本发明涉及植物组织培养领域，具体是一种辽阜品种大果沙棘茎尖组织培养基配方。
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：：沙棘(拉丁学名：hippophaerhamnoidesl.)胡颓子科(elaeagnaceae)沙棘属(hippophael.)植物,属落叶灌木或小乔木，根系发达，枝叶茂密，适应能力极强,抗严寒,抗风沙耐干旱,是土壤贫瘠和沙漠化地区水土保持的先锋树种。沙棘主要生长在干旱、半干旱地区，抗逆能力强，有广泛的适应性，我国的西北、华北、东北、西南各省均有分布，是一种集社会效益、生态效益、经济效益于一身的珍贵树种。近年来,随着沙棘产品的不断开发,也极大促进了人们营造沙棘保护林的积极性,沙棘早已成为我国的一种防沙治沙改良土壤的一种标示性植物，越来越受人们的喜爱，伴随生态发展的同时新疆林果业也在快速发展，北疆的阿勒泰地区山区绿化、生态农业建设急需大量的沙棘苗木,传统的分株繁殖、幼枝扦插繁殖已不能满足需要,而组织培养育苗由于不受季节和地域限制,既能达到快速繁育的目的,又能很好保持良种特性的优势,尤其可对雌雄异株的沙棘作定性繁育,具有很大的发展前景。沙棘组织培养研究已有相关文献报道,但尚无可用于产业化生产的报道及配方。本试验以阿勒泰地区重点发展品种之一“辽阜品种大果沙棘”为试验材料，对其组织培养配方进行筛选试验，为今后产业化生产奠定了一定基础。技术实现要素：本发明的目的在于提供一种辽阜品种大果沙棘茎尖组织培养基配方，以解决上述
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：中提出的问题。为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：一种辽阜品种大果沙棘茎尖组织培养基配方，包括初代培养基、愈伤组织诱导培养基和继代培养基三种，其中，初代培养基配方：1/2ms、6-ba0.5mg/l、蔗糖30g/l，琼脂6g/l；愈伤组织诱导培养基配方：1/2ms、6-ba0.5mg/l、iba0.5mg/l、蔗糖30g/l，琼脂6g/l；继代培养基配方：1/2ms、6-ba0.5mg/l、iba0.2mg/l、蔗糖30g/l，琼脂6g/l。一种辽阜品种大果沙棘茎尖组织培养基的制备方法，初代培养基的配制：先量取ms培养基，添加6-ba，加入蔗糖，待蔗糖溶解后，调整ph到5.6-6.0，加入琼脂，加热使琼脂融化，高温高压灭菌，冷却成固体备用；愈伤组织诱导培养基的配制：先量取ms培养基，添加6-ba、iba，加入蔗糖，待蔗糖溶解后，调整ph到5.6-6.0，加入琼脂，加热使琼脂融化，高温高压灭菌，冷却成固体备用；继代培养基的配制：先量取ms培养基，添加6-ba、iba，加入蔗糖，待蔗糖溶解后，调整ph到5.6-6.0，加入琼脂，加热使琼脂融化，高温高压灭菌，冷却成固体备用。与现有技术相比，本发明的有益效果是：本发明的培养基配方专门适合于对辽阜品种大果沙棘茎尖组织的快速繁殖使用，初代培养基促进组织生长和侧芽诱导，愈伤组织诱导培养基可以诱导组织快速形成愈伤组织，继代培养基的进行快速扩繁；本发明的三个培养基配方协同作用，方便辽阜品种大果沙棘茎尖组织的快速繁殖，为今后产业化生产奠定了一定基础。具体实施方式下面结合具体实施方式对本专利的技术方案作进一步详细地说明。