日本刀角瓢虫的活体冷藏方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及生物技术领域，尤其涉及一种日本刀角瓢虫的活体冷藏方法。
【背景技术】
[0002]我国每年因农业病虫害导致的作物产量损失占总损失的10?15%，实现农业病虫害科学治理，对于保障国家粮食安全战略实施、促进农业丰产具有重要的经济、社会效益。粉虱类害虫严重危害各种作物，包括桑树、茶树、柑橘、花丼、棉花、蔬菜等，其中危害蔬菜的烟粉虱，由于具有很强的抗药性，没有特效药对其进行控制，在大棚温室内常常长期严重危害蔬菜，被称为“超级害虫”。
[0003]利用天敌昆虫防治粉虱，通过自然界中的生物控制作用，能持续控制粉虱危害，将粉虱密度维持在经济水平之下，可以从根本上解决“超级害虫”。
[0004]日本刀角瓢虫被证实是烟粉虱、黑刺粉虱、柑橘粉虱等粉虱类害虫的优势捕食性天敌。日本刀角瓢虫分布在中国的湖南、广东、福建等省，国外仅日本被报道。21天即可完成一代，一头雌成虫平均可产卵500多粒，日本刀角瓢虫雌成虫及1、2、3、4龄幼虫对烟粉虱卵的平均捕食量分别为723.7,61.0,123.5,558.5,814.1粒，日本刀角瓢虫雌成虫对烟粉虱1、2、3、4龄若虫及“蛹”的日平均捕食量分别为508.7,344.7、134.4,70.6,41.2头。由于日本刀角瓢虫繁殖速度快、繁殖能力强、捕食能力强，易于人工繁殖和田间定殖，日本刀角瓢虫成为利用价值非常高的天敌昆虫。
[0005]包括日本刀角瓢虫在内的天敌昆虫的生产，均需要活体存储，以较低成本，延长天敌商品的货架期。没有活体存储技术，往往造成天敌昆虫在害虫发生前就已死亡，或害虫发生时天敌昆虫产品还没有生产出来，这恰恰是目前生物防治领域中严重制约天敌昆虫产业化生产和大面积应用的瓶颈因素。
[0006]日本刀角瓢虫曾经在多个地方被应用于防治粉虱，取得了显著的生态效益和经济效益。研宄日本刀角瓢虫的活体存储技术，不仅能在生产实践中促进日本刀角瓢虫的大规模扩繁，延长其产品货架期及在田间的防控作用时间，也有助于掌握天敌昆虫的发育特点与发生动态，提高害虫防治效率，还有助于加深对天敌昆虫发育机制的认识，探索昆虫对环境的适应机制及进化途径。但在实际生产应用中，由于日本刀角瓢虫不能储存，成为制约日本刀角瓢虫规模化生产应用的技术瓶颈。
[0007]目前，对昆虫进行活体冷藏的方法很少，现有公开的七星瓢虫滞育维持条件是18°C，该条件普通家用设备不容易实现，而且该温度瓢虫虽然不产卵，但是还可以取食，需要消耗食料。而这种活体冷藏方法并不适用于日本刀角瓢虫，因为对于日本刀角瓢虫来说冬季提供活体烟粉虱作为食料是较困难的事情。同时，不同瓢虫种类的滞育诱导因子存在差异，比如异色瓢虫滞育的诱导因子主要是温度，异色瓢虫在低温下，即使是长光照周期(白天时长超过12h)，也会滞育。尚未发现适合于日本刀角瓢虫的活体冷藏方法。
【发明内容】
[0008]本发明要解决的技术问题是克服现有技术的不足，提供了一种日本刀角瓢虫活体冷藏方法，通过调节温度和光周期实现对日本刀角瓢虫的滞育调控，使日本刀角瓢虫可无需补充猎物长期储存于普通冷柜中，解决了活体日本刀角瓢虫不能储存的问题。该方法储存条件简单，保存时间可以在30?120天，可以用较低的成本维持日本刀角瓢虫种群，方便随时扩繁日本刀角瓢虫。
[0009]为解决上述技术问题，提供了一种日本刀角瓢虫活体冷藏方法，包括以下步骤:
(1)滞育诱导:将日本刀角瓢虫置于光照和黑暗交替的环境中放置240小时，使日本刀角瓢虫进入滞育；
(2)冷昏迷保存:将步骤(I)中进入滞育的日本刀角瓢虫低温避光保存；
