g复合预混合饲料作为试样4;
[0036] (2)将上述试样4置于100mL棕色容量瓶中，加入约80mL维生素 A混合溶剂，瓶塞不 要塞紧，于15°C、15KHZ超声波水浴中超声提取lOmin，接着于20°C、20KHZ超声波水浴中超声 提取5min，接着于25°C、25KHZ超声波水浴中超声提取5min，接着使用维生素 A混合溶剂稀释 至刻度，充分摇匀得到维生素溶解液D;其中，所述维生素 A混合溶剂为体积比为98.5:1.2: 0.3的甲醇、正己烷和BHT经超声混合均匀的混合溶剂。
[0037] 实施例5
[0038] (1)称取8.3046g复合预混合饲料作为试样5;
[0039] (2)将上述试样5置于100mL棕色容量瓶中，加入约80mL维生素 A混合溶剂，瓶塞不 要塞紧，于15°C、15KHZ超声波水浴中超声提取5min，接着于25°C、25KHZ超声波水浴中超声 提取5min，接着于35°C、35KHZ超声波水浴中超声提取5min，接着使用维生素 A混合溶剂稀释 至刻度，充分摇匀得到维生素溶解液E;其中，所述维生素 A混合溶剂为体积比为99:0.8:0.2 的甲醇、正己烷和BHT经超声混合均匀的混合溶剂。
[0040] 实施例6
[0041] (1)称取1. l〇49g复合预混合饲料作为试样6;
[0042] (2)将上述试样6置于100mL棕色容量瓶中，加入约80mL维生素 A混合溶剂，瓶塞不 要塞紧，于15°C、15KHZ超声波水浴中超声提取8min，接着于25°C、25KHZ超声波水浴中超声 提取8min，接着于35°C、35KHZ超声波水浴中超声提取8min，接着使用维生素 A混合溶剂稀释 至刻度，充分摇匀得到维生素溶解液F;其中，所述维生素 A混合溶剂为体积比为99:0.5:0.5 的甲醇、正己烷和BHT经超声混合均匀的混合溶剂。
[0043] 对比例
[0044] (1)称取1.0128g复合预混合饲料作为试样7;
[0045] (2)将上述试样7置于100mL棕色容量瓶中，加入约80mL甲醇，瓶塞不要塞紧，于65 °C、35KHZ超声波水浴中超声提取30min，接着使用甲醇稀释至刻度，充分摇匀得到维生素溶 解液G;
[0046] 测试例
[0047] 1、标准溶液的制备：
[0048]称取维生素 A乙酸酯标准品（精确至O.OOOlg)于棕色容量瓶中，用所述维生素 A混 合溶剂溶解并稀释至刻度，混匀制得浓度为1.36、3.44、6.88yg/mL的标准溶液，4°C保存待 用。需要注意的是，上述维生素 A混合溶剂为甲醇、正己烷和BHT混合溶剂，只要三者的体积 比为(98-99): (0.8-1.5): (0.2-0.5)即可，在本测试例中，三者的体积比为99:0.5:0.5;而 测定对比例的标准溶液的制备按照GB/T17817-2010来制备上述浓度的标准溶液。
[0049] 2、色谱条件
[0050]在本实施例中，高效液相色谱仪为WATERS 2489高效液相色谱仪（当然也可以为其 他型号的高效液相色谱仪），其设置条件如下：
[0051 ] 色谱柱:C18型柱，长150mm，内径4.6臟，粒度54111;
[0052] 流动相:混合比例为体积比80-98:2-20的甲醇与水的混合液，其中甲醇与水都需 要经过0.45μπι的过滤膜，按比例配好后超声波超声15min;在本测试例中，混合相为体积比 98:2的甲醇与水的混合液；
[0053] 流速：1 .OmL/min;
[0054] 温度:室温；
[0055] 进样量:20μ1;
[0056] 检测波长：326nm〇
[0057] 3、检测结果
[0058] 首先，使用标准溶液进行测定，以在高效液相色谱仪内得到线性直线，以方便在检 测维生素溶解液A-G时直接得到仪器测出值Xal (yg/mL)，检测结果见表1:
[0059] 表 1
[0060]
[0(
