源自海洋的铜绿假单胞菌制备鼠李糖脂表面活性剂的工艺的利记博彩app
【技术领域】
[0001] 本发明一种生物发酵制备鼠李糖脂的方法。
【背景技术】
[0002] 鼠李糖脂是由微生物在特定的生长条件下分泌的一种具有优良表面活性的代谢 产物，在石油化工领域，多用于回收岩层中石油，提高石油采收率、清洗储油罐、消除海域中 的石油污染；在农业上，鼠李糖脂生物表面活性剂可增加有机憐杀虫剂的溶解度，增加粘重 ±亲水性，更有利于肥料和农药的吸收；此外，由于鼠李糖脂具有一定的抗菌、抗病毒和抗 支原体的性能，鼠李糖脂在医药工业中经过严格处理后作为药物的辅助剂或替代品，W缓 解抗生素给生物体带来的抗药作用，具有广阔应用前景。
[0003] 源自海洋的铜绿假单胞菌（Pseudomonas ae;ruginosa)CICC10204被用于制备鼠李 糖脂，但鼠李糖脂的发酵制备是典型的好氧发酵，多采用铜绿假单胞菌作为菌种进行发酵 生产，其菌丝体和多糖的形成过程中，发酵液的黏度迅速上升，使得发酵中后期溶氧性能迅 速下降，如加大揽拌，剪切力将增大，则会造成菌丝体的损伤，生产能力下降，严重影响了 生产效果。如何改善糖脂类生物表面活性剂发酵的溶氧状况，一直是该领域研究的焦点。 双相发酵技术是指在发酵液中加入一种新的，与水不相溶的体系，该体系是对氧有较高溶 解度，但又不溶于水、对微生物无毒的载体（氧载体），氧载体发酵体系由于具有氧传递速 度快，能耗低，气泡生成少，剪切力小等特点，可增加发酵体系的供氧能力，提高发酵产率。
[0004] 因此在采用铜绿假单胞菌制备鼠李糖脂表面活性剂时提供一种优化的工艺，进一 步优化发酵条件，提高底物的转化率和投料浓度，成为现有技术中亟待解决的问题
【发明内容】
[0005] 为解决上述技术问题，本发明的目的是提供一种改进的源自海洋的铜绿假单胞菌 制备鼠李糖脂表面活性剂的工艺，在研究中为我们惊奇的发现，通过优化发酵工艺，能够意 外的提高铜绿假单胞菌发酵制备鼠李糖脂表面活性剂时的转化率和投料浓度。
[0006] 本发明提供了一种利用源自海洋的铜绿假单胞菌（Pseudomonas aeruginosa)制 备鼠李糖脂表面活性剂的工艺
[0007] 所述铜绿假单胞菌保藏编号为CICC10204,所述工艺包括W下步骤 阳00引 （1)抱子培养，将保藏号为CICC10204的铜绿假单胞菌（Pseudomonas aeruginosa)作为生产菌种，采用驯化培养基培养得到成熟抱子；
[0009] 似菌体培养，步骤（1)得到的抱子接种到的菌体培养基中进行菌体培养得到菌 体培养液；
[0010] (3)生物转化，向步骤（1)中的菌体培养液在发酵培养基中在好氧发酵条件下，持 续发酵36-6化得到含有鼠李糖脂的发酵液，通风量（mVm3 · min)为1: (0. 6~1. 0); W11] (4)产物提取，将步骤做得到的发酵液通过离心法或膜过滤去除菌体及杂质，再 经服道尔顿超滤膜去除生物大分子和多糖；将收集到的滤液通过蒸发浓缩去除水分，最终 获得鼠李糖脂表面活性剂。
[0012] 所述的工艺，所述步骤（1)中的驯化培养基的配方为（按质量百分比）：植物油 3~6%，浓度为20~50%的乙醇0. 1~1%，葡萄糖0.2~0.5%，蛋白腺0.3~0.6%， 牛肉膏 0. 1 ~0. 4 %，Μ拆〇4〇. 02 ~0. 08 %，KH2PO4O. 1 ~0. 4 %，化C1 0. 03 ~0. 08 %， FeS04·7H20 0.00001 ~ 0.00003%，余量为水，培养基抑值7.0~7.2;