(3)活力恢复:将步骤(2)中处于低温避光保存状态的日本刀角瓢虫取出，并在室温、光照条件下放置20分钟，使日本刀角瓢虫开始活动并恢复取食；
(4)滞育解除:将步骤(3)中日本刀角瓢虫，在26°C，光周期为L: D=13h: Ilh的环境(即光照13小时，黑暗环境11小时)下持续8天以上(优选为8天)，日本刀角瓢虫雌成虫恢复产卵能力。
[0010]上述的活体冷藏方法，优选的，所述步骤(I)中所述日本刀角瓢虫为6小时内将要羽化的日本刀角瓢虫的蛹或羽化不超过12小时的日本刀角瓢虫的成虫。
[0011 ] 上述的活体冷藏方法，优选的，所述步骤(I)中所述光照和黑暗交替的环境为在光照环境下持续光照10?12小时，然后转为黑暗环境持续12?14小时。
[0012]上述的活体冷藏方法，优选的，所述步骤(I)中光照环境的温度15?21 °C，湿度为60%?80%，所述黑暗环境的温度为10?15°C，湿度为60%?80%。
[0013]上述的活体冷藏方法，优选的，所述步骤(2)中所述低温避光保存的温度为4?60C。优选的避光保存温度为5°C。
[0014]上述的活体冷藏方法，优选的，所述步骤(2)中所述低温避光保存的时间为30?120 天。
[0015]上述的活体冷藏方法，优选的，所述步骤(3)中所述取食的饲料为活体烟粉虱。
[0016]上述的活体冷藏方法，优选的，所述步骤(3)中所述所述室温的温度为22°C?28。。。
[0017]上述的活体冷藏方法，优选的，所述步骤(I)中所述用于滞育诱导的日本刀角瓢虫来自玮度为北玮27°?29°的地区。
[0018]上述的活体冷藏方法，优选的，所述用于滞育诱导的日本刀角瓢虫来自长沙。
[0019]本发明的创新点在于:
昆虫可通过感知温度、食料、光周期的变化预知到冬季即将来临，提前调整生理发育的方向，比如，生殖发育停滞，在体内积累抗冻物质(比如甘油和抗冻蛋白)等，以适应冬季低温缺少食物的恶劣环境。本发明利用昆虫滞育后耐低温原理，首次发现了影响日本刀角瓢虫滞育的环境因子主要是光周期和温度，其中主要以光周期为主，温度为辅。并指明滞育后的日本刀角瓢虫无需食料可长期存储的温度及存储期限，活力恢复的条件及产卵能力恢复的条件。
[0020]而且经过发明人试验证明，日本刀角瓢虫低温长光照周期不能成功诱导日本刀角瓢虫滞育。造成这些差异的原因是生物物种为适应本地气候长期进化的结果。如，长沙(北玮28.12° )的日本刀角瓢虫种群利用光周期作为滞育诱导的主要因子，是因为长沙气温变化较为突然，对季节的指示不如光周期的变化准确。即使滞育诱导主要因子同是光周期的昆虫物种，处于不同玮度的种群，其滞育诱导所需的光周期临界值也不一样。
[0021]与现有技术相比，本发明的优点在于:
(I)应用价值:滞育后的日本刀角瓢虫，方便储存，储存条件只需要一般的冰柜，设置成保鲜条件即可，保存时间可以在30?120天，可以用较低的成本维持日本刀角瓢虫种群，方便随时扩繁日本刀角瓢虫。
[0022](2)科学价值:有助于掌握天敌昆虫的发育特点与发生动态，提高害虫防治效率，还有助于加深对天敌昆虫发育机制的认识，探索昆虫对环境的适应机制及进化途径。
【具体实施方式】
[0023]以下结合具体优选的实施例对本发明作进一步描述，但并不因此而限制本发明的保护范围。
实施例
[0024]以下实施例中所采用的材料和仪器均为市售。
[0025]实施例1:
(I)虫源获得:从湖南省农业科学院茄子地采集日本刀角瓢虫幼虫，放入室内进行饲养，饲养容器为一次性透明塑料口杯，用橡皮筋绑医用纱布封口，每一个饲养容器中放置一条日本刀角瓢虫的幼虫，饲料为带有烟粉虱活体卵、若虫或伪蛹的茄子叶，两天