一种用糖精钠标准品代替蒜素标准品测定蒜素含量的检测方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及一种蒜素含量方法，具体涉及一种用糖精钠标准品代替蒜素标准品测 定蒜素含量的方法。
【背景技术】
[0002] 蒜素（二烯丙基硫代亚磺酸酯Allicin)是大蒜素等硫醚类化合物的前体，是大蒜 破碎后，大蒜中的蒜氨酸(Alliin)经蒜酶(Allinase)酶解，水解而产生的重要的活性物质， 其含量的多少是衡量大蒜及其制品质量和定价的一项重要指标。
[0003] 目前测定蒜与蒜制品中蒜素含量的方法有定硫法、电化学方法、生物检定方法，薄 层扫描法及紫外法，高效液相色谱法(HPLC)等。其中定硫法、电化学方法不能将蒜素和其它 含硫化合物分开，测定为含硫总量;生物检定方法是利用蒜素的抗菌活性进行测定，专属性 差;薄层扫描法为半定量方法;紫外法需要进行衍生化(利用吸收系数法），且衍生化的专属 性不强，测定的是一类化合物的总和;高效液相色谱法(HPLC)的分离性好、灵敏度高、定量 准确。目前测定蒜与蒜制品中蒜素含量的标准是NY/T 2643-2014《大蒜及制品中蒜素的测 定高效液相色谱法》，该方法使用蒜素对照品，通过样品中蒜素峰面积与对照品峰面积的比 值换算样品中蒜素的含量，但由于该方法使用的蒜素标准品性质极不稳定，制备困难，目前 国内购买不到蒜素的对照品，只能从国外购买，且价格比较昂贵、贮存条件要求严格。并且 蒜素对照品在打开使用后，其含量随时间增长逐渐降低，由于蒜素标准品不稳定容易带来 测试误差。
【发明内容】
[0004] 针对现有技术的不足，本发明旨在提供一种用糖精钠标准品代替蒜素标准品测定 蒜素含量的方法，利用糖精钠作为蒜素标准品的替代对照品，避免蒜素标准品不稳定容易 带来测试误差的问题，并且节约成本。
[0005] 为了实现上述目的，本发明采用如下技术方案：
[0006] -种用糖精钠标准品代替蒜素标准品测定蒜素含量的检测方法，包括如下步骤：
[0007] S1绘制蒜素标准曲线，得到相关系数超过设定值的线性关系良好的蒜素浓度范 围；
[0008] S2绘制糖精钠标准曲线，得到相关系数超过设定值的线性关系良好的糖精钠浓度 范围；
[0009] S3根据步骤S1和S2得到的线性关系良好的蒜素浓度范围和糖精钠浓度范围，计算 得到蒜素和糖精钠之间的校正因子，从而得到蒜素和糖精钠之间的对应关系；
[0010] S4根据步骤S3得出的校正因子，采用糖精钠标准品代替蒜素标准品，通过高效液 相色谱法测定待测样品的蒜素含量。
[0011] 进一步地，步骤S1和步骤S2的设定值可为0.99。
[0012]进一步地，步骤S1的具体方法为:取一定量蒜素标准品溶解稀释，并制成多种浓度 的上机液，注入高效液相色谱仪，记录主峰面积，用蒜素的浓度X对蒜素的峰面积Y进行线性 回归，得线性回归方程，相关系数r>0.99对应的蒜素浓度范围即为线性关系良好的蒜素浓 度范围。
[0013]更进一步地，步骤S1的方法具体为：
[0014] 准确称取5mg蒜素标准品至10.OOmL容量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，作为储 备液A，然后分别吸取501^、1001^、2001^、4001^、8001^、11^、211^储备液八至51^容量瓶中，分 别用水定容至刻度线，即配制成浓度为511^凡、1〇11^凡、2〇11^凡、4〇11^凡、8〇11^凡、10〇11^凡、 200mg/L的上机液，注入高效液相色谱仪，液相色谱条件按照NY/T 2643-2014《大蒜及制品 中蒜素的测定高效液相色谱法》，进样量10uL，记录主峰面积，用蒜素的浓度X对蒜素的峰面 积Y进行线性回归，得线性回归方程，Y = 11290X+2139.2，r = 0.9999，即蒜素在5-200mg/L浓 度范围内，线性关系良好。
[0015] 进一步地，步骤S2的具体方法为:取一定量糖精钠标准品溶解稀释，并制成多种浓 度的上机液，注入高效液相色谱仪，记录主峰面积，用糖精钠的浓度X对糖精钠的峰面积Y进 行线性回归，得线性回归方程，相关系数r>0.99对应的糖精钠浓度范围即为线性关系良好 的糖精钠浓度范围。
[0016]更进一步地，步骤S2的具体方法为：
[0017]准确称取25mg糖精钠标准品至25.OOmL容量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，作 为储备液 B，然后分别吸取 251^、501^、1001^、2001^、4001^、8001^、11^、21^储备液8至511^容 量瓶中，分别用水定容至刻度线，即配制成浓度为5mg/L、10mg/L、20mg/L、40mg/L、80mg/L、 160mg/L、200mg/L、400mg/L的上机液，注入高效液相色谱仪，液相色谱条件按照NY/T 2643-2014《大蒜及制品中蒜素的测定高效液相色谱法》，进样量10uL，记录主峰面积，用糖精钠的 浓度X对糖精钠的峰面积Y进行线性回归，得线性回归方程，Y = 6422.2X-1546.3，r = 0.9999，即糖精钠在5-400mg/L范围内，线性关系良好。