[001引所述步骤似中的菌体培养基的配方为（按质量百分比）：植物油2~5%，浓 度为20 %~50 %的乙醇0. 5~1 %，葡萄糖0. 2~0. 5 %，蛋白腺0. 3~0. 6 %，牛肉膏 0. 1 ~0. 4 %，Μ拆040. 02 ~0. 08 %，ΚΗ2ΡΟ4Ο. 1 ~0. 4 %，化C1 0. 03 ~0. 08 %，FeS04 · 7&0 0. 00001~0. 00003%，余量为水，培养基抑值7. 0~7. 2。
[0014] 所述步骤（3)中的发酵培养基的配方为（按质量百分比）：植物油2~5%，浓度为 20%~50%的乙醇0. 3~0.8%，葡萄糖0. 2~0. 5%，蛋白腺0. 2~0. 5%，牛肉膏0.05~ 0. 2%，Μ拆〇4〇. 02 ~0. 06%，KH2PO40.0 6 ~0. 2%，FeS〇4 . 7&0 0. 00001 ~0. 00003%，余 量为水，培养基抑7. 0~7. 2。
[0015] 本发明提供的工艺可W显著提高采用源自海洋的假铜绿单胞菌生产鼠李糖脂表 面活性剂的收率。并且意外的发现，采用本发明提供的工艺，发酵液中的鼠李糖脂更容易进 行提取，说明本发明提供的工艺其工业化实施的前景更好。
【具体实施方式】
[0016] 下面结合实施例，对本发明的【具体实施方式】作进一步详细描述。W下实施例用于 说明本发明，但不用来限制本发明的范围。
[0017] 菌种：铜绿假单胞菌（Pseudomonas aeruginosa)，保藏编号 CICC10204 W化]步骤
[0019] (1)抱子培养，将保藏号为CICC10204的铜绿假单胞菌（Pseudomonas aeruginosa)作为生产菌种，采用驯化培养基培养得到成熟抱子；
[0020] 似菌体培养，步骤（1)得到的抱子接种到的菌体培养基中进行菌体培养得到菌 体培养液；（3)生物转化，向步骤（1)中的菌体培养液在发酵培养基中在好氧发酵条件下， 持续发酵4化得到含有鼠李糖脂的发酵液，通风量（mVm3 · min)为1 : (0. 6~1. 0);
[0021] (4)产物提取，将步骤（3)得到的发酵液通过离屯、法或膜过滤去除菌体及杂质，再 经服道尔顿超滤膜去除生物大分子和多糖；将收集到的滤液通过蒸发浓缩去除水分，最终 获得鼠李糖脂表面活性剂。 阳02引所述的方法，所述步骤（1)中的驯化培养基的配方为（按质量百分比）：植物油 3~6%，浓度为20~50%的乙醇0. 1~1%，葡萄糖0.2~0.5%，蛋白腺0.3~0.6%， 牛肉膏 0. 1 ~0. 4 %，Μ拆〇4〇. 02 ~0. 08 %，KH2PO4O. 1 ~0. 4 %，化C1 0. 03 ~0. 08 %， FeS04·7H20 0.00001 ~ 0.00003%，余量为水，培养基抑值7.0~7.2;
[002引所述步骤似中的菌体培养基的配方为（按质量百分比）：植物油2~5%，浓 度为20 %~50 %的乙醇0. 5~1 %，葡萄糖0. 2~0. 5 %，蛋白腺0. 3~0. 6 %，牛肉膏 0. 1 ~0. 4 %，Μ拆040. 02 ~0. 08 %，ΚΗ2ΡΟ4Ο. 1 ~0. 4 %，化C1 0. 03 ~0. 08 %，FeS04 · 7&0 0. 00001~0. 00003%，余量为水，培养基抑值7. 0~7. 2。
[0024] 所述步骤做中的发酵培养基的配方为（按质量百分比）：植物油2~5%，浓度为 20%~50%的乙醇0. 3~0.8%，葡萄糖0. 2~0. 5%，蛋白腺0. 2~0. 5%，牛肉膏0.05~ 0. 2%，Μ拆〇4〇. 02 ~0. 06%，KH2PO40.0 6 ~0. 2%，FeS〇4 . 7&0 0. 00001 ~0. 00003%，余 量为水，培养基抑7. 0~7. 2。
[00巧]不同实施例的培养基配比见下表：
[0026]
