)或其组合物，该菌剂是一种用于花生的慢生根瘤菌剂。本 发明进一步地涉及使用慢生型大豆根瘤菌（Bradyrhizobium japonicum)、圆明慢生根瘤菌 (Bradyrhizobium yuanmingense)或其组合物提高花生产量的用途。
【背景技术】
[0002] 众所周知，豆科植物，在一定条件下，可直接将空气中的氮固定并转化为有机化合 物。这种固定能力是由大豆根瘤菌或慢生型大豆根瘤菌细菌所产生，这些菌能与植物根茎 形成根瘤。所以通过运用含有大量慢生根瘤菌菌属细菌的接种合剂对植物接种，就可获得 更大的固氮能力。利用根瘤菌与豆科植物共生固氮提高土壤肥力和农作物产量是农业生产 中重要的经验。
[0003] 花生是一年生豆科植物，具有丰富的营养价值，富含维生素、蛋白质和脂肪，是世 界上种植面积最大的油料作物，在我国各地均有种植。一般的大豆根瘤菌或大豆慢生型根 瘤菌，能够增加大豆上根瘤菌的形成，提高大豆的产量。但是对花生的产量的提高并没有很 好的效果。
[0004] 本发明人意外地发现，将慢生型大豆慢生根瘤菌（Bradyrhizobium japonicum)、 圆明慢生根瘤菌（Bradyrhizobium yuanmingense)菌株或其组合物使用到花生上，能够大 大地提高花生的产量，由此完成了本发明。
【发明内容】
[0005] 本发明的目的是提供一种用于花生的慢生型根瘤菌剂，该慢生型根瘤菌剂的 制备方法和用途。上述根瘤菌剂中的活性成分是慢生型大豆根瘤菌（Bradyrhizobium japonicum)、圆明慢生根瘤菌（Bradyrhizobium yuanmingense)或其组合物，该菌 剂是一种用于花生的慢生根瘤菌剂。本发明进一步的目的是使用慢生型大豆根瘤菌 (Bradyrhizobium japonicum)、圆明慢生根瘤菌（Bradyrhizobium yuanmingense)或其组 合物提高花生产量的用途。
[0006] 本发明的慢生型根瘤菌剂，包含有效活菌数> =4. 0亿/ml的慢生型大豆根瘤 菌（Bradyrhizobium japonicum)、圆明慢生根瘤菌（Bradyrhizobium yuanmingense)或 其组合物。慢生型大豆根瘤菌与圆明慢生根瘤菌的组合物中，上述两种根瘤菌在有效活 菌数彡5.0亿/mL时可以任意体积比例混合。优选的配合体积比为1000:1~1:1000,更 优选配合体积比100:1~1:100,最优选的配合体积比为1:1。在本发明的根瘤菌剂中， 可以使用各种慢生型大豆根瘤菌或圆明慢生根瘤菌的菌株，优选使用慢生型大豆根瘤菌 R412(Bradyrhizobium japonicum R412)，该菌株于2015年1月13日保藏于中国武汉武汉 大学中国典型培养物保藏中心（CCTCC)，保藏编号CCTCC NO :M 2015034菌株，或圆明慢生 根瘤菌R202(Bradyrhizobium yuanmingenseR202)，该菌株于2015年1月13日保藏于中国 武汉武汉大学中国典型培养物保藏中心（CCTCC)，保藏编号CCTCC NO :M 2015035菌株。本 发明的慢生型根瘤菌剂，优选包含有效活菌数> =5. 0亿/ml的慢生型根瘤菌。
[0007] 本发明的花生根瘤菌剂为一种水剂剂型，其包含有效活菌数> =4. 0亿/ml的 慢生型大豆根瘤菌（Bradyrhizobium japonicum)、圆明慢生根瘤菌（Bradyrhizobium yuanmingense)或其组合物，以及缓冲盐类和余量的水。本发明的花生根瘤菌剂，优选包含 有效活菌数> =5. 0亿/ml的慢生型根瘤菌，以及缓冲盐类和余量的水。