[0018] 进一步地，步骤S3的具体方法为:分别在蒜素和糖精钠线性关系良好的浓度范围 中选择任意浓度，并准确配置相应浓度的蒜素标准工作溶液和糖精钠标准工作溶液;然后 将两标准工作溶液各自注入液相色谱仪，记录蒜素、糖精钠主峰面积，蒜素、糖精钠标准工 作溶液均连续进样若干次，以蒜素和糖精钠各自的主峰峰面积除以相对应的浓度计算各自 的响应因子，再以糖精钠的响应因子比蒜素的响应因子，得到蒜素对糖精钠的校正因子，从 而得到蒜素和糖精钠之间的对应关系，即单位质量糖精钠相当于多少质量的蒜素。
[0019] 进一步地，步骤S4中，高效液相色谱法的液相色谱条件及样品前处理条件按照NY/ T 2643-2014《大蒜及制品中蒜素的测定尚效液相色谱法》中的标准，具体步骤为：
[0020] 4.1)测定:在步骤S2得到的糖精钠线性关系良好的浓度范围之内选取浓度Ao作为 糖精钠标准工作溶液质量浓度;称取一定质量的试料m按照NY/T 2643-2014的标准前处理 定容V得到待测液，注意要使待测液中蒜素含量在步骤S1中得到蒜素线性关系良好的浓度 范围内；然后分别取适量待测液和糖精钠标准工作溶液，注入高效液相色谱仪，以色谱峰面 积定量，记录待测液的主峰面积为A，糖精钠标准工作溶液的主峰面积为A〇;
[0021] 4.2)结果计算：
[0022]待测液中蒜素的含量P为:P = apQA/AQ;a表示步骤S3中得到的糖精钠与蒜素的校正 因子；
[0023 ]待测样品中蒜素的含量W为W=pV/m，V为定容体积;m为试料质量。
[0024]本发明的有益效果在于:采用糖精钠标准品代替蒜素标准品检测蒜素含量避免了 蒜素标准品在配制后由于不稳定所带来的试验误差，且由于糖精钠标准品价格远比蒜素标 准品便宜、易购买，也节约了成本。另外，在本发明实验条件下，蒜素标样和糖精钠标样的出 峰时间相近，且分离度好，准确性高。
【附图说明】
[0025]图1为本发明实施流程图；
[0026]图2为蒜素标准曲线示意图；
[0027]图3为糖精纳标准曲线不意图；
[0028]图4为100mg/L蒜素标准工作溶液图谱；
[0029]图5为100mg/L糖精钠标准工作溶液图谱；
[0030]图6为鲜蒜样品图谱。
【具体实施方式】
[0031]以下将结合附图对本发明作进一步的描述，需要说明的是，本实施例以本技术方 案为前提，给出了详细的实施方式和具体的操作过程，但本发明的保护范围并不限于本实 施例。
[0032] 如图1所示，一种用糖精钠标准品代替蒜素标准品测定蒜素含量的方法包括如下 步骤：
[0033] S1蒜素标准曲线的绘制，得到相关系数超过设定值的线性关系良好的蒜素浓度范 围。
[0034]准确称取5mg蒜素标准品至10.OOmL容量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，作为储 备液A，然后分别吸取501^、1001^、2001^、4001^、8001^、11^、211^储备液八至51^容量瓶中，分 别用水定容至刻度线，即配制成浓度为511^凡、1〇11^凡、2〇11^凡、4〇11^凡、8〇11^凡、10〇11^凡、 200mg/L的上机液，注入高效液相色谱仪，液相色谱条件按照NY/T 2643-2014《大蒜及制品 中蒜素的测定高效液相色谱法》，进样量10uL，记录主峰面积，用蒜素的浓度(X)对蒜素的峰 面积(Y)进行线性回归，得线性回归方程，Y = 11290X+2139.2(r = 0.9999)，如图2所示。说明 蒜素在5-200mg/L范围内，线性关系良好。
[0035] S2糖精钠标准曲线的绘制
[0036]准确称取25mg糖精钠标准品至25.00mL容量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，作 为储备液 B，然后分别吸取 251^、501^、1001^、2001^、4001^、8001^、11^、21^储备液8至511^容 量瓶中，分别用水定容至刻度线，即配制成浓度为5mg/L、10mg/L、20mg/L、40mg/L、80mg/L、 160mg/L、200mg/L、400mg/L的上机液，注入高效液相色谱仪，液相色谱条件按照NY/T 2643-2014《大蒜及制品中蒜素的测定高效液相色谱法》，进样量10uL，记录主峰面积，用糖精钠的 浓度(X)对糖精钠的峰面积(Y)进行线性回归，得线性回归方程，Y = 6422.2X-1546.3(r = 0.9999)，如图3所示。说明糖精钠在5-400mg/L范围内，线性关系良好。
[0037] S3上述结果表明蒜素在5-200mg/L的浓度范围内，糖精钠在5-400mg/L的浓度范围 内，可用任一浓度溶液进行二者校正因子的测定。
[0038] 准确配制线性范围内（即在步骤S1和步骤S2得到的线性良好的浓度范围内各选取 一个浓度值，为了计算方便，本实施例中均采用l〇〇mg/L)的蒜素标准工作溶液和糖精钠标 准工作溶液。制备得到的蒜素标准工作溶液和糖精钠标准工作溶液图谱分别如图4、图5所 示。注入液相色谱仪，进样量10uL，记录蒜素、糖精钠主峰面积，蒜素标准工作溶液、糖精钠 标准工作溶液均连续进样5次，以蒜素和糖精钠各自的主峰峰面积除以相对应的浓度计算 各自的响应因子，再以糖精钠的响应因子比蒜素的响应因子计算蒜素对糖精钠的校正因 子，结果见表1。
[0039] 表 1
[0040]