[0027] 通过上述实施例表明，采用本发明提供的生产工艺，可W显著提高采用源自海洋 的假铜绿单胞菌生产鼠李糖脂表面活性剂的收率。并且意外的发现，采用本发明提供的工 艺，发酵液中的鼠李糖脂更容易进行提取，说明本发明提供的工艺其工业化实施的前景更 好。
【主权项】
1. 一种利用源自海洋的铜绿假单胞菌（Pseudomonas aeruginosa)制备鼠李糖脂表面 活性剂的工艺 所述铜绿假单胞菌保藏编号为CICC10204,所述工艺包括以下步骤： (1) 孢子培养，将保藏号为CICC10204的铜绿假单胞菌（Pseudomonas aeruginosa)作 为生产菌种，采用驯化培养基培养得到成熟孢子； (2) 菌体培养，步骤（1)得到的孢子接种到的菌体培养基中进行菌体培养得到菌体培 养液； (3) 生物转化，向步骤（1)中的菌体培养液在发酵培养基中在好氧发酵条件下，持续发 酵36-60h得到含有鼠李糖脂的发酵液，通风量（m 3/m3 · min)为1 : (0. 6~1. 0); (4) 产物提取，将步骤（3)得到的发酵液通过离心法或膜过滤去除菌体及杂质，再经6K 道尔顿超滤膜去除生物大分子和多糖；将收集到的滤液通过蒸发浓缩去除水分，最终获得 鼠李糖脂表面活性剂。2. 如权利要求1所述的工艺，其特征是所述步骤（1)中的驯化培养基的配方为（按质 量百分比）：植物油3~6%，浓度为20~50%的乙醇0. 1~1 %，葡萄糖0. 2~0. 5%，蛋 白胨 0· 3 ~0· 6%，牛肉膏 0· 1 ~0· 4%，MgS040. 02 ~0· 08%，ΚΗ2Ρ040· 1 ~0· 4%，NaCl 0· 03 ~0· 08%，FeS04 · 7Η200· 00001 ~0· 00003%，余量为水，培养基 pH 值 7. 0 ~7. 2 ; 所述步骤（2)中的菌体培养基的配方为（按质量百分比）：植物油2~5%，浓度为 20%~50%的乙醇0.5~1%，葡萄糖0.2~0.5%，蛋白胨0.3~0.6%，牛肉膏(λ 1~ 0· 4 %，MgS040 . 02 ~0· 08 %，ΚΗ2Ρ040· 1 ~0· 4 %，NaCl 0· 03 ~0· 08 %，FeS04 · 7H20 0.00001~0.00003%，余量为水，培养基？!1值7.0~7.2; 所述步骤（3)中的发酵培养基的配方为（按质量百分比）：植物油2~5%，浓度为 20%~50%的乙醇0· 3~0· 8%，葡萄糖0· 2~0· 5%，蛋白胨0· 2~0· 5%，牛肉膏0· 05~ 0· 2%，MgS040 . 02 ~0· 06%，ΚΗ2Ρ040 · 06 ~0· 2%，FeS04 · 7H20 0· 00001 ~0· 00003%，余 量为水，培养基PH7. 0~7. 2。
【专利摘要】源自海洋的铜绿假单胞菌制备鼠李糖脂表面活性剂的工艺，所述工艺包括以下步骤：(1)孢子培养，将保藏号为的铜绿假单胞菌作为生产菌种，采用驯化培养基培养得到成熟孢子；(2)菌体培养，步骤(1)得到的孢子接种到的菌体培养基中进行菌体培养得到菌体培养液；(3)生物转化，向步骤(1)中的菌体培养液在发酵培养基中在好氧发酵条件下，持续发酵得到含有鼠李糖脂的发酵液，通风量(m3/m3·min)为1：(0.6～1.0)；(4)产物提取，将步骤(3)得到的发酵液通过离心法或膜过滤去除菌体及杂质，再经6K道尔顿超滤膜去除生物大分子和多糖；将收集到的滤液通过蒸发浓缩去除水分，最终获得鼠李糖脂表面活性剂。
【IPC分类】C12P19/02, C12R1/385
【公开号】CN105671103
【申请号】
【发明人】季延滨, 李涛, 孙学亮
【申请人】芝王（天津）生物科技有限公司
【公开日】2016年6月15日
【申请日】2014年11月20日