一种辽阜品种大果沙棘茎尖组织培养基配方，包括初代培养基、愈伤组织诱导培养基和继代培养基三种，其中，初代培养基配方：1/2ms、6-ba0.5mg/l、蔗糖30g/l，琼脂6g/l；配制时，先量取ms培养基，添加6-ba，加入蔗糖，待蔗糖溶解后，调整ph到5.6-6.0，加入琼脂，加热使琼脂融化，高温高压灭菌(121℃，25分钟)，冷却成固体备用。愈伤组织诱导培养基配方：1/2ms、6-ba0.5mg/l、iba0.5mg/l、蔗糖30g/l，琼脂6g/l；配制时，先量取ms培养基，添加6-ba、iba，加入蔗糖，待蔗糖溶解后，调整ph到5.6-6.0，加入琼脂，加热使琼脂融化，高温高压灭菌(121℃，25分钟)，冷却成固体备用；继代培养基配方：1/2ms、6-ba0.5mg/l、iba0.2mg/l、蔗糖30g/l，琼脂6g/l；配制时，先量取ms培养基，添加6-ba、iba，加入蔗糖，待蔗糖溶解后，调整ph到5.6-6.0，加入琼脂，加热使琼脂融化，高温高压灭菌(121℃，25分钟)，冷却成固体备用。上述，1/2ms，为本领域技术人员的公知常识，其为大量元素减半的ms培养基，ms培养基同样为为本领域技术人员的公知常识，所含有的组分及含量如表1：表1ms培养基的配方本发明的实验过程：1材料与方法1.1材料试验材料于7月中旬至8月下旬取成年植株当年生枝条的茎尖。采于阿勒泰地区青河县的辽阜品种大果沙棘。1.2培养条件蔗糖30g/l，琼脂6g/l，每瓶分装培养基25-35ml，ph5.6-6.0，培养室温度20-26℃，湿度40-60％，光照强度2000lx，光照时间12-14h/d。特别说明，下述的培养基配方中均默认添加，蔗糖30g/l，琼脂6g/l。1.3初代培养以茎尖为试材，先用自来水冲洗，再用洗洁精浸泡10min，期间不断搅拌，然后用流动自来水清洗15min，蒸馏水冲洗3遍，之后装入消毒烧杯中立即置于超净工作台上，接着用0.1％的hgcl2消毒3min，期间不断震摇，最后用灭菌蒸馏水冲洗6次。将茎尖放在灭菌的滤纸上将水分吸干，切成0.5cm-1.5cm长，将茎尖基部叶片剥离，接种于初代培养基上，每瓶接种3个茎尖。初代培养基分别以1/2ms和1/3ms为基本培养基，添加不同浓度的激素6-ba、iba和naa。初始培养基设计了以下10种：①1/2ms+6-ba1.0mg/l+iba0.5mg/l；②1/2ms+6-ba0.5mg/l+iba0.5mg/l；③1/2ms+6-ba0.5mg/l+iba0.2mg/l；④1/3ms+6-ba0.5mg/l+iba0.2mg/l；⑤1/3ms+6-ba0.2mg/l+iba0.2mg/l；⑥1/2ms+6-ba0.5mg/l；⑦1/2ms+6-ba0.2mg/l；⑧1/2ms+6-ba0.5mg/l+naa0.2mg/l；⑨1/3ms+6-ba0.2mg/l+naa0.05mg/l；⑩1/3ms+6-ba0.2mg/l+naa0.02mg/l。1.4继代培养1.4.1茎尖基部愈伤组织诱导诱导愈伤组织时，将高于2cm的初代芽接种接种至以1/2ms和ms为基本培养基的继代培养基上，添加不同浓度的激素6-ba和iba。愈伤组织诱导设计了以下4种1/2ms+6-ba0.5mg/l+iba0.5mg/l；1/2ms+6-ba0.5mg/l+iba0.2mg/l；ms+6-ba0.2mg/l+iba0.2mg/l；1/2ms+6-ba0.3mg/l+iba0.05mg/l。1.4.2增殖培养将初代的无菌苗切下，再将茎尖和带有2-3片叶的茎段切分，茎尖接种至1/2ms+6-ba0.5mg/l+iba0.2mg/l的继代培养基上，带腋芽的茎段接种至1/2ms+6-ba0.5mg/l的继代培养基上。