[0062] 其中，计算公式如下：
[0063] Xa=Xal*V/M
[0064] Xa:试样维生素 A含量，单位为yg/g;
[0065] Xal:仪器测出值，单位为yg/mL;
[0066] V:维生素溶解液体积，单位为mL;
[0067] Μ:试样重量，单位为g;
[0068] 从以上检测结果可以看出，本发明的测定方法测出结果要高于国标中直接提取法 测定的维生素 A的浓度，且通过上述实施例中的维生素 A的含量计算出的相对偏差为11%， 远远低于国标在此维生素范围内的20%。
[0069] 需要说明的是，关于维生素 A混合溶剂的超声波混合的温度、时间和频率为室温、 15min和20KHZ，其中关于上述温度、时间和频率是可以变化的，只要使维生素 A混合溶剂混 合均匀即可。
[0070] 显然，上述实施例仅仅是为清楚地说明所作的举例，而并非对实施方式的限定。对 于所属领域的普通技术人员来说，在上述说明的基础上还可以做出其它不同形式的变化或 变动。这里无需也无法对所有的实施方式予以穷举。而由此所引伸出的显而易见的变化或 变动仍处于本发明创造的保护范围之中。
【主权项】
1. 一种复合预混合饲料中维生素 A的测定方法，其特征在于，包括如下步骤： (1) 称取l-l〇g复合预混合饲料作为试样，精确至O.OOOlg; (2) 将上述试样置于棕色容量瓶中，加入约80mL维生素 A混合溶剂，瓶塞不要塞紧，于 10-35°C超声波水浴中超声提取10_20min，接着使用维生素 A混合溶剂稀释至刻度，充分摇 匀得到维生素 A溶解液;其中，所述维生素 A混合溶剂为包括体积比为(98-99): (0.8-1.5): (0.2-0.5)的甲醇、正己烷和BHT形成的混合溶剂； (3) 使用高效液相色谱仪对上述维生素 A溶解液进行测定。2. 根据权利要求1所述的测定方法，其特征在于，步骤(2)中超声波水浴的超声波频率 为15-40KHZ。3. 根据权利要求2所述的测定方法，其特征在于，步骤(2)中超声波水浴的超声波频率 设置为梯度设置。4. 根据权利要求3所述的测定方法，其特征在于，所述梯度设置为超声波频率随着超声 提取时间均匀增加。5. 根据权利要求4所述的测定方法，其特征在于，步骤(3)中，高效液相色谱仪的色谱条 件如下： 色谱柱:C18型柱，长150mm，内径4.6111111，粒度5以111; 流动相：混合比例为体积比80-98:2-20的甲醇与水的混合液，其中甲醇与水都需要经 过0.45μηι的过滤膜，按比例配好后超声波超声15min; 流速：1 .OmL/min; 温度:室温； 进样量:20μ1; 检测波长：326nm〇6. 根据权利要求5所述的其特征在于，，其特征在于，还包括标准溶液的制备，包括： 称取维生素 A乙酸酯标准品（精确至O.OOOlg)于棕色容量瓶中，用所述维生素 A混合溶 剂溶解并稀释至刻度，混匀，4°C保存。
【专利摘要】本发明涉及一种复合预混合饲料中维生素A的测定方法，包括溶解、测定步骤，通过使用维生素A混合溶剂将试样中的维生素溶解，且在溶解过程中的超声波水浴的温度为10-35℃，其中，所述维生素A混合溶剂为包括体积比为(98-99)：(0.8-1.5)：(0.2-0.5)的甲醇、正己烷和BHT形成的混合溶剂，因为维生素A是脂溶性的维生素，故而正己烷也是溶解维生素A的良好溶剂，且在向甲醇中加入少量的正己烷，且在超声波的作用下，正己烷完全溶于甲醇，使其成为溶解维生素A的最佳溶剂，且在正己烷的存在下，甲醇的挥发度会存在一定程度的降低，避免了现有技术中单纯使用甲醇溶解维生素A时因超声波水浴温度在65℃导致维生素A降解而造成检测结果偏低的现象。
【IPC分类】G01N30/06, G01N30/74
【公开号】CN105651909
【申请号】
【发明人】刘海滢
【申请人】苏州帝凯维动物营养有限公司
【公开日】2016年6月8日
【申请日】2016年3月3日