[0008] 本发明的根瘤菌剂，其中包含有效活菌数> =4. 0亿/ml的慢生型大豆根瘤菌 (Bradyrhizobium japonicum)、圆明慢生根瘤菌（Bradyrhizobium yuanmingense)或其组 合物，磷酸氢二钾〇. 1 - 1重量％，硫酸镁〇. 05 - 0. 5重量％，氯化钠0. 05 - 0. 5重量％， 氯化铁0. 05 - 0. 3重量％，以及余量的水。上述本发明的花生根瘤菌剂，优选包含有效活 菌数> =5. 0亿/ml的慢生型根瘤菌。
[0009] 本发明还涉及上述慢生型根瘤菌剂的制备方法，其包含发酵培养慢生型根瘤菌， 将发酵好的菌液与上述其他组分的缓冲液体混合，并在无菌的条件下分装密封。
[0010] 本发明优选的慢生型根瘤菌剂的制备方法，包含以下步骤：
[0011] 1、培养基培养，使用接种环将慢生型根瘤菌斜面菌种接种于液体培养基中；然后 在温度25 - 30°C，转数180- 200转/分钟的恒温摇床中培养7 - 9天。
[0012] 2、种子罐培养，按8 - 12%的接种量，将菌种接种到种子罐，温度25_30°C，通气量 0· 2 - 0· 8k/s，搅拌速度150 - 200转/分钟，培养5 - 7天。
[0013] 3、发酵罐培养，按接种量10 - 20%，将种子罐中培养好的菌种接种到发酵罐中； 温度28°C - 30°C，通气量0. 2 - 0. 8k/s，搅拌速度150 - 200转/分钟，培养5 - 7天。 [0014] 4、配制菌剂，将发酵好的菌液，与灭菌后的菌剂中包含的上述缓冲盐水溶液混合， 配制成有效活菌数> =4. 0亿/ml，优选有效活菌数> =5. 0亿/ml的菌液，并分装。
[0015] 根据本发明的一种优选的实施方式，所述培养基培养的液体培养基的制备方法 是：将8 - 20份甘露醇，0. 1 - 1. 0份的磷酸氢二钾，0. 05 - 0. 5份的硫酸镁，0. 05 - 0. 5 份的氯化钠，0. 5 - 8份的酵母膏，0. 05 - 0. 3份的氯化铁，调整pH值为6. 5 - 7. 2,在温度 121 °C，压力0· IMPa条件下灭菌30分钟。
[0016] 种子罐培养和发酵罐培养的成分为：葡萄糖1~3重量％，氯化钠0. 005~0. 01 重量％，硫酸镁0. 01~0. 03重量％，磷酸氢二钾0. 05~0. 1重量％，酵母粉0. 05~0. 5 重量％，氯化钙0.005~0.01重量％，余量的水。
[0017] 采用常规的检验方法检测活菌的数量，一般采用显微镜检测的方法进行初步的检 测，在进行平板计数法检测有效活菌数。
[0018] 本发明还涉及一种慢生型根瘤菌剂的使用方法：将本发明的根瘤菌剂与花生种子 一起拌种，然后阴干，在12小时内播种。应对每公斤的花生至少使用有效活菌数多5. 0亿 /mL的根瘤菌菌液25mL。
[0019] 本发明还涉及一种慢生型大豆根瘤菌（Bradyrhizobium japonicum)、圆明慢生根 瘤菌（Bradyrhizobium yuanmingense)或其组合物的用途，其特征在于将有效活菌数> = 5. 0亿/ml的慢生型根瘤菌应用到花生上。本发明进一步地涉及，将上述根瘤菌与花生种子 一起拌种，然后阴干，在12小时内播种，对每公斤的花生使用有效活菌多5. 0亿/mL的根瘤 菌菌液20- 30mL。优选对每公斤的花生使用有效活菌多5. O亿/mL的根瘤菌菌液25mL。
[0020] 本发明根瘤菌剂能够提高慢生根瘤菌在花生上的成活率，高数量的慢生根瘤菌的 存活，提高了花生的固氮的能力，从而达到了提高花生