本发明涉及蛹虫草培养技术领域，尤其涉及一种蛹虫草液体培养基瓶栽出菇培养方法。
背景技术：
蛹虫草又称北虫草，隶属于真菌科的子囊菌亚门、麦角菌科、虫草属。蛹虫草是一种药用真菌，含有糖、脂肪和蛋白质，此外，还含有多种氨基酸、微量元素和维生素。其提取物如虫草素、虫草酸、虫草多糖等，具有极高的药用价值，可用于治疗系统失调、哮喘、支气管炎等，同时，蛹虫草中的多种生理活性成分具有抗肿瘤、抗菌、抗氧化、保护肝脏、增强免疫力等药理作用。长期以来，人们在开发利用蛹虫草过程中一直侧重于其药用价值，而忽略了其观赏价值。
蛹虫草生产中一般采用液体菌种、固体基质出菇的栽培方式，这种栽培方式可以提高生产效率，进而提高蛹虫草产量，但是其观赏价值较低，主要表现为：固体基质透气性好，利于虫草子座快速生长，导致观赏期缩短；在生产后期培养基质严重失水，导致虫草子座萎缩、失去光泽的现象，从而降低观赏价值。
技术实现要素：
本发明针对现有技术的不足，提供了一种培养方法简便、观赏价值高的蛹虫草液体培养基瓶栽出菇培养方法。
本发明的目的是通过如下技术方案实现的：
一种蛹虫草液体培养基瓶栽出菇培养方法，是由以下步骤制备得到的：
1）培养基配制：将液体培养基分装至培养瓶中，透气封口膜封口，120℃条件下灭菌20-30min；
本发明的培养瓶选择透明度高，可耐高温高压的培养瓶，大小选择250-600mL之间。
2）接种：灭菌完毕，待培养基温度冷却至25℃左右，在无菌环境下，接入2-3块0.4 cm *0.4 cm -0.6cm*0.6cm大小蛹虫草斜面母种；
3）液体菌球培养：将接种后的培养瓶置于震荡培养箱中，于转速120r/min、温度20℃条件下避光培养6-7d，液体培养基内生成大量的菌球；
4）气生菌丝培养：将生成大量菌球的培养瓶置于培养箱中继续培养，于温度20-22℃黑暗条件下静止培养10-15d，培养基表面生成气生菌丝；
用手倾斜培养瓶，气生菌丝层不随液面晃动；
5）转色：将生成气生菌丝每天照射13-15h，光照强度为200-250Lx、湿度为55-60%和温度为20-22℃条件下，培养4-5d，至白色气生菌丝转化为橘黄色；
6）促原基分化：在无菌环境下进行搔菌处理，白天控制温度为20-21℃，夜晚控制温度为10-15℃，给以温差刺激，在光照强度100-200Lx条件下每天光照13-14h，5-10d后即有大量原基形成；
具体措施为：选择顶端宽度为0.5-1mm的搔菌工具（如安装了操作长柄的铁钉或大号钢针）进行搔菌处理。用酒精灯火焰反复灼烧搔菌工具，在无菌环境中冷却后，轻轻在气生菌丝表面每间隔1cm划1条平行线。要求线条长度横贯培养瓶两侧，深度以不划透气生菌丝层为宜。
7）出菇管理：在透气封口膜上刺6-8个直径为1cm的小孔，光照强度为200-250Lx、温度为20-22℃和湿度为75-85%条件下，全天给光，培养5d，即有子座幼体形成；待子座幼体长到1cm以上，温度控制在18-20℃，湿度控制在80-90%，并逐步加强通风，可促使子座缓慢成长，即可。
子座幼体形成后逐步加强通风，可使子座颜色保持赏心悦目的金黄色，并适时调整光线方向，保证虫草子座形态端正，增加观赏价值；适当降低温度可减缓虫草子座生长速率，延长观赏期。
所述步骤1）中，液体培养基的装液量为培养瓶体积的30-50%。
所述液体培养基的配方为：马铃薯为100g/L，可溶性淀粉为10g/L，蛋白胨20g/L，KH2PO4为1.5g/L，MgSO4.7H2O为1.0g/L。
所述液体培养基是由以下步骤制得的：称100g去皮马铃薯，切成长宽高均约为1cm的小块，加1000mL水中，煮沸20-30min，用4层纱布过滤取滤液，加入10g可溶性淀粉、20g蛋白胨、1.5gKH2PO4和1.0g MgSO4.7H2O定容至1000mL。
本发明的蛋白胨可替换为同等质量的牛肉膏和酵母膏，牛肉膏和酵母膏的质量比为1：1。
注意可溶性淀粉在加入时，要边缓慢加入边用玻棒搅拌，切不可加入过快，防止溶解不完全。
本发明的有益效果：
1.本发明的液体培养基成分简单易得，成本低廉，蛋白质含量高，质量好，萌发速度快。
2.本发明在蛹虫草液体培养的基础上，通过静止避光培养生成大量气生菌丝，并形成气生菌丝层作为支撑蛹虫草子座的基础；采用液体培养基瓶栽出菇不需要接种到固体培养基上，减少了操作步骤，提高培养效率，延长观赏期，避免了由液体培养基接种到固体培养基造成的污染，同时避免了培养基质由于缺水而导致菇体干枯的现象，使得蛹虫草子座长时间保持新鲜状态，显著提高观赏价值。