2结果与分析2.1初代培养的建立初代培养基筛选结果表明，沙棘初代茎尖在培养基⑥和⑦上长势最好。在培养基①②⑤⑧上萌发率低或生长较慢，其他培养基长势一般。关于本实验中培养基的细胞分裂素6-ba的用量，结果表明6-ba浓度在0.2-0.5mg/l不添加任何生长素时，对于7月中旬至8月下旬的茎尖有较好的侧芽诱导效果，生长快，分化芽数最多。在细胞分裂素6-ba用量在0.5mg/l时，添加不同浓度的生长素iba结果表明，浓度低于0.2mg/l时生长迅速，但后期易死亡，浓度达到0.5mg/l时，基部愈伤组织开始形成。而6-ba与naa的组合则不适合辽阜品种大果沙棘初代的培养。其中培养基⑥即1/2ms+6-ba0.5mg/l成活率可达到92.3％，平均分化芽数可达2.53，为适宜初代培养基，详细记录如表2。表2不同培养基配方对初代培养的影响table2effectofdifferentculturemediumonprimaryculture2.2愈伤组织的诱导将初代培养萌发的2-3cm左右的侧芽无菌苗切下，转入继代培养基中，成功诱导出愈伤组织。试验结果表明，适合诱导愈伤组织的培养基是1/2ms+6-ba0.5mg/l+iba0.5mg/l，诱导率达到100％。在此培养基上，无菌苗生长迅速，在15d左右根部切口部位开始膨大，愈伤组织为黄绿色，继续培养至30d左右时，此时茎尖生长缓慢或停止，根部愈伤组织明显增大，直径可达到1.5cm左右，当培养至40d左右时，愈伤组织变深褐色失去活力甚至开始死亡。而在培养基1/2ms+6-ba0.5mg/l+iba0.2mg/l愈伤组织诱导率为66.3％愈伤组织块较1/2ms+6-ba0.5mg/l+iba0.5mg/l的体积小，30d时直径约1cm，继续培养至40天以上时，由愈伤组织萌发出少量芽，但是愈伤组织转黑褐色，萌发的芽有玻璃化的现象，不能正常生长，详细记录如表3。表3不同培养基配方对愈伤组织的影响table3effectofdifferentculturemediumoncallus2.3继代培养将初代形成的株高3cm以上的无菌苗截成带腋芽茎段诱导增殖，转移到新的培养基上进行继代培养，经过20d左右的培养后当新芽高2cm以上时，再切分成小段转接诱导增殖以达到扩繁的目的。在继代培养基的筛选上发现茎尖在1/2ms+6-ba0.5mg/l+iba0.2mg/l上长势迅速，茎段在1/2ms+6-ba0.5mg/l上诱导腋芽萌发生长效果较好；详细记录如表4。表4沙棘品种辽阜继代培养效果table4theeffectofsubcultureinshenqiuhong3小结与讨论通过对辽阜品种大果沙棘初步研究，以7月中旬至8月下旬采集的大田茎尖为外植体试材结果表明，适宜初代培养基为1/2ms+6-ba0.5mg/l，适宜愈伤组织诱导培养基为1/2ms+6-ba0.5mg/l+iba0.5mg/l，适宜继代培养基为1/2ms+6-ba0.5mg/l+iba0.2mg/l，适宜腋芽诱导培养基为1/2ms+6-ba0.5mg/l。上面对本专利的较佳实施方式作了详细说明，但是本专利并不限于上述实施方式，在本领域的普通技术人员所具备的知识范围内，还可以在不脱离本专利宗旨的前提下作出各种变化。上面对本专利的较佳实施方式作了详细说明，但是本专利并不限于上述实施方式，在本领域的普通技术人员所具备的知识范围内，还可以在不脱离本专利宗旨的前提下作出各种变化。当前第1页12当前第1页12