具体实施方式
为了进一步了解本发明，下面结合实施例对本发明的优选实施方案进行描述，但是应当理解，这些描述只是为进一步说明本发明的特点和优点而不是对本发明专利要求的限制。
实施例1
一种蛹虫草液体培养基瓶栽出菇培养方法，是由以下步骤制备得到的：
1）培养基配制：将液体培养基分装至培养瓶中，透气封口膜封口，120℃条件下灭菌20min；
2）接种：灭菌完毕，待培养基温度冷却至25℃左右，在无菌环境下，接入3块 0.4 cm *0.4 cm 大小蛹虫草斜面母种；
3）液体菌球培养：将接种后的培养瓶置于震荡培养箱中，于转速120r/min、温度20℃条件下避光培养6d，液体培养基内生成大量的菌球；
4）气生菌丝培养：将生成大量菌球的培养瓶置于培养箱中继续培养，于温度22℃黑暗条件下静止培养10d，培养基表面生成气生菌丝；
5）转色：将生成气生菌丝每天照射15h，光照强度为200Lx、湿度为60%和温度为20℃条件下，培养5d，至白色气生菌丝转化为橘黄色；
6）促原基分化：在无菌环境下进行搔菌处理，白天控制温度为21℃，夜晚控制温度为10℃，给以温差刺激，在光照强度100Lx条件下每天光照14h， 10d后即有大量原基形成；
7）出菇管理：在透气封口膜上刺6-8个直径为1cm的小孔，光照强度为200Lx、温度为20℃和湿度为85%条件下，全天给光，培养5d，即有子座幼体形成；待子座幼体长到1cm以上，温度控制在18℃，湿度控制在90%，并逐步加强通风，可促使子座缓慢成长，即可。
所述步骤1）中，液体培养基的装液量为培养瓶体积的30%。
所述液体培养基的配方为：马铃薯为100g/L，可溶性淀粉为10g/L，蛋白胨20g/L，KH2PO4为1.5g/L，MgSO4.7H2O为1.0g/L。
所述液体培养基是由以下步骤制得的：称100g去皮马铃薯，切成长宽高均约为1cm的小块，加1000mL水中，煮沸20-30min，用4层纱布过滤取滤液，加入10g可溶性淀粉、20g蛋白胨、1.5gKH2PO4和1.0g MgSO4.7H2O定容至1000mL。
实施例2
一种蛹虫草液体培养基瓶栽出菇培养方法，是由以下步骤制备得到的：
1）培养基配制：将液体培养基分装至培养瓶中，透气封口膜封口，120℃条件下灭菌25min；
2）接种：灭菌完毕，待培养基温度冷却至25℃左右，在无菌环境下，接入2块0.5 cm *0.5 cm大小蛹虫草斜面母种；
3）液体菌球培养：将接种后的培养瓶置于震荡培养箱中，于转速120r/min、温度20℃条件下避光培养7d，液体培养基内生成大量的菌球；
4）气生菌丝培养：将生成大量菌球的培养瓶置于培养箱中继续培养，于温度21℃黑暗条件下静止培养13d，培养基表面生成气生菌丝；
5）转色：将生成气生菌丝每天照射14h，光照强度为230Lx、湿度为58%和温度为21℃条件下，培养4d，至白色气生菌丝转化为橘黄色；
6）促原基分化：在无菌环境下进行搔菌处理，白天控制温度为20℃，夜晚控制温度为13℃，给以温差刺激，在光照强度150Lx条件下每天光照13h，8d后即有大量原基形成；
7）出菇管理：在透气封口膜上刺6-8个直径为1cm的小孔，光照强度为230Lx、温度为21℃和湿度为80%条件下，全天给光，培养5d，即有子座幼体形成；待子座幼体长到1cm以上，温度控制在19℃，湿度控制在85%，并逐步加强通风，可促使子座缓慢成长，即可。
所述步骤1）中，液体培养基的装液量为培养瓶体积的40%。
所述液体培养基的配方为：马铃薯为100g/L，可溶性淀粉为10g/L，蛋白胨20g/L，KH2PO4为1.5g/L，MgSO4.7H2O为1.0g/L。
所述液体培养基是由以下步骤制得的：称100g去皮马铃薯，切成长宽高均约为1cm的小块，加1000mL水中，煮沸20-30min，用4层纱布过滤取滤液，加入10g可溶性淀粉、20g蛋白胨、1.5gKH2PO4和1.0g MgSO4.7H2O定容至1000mL。
实施例3
一种蛹虫草液体培养基瓶栽出菇培养方法，是由以下步骤制备得到的：
1）培养基配制：将液体培养基分装至培养瓶中，透气封口膜封口，120℃条件下灭菌30min；
2）接种：灭菌完毕，待培养基温度冷却至25℃左右，在无菌环境下，接入2块0.6cm*0.6cm大小蛹虫草斜面母种；
3）液体菌球培养：将接种后的培养瓶置于震荡培养箱中，于转速120r/min、温度20℃条件下避光培养6d，液体培养基内生成大量的菌球；
4）气生菌丝培养：将生成大量菌球的培养瓶置于培养箱中继续培养，于温度20℃黑暗条件下静止培养15d，培养基表面生成气生菌丝；
5）转色：将生成气生菌丝每天照射13h，光照强度为250Lx、湿度为55%和温度为22℃条件下，培养5d，至白色气生菌丝转化为橘黄色；
6）促原基分化：在无菌环境下进行搔菌处理，白天控制温度为21℃，夜晚控制温度为15℃，给以温差刺激，在光照强度200Lx条件下每天光照14h，5d后即有大量原基形成；
7）出菇管理：在透气封口膜上刺6-8个直径为1cm的小孔，光照强度为250Lx、温度为22℃和湿度为75%条件下，全天给光，培养5d，即有子座幼体形成；待子座幼体长到1cm以上，温度控制在20℃，湿度控制在80%，并逐步加强通风，可促使子座缓慢成长，即可。
所述步骤1）中，液体培养基的装液量为培养瓶体积的50%。
所述液体培养基的配方为：马铃薯为100g/L，可溶性淀粉为10g/L，蛋白胨20g/L，KH2PO4为1.5g/L，MgSO4.7H2O为1.0g/L。
所述液体培养基是由以下步骤制得的：称100g去皮马铃薯，切成长宽高均约为1cm的小块，加1000mL水中，煮沸20-30min，用4层纱布过滤取滤液，加入10g可溶性淀粉、20g蛋白胨、1.5gKH2PO4和1.0g MgSO4.7H2O定容至1000mL。
对比例
1）液体培养基配制：将液体培养基分装至250mL三角瓶中，透气封口膜封口，120℃温度下灭菌25min；
所述步骤1）中，液体培养基的装液量为培养瓶体积的40%。
所述液体培养基的配方为：马铃薯为100g/L，可溶性淀粉为10g/L，蛋白胨20g/L，KH2PO4为1.5g/L，MgSO4.7H2O为1.0g/L。
所述液体培养基是由以下步骤制得的：称100g去皮马铃薯，切成长宽高均约为1cm的小块，加1000mL水中，煮沸20-30min，用4层纱布过滤取滤液，加入10g可溶性淀粉、20g蛋白胨、1.5gKH2PO4和1.0g MgSO4.7H2O定容至1000mL。
2）接种与液体菌种培养：灭菌完毕，待培养基温度冷却至25℃左右，在无菌环境下，接入2块0.5 cm *0.5 cm大小蛹虫草斜面母种，每瓶接2-3块0.5cm*0.5 cm大小斜面固体母种；将接种后的培养瓶置于震荡培养箱中，于转速120r/min、温度20℃条件下避光培养7d，液体培养基内生成大量的菌球；
3）固体培养基的配制：以500m L罐头瓶为栽培容器，每瓶装入30g大米和54 mL营养液（即固液比为1︰1.8），用聚丙烯塑料薄膜封口后121℃高压蒸汽灭菌30min；
所述营养液的配方为：蛋白陈5 g/L，葡萄糖10 g/L，MgSO4.7H2O 0.5 g/L，KH2PO4 1 g/L，VB120mg/L；
4）接种：培养基冷却至25℃左右后，于无菌环境下每瓶用移液枪接入5mL液体菌种；
5）发菌管理：接种后将培养瓶置于20℃温度、 65%湿度条件下，避光培养20d左右，菌丝长满固体培养基；
6）转色与促原基分化：将步骤5）得到的培养瓶进行全天24 h光照，刺激菌丝转色，保持温度20℃、空气湿度70%左右；转色后，根据品种的特性决定是否采取搔菌处理，白天控制温度为20℃，夜晚控制温度为13℃，给以温差刺激，在光照强度150Lx条件下每天光照13h，每天早、中、晚各通风20min左右， 10d左右料面出现米粒大小原基。
7）出菇管理：原基出现后，在聚丙烯塑料薄膜上刺6-8个直径为1cm的小孔，光照强度为230Lx、温度为21℃和相对湿度为80%条件下，每天进行12h以上光照；待子座长幼体到3-5 cm，将温度调整到19℃、湿度控制在85%，并逐步加强通风透气，确保空气新鲜，期间保持光照即可。
性能测试
对实施例1-3和对比例1的培养方法进行对比，结果如表1所示。
表中所述的培养期为从液体菌种接种到子座幼体形成；所述的观赏期为从子座幼体到子座干枯。
表1 测试结果
以上对本发明的具体实施方式进行了描述，但本发明并不限于以上描述。对于本领域的技术人员而言，任何对一种蛹虫草液体培养基瓶栽出菇培养方法进行的同等修改和替代都是在本发明的范围之中。因此，在不脱离本发明的精神和范围下所做出的均等变换和修改，都应涵盖在本发明的范围内。