一种利伐沙班及有关物质的测定方法

一种利伐沙班及有关物质的测定方法
【技术领域】
[0001] 本发明属于医药技术领域，更具体地说，涉及一种利伐沙班及有关物质的测定方 法。
【背景技术】
[0002] 利伐沙班，Rivaroxaban，其化学名称为5_氯-N_( {(5S)_2_氧-3-[4-(3_氧代吗 啉-4-基)苯基]-1，3-噁唑啉-5-基}甲基)噻吩-2-甲酰胺。
[0003] 利伐沙班结构式为：
利伐沙班是一种高选择性，直接抑制因子Xa的口服药物。通过抑制因子Xa可以中断凝 血瀑布的内源性和外源性途径，抑制凝血酶的产生和血栓形成，对血小板聚集没有直接作 用。
[0004] 利伐沙班有关物质检测的难度在于，产品在合成过程中产生的杂质较多，可能产 生的杂质包括关键起始物料、残留中间广品、副反应广物、降解杂质等多种工艺杂质；利伐 沙班的杂质（杂质1、杂质2、杂质3、杂质4、杂质5、杂质6、杂质7、杂质8、杂质9、杂质10、杂质 11、杂质12、杂质13、杂质14、杂质15、中间体A、B、C、SM1、SM2、SM3等)较多，不易完全分离。且 其中中间体C、杂质12、SM2极性较大，在色谱系统中保留较弱或几乎无保留；而杂质10、杂 质11极性较小，极性较小，在色谱系统中保留极强，不易被洗脱。极性差异使这些杂质难以 在同一色谱条件中检测，而这些杂质的潜在性给利伐沙班原料药有关物质检测增加了难 度。利伐沙班的有关物质检测方法的文献报道极少，采用利伐沙班片进口质量标准有关物 质方法检测利伐沙班有关物质时，杂质10、杂质11基本分离，但是中间体C、杂质12、SM2均与 溶剂峰重合，难以分离。
[0005] 杂质 10:
杂质11:
杂质12
中间体C: SM2：

【发明内容】

[0006] 本发明提供了一种高效液相色谱法，能够将利伐沙班、利伐沙班的杂质（杂质9、杂 质10、杂质12、SM2、中间体C等)有效的分离，分析时间短，从而实现了利伐沙班的杂质的有 效检测，保证了利伐沙班的质量控制，具有现实意义。
[0007] 本发明的目的是提供一种能检测利伐沙班及有关物质的方法。
[0008] 具体地说，本发明提供了一种利伐沙班及有关物质的高效液相色谱检测方法，该 检测方法包括： 选用十八烷基硅烷键合硅胶为固定相的色谱柱； 以缓冲盐水溶液和乙腈为流动相； 以紫外检测器为检测器。
[0009] 在本发明的一种优选实施方案中，本发明提供的一种利伐沙班及有关物质的高效 液相色谱检测方法，其中，所述流动相流速为0.5~1.5ml/min，优选1.0 ml/min。
[0010] 在本发明的一种优选实施方案中，本发明提供的一种利伐沙班及有关物质的高效 液相色谱检测方法，其中，所述紫外检测器的检测波长为220~250nm，最佳检测波长250nm〇
[0011] 在本发明的一种优选实施方案中，本发明提供的一种利伐沙班及有关物质的高效 液相色谱检测方法，其中，色谱柱的温度为20~45°C，最佳柱温为30°C。
[0012] 在本发明的一种优选实施方案中，本发明提供的一种利伐沙班及有关物质的高效 液相色谱检测方法，其中，所述流动相中缓冲盐水溶液和乙腈体积比例为如下梯度：
在本发明的一种优选实施方案中，本发明提供的一种利伐沙班及有关物质的高效液相 色谱检测方法，其中，所述缓冲盐选自可溶于水的磷酸金属盐，优选地，选自磷酸的钠盐或 钾盐，更优选地，选自磷酸氢二钾、磷酸二氢钾、磷酸氢二钠、磷酸二氢钠中的一种或几种； 特别优选地，为磷酸氢二钠。
[0013] 在本发明的一种优选实施方案中，本发明提供的一种利伐沙班及有关物质的高效 液相色谱检测方法，其中，所述缓冲盐水溶液的pH范围为5.0~7.0。
[0014] 在本发明的一种特别优选实施方案中，本发明提供的一种利伐沙班及有关物质的 高效液相色谱检测方法，其中，所述缓冲盐水溶液为磷酸氢二钠的水溶液，并且用磷酸将其 调节pH值为6.0。
[0015] 在本发明的一种更优选的实施方案中，本发明提供了一种利伐沙班及有关物质的 高效液相色谱检测方法，包括如下操作： 取本品（即利伐沙班)适量，称重，用稀释液超声溶解，配成每lml含利伐沙班0.5mg的样 品溶液，流速为1. 〇ml/ml，检测波长为250nm，柱温30 °C ;精密量取样品溶液10μ1注入液相色 谱仪，完成利伐沙班中活性组分及有关物质检测。
[0016] 本发明的特点是:各杂质之间分离度好，各杂质与利伐沙班分离彻底，操作简便快 捷，分析时间短，成本低，能有效的控制利伐沙班的有关物质，确保产品的安全性和有效性。
[0017] 在本发明的实施方案中，所述的百分比(％)除特别注明外都是指体积百分比。
[0018] 在本发明的实施方案中所述活性成分为利伐沙班，所述有关物质包括但不限于利 伐沙班的杂质(杂质2、杂质3、杂质5、杂质8、杂质9、杂质10、杂质11、杂质12、杂质14、中间体 Β、中间体C、SM2)。
【附图说明】
[0019] 图1表示的是本发明实施例1的色谱图。
[0020] 图2表示的是本发明实施例2的色谱图。
[0021]
【具体实施方式】： 以下实施例用于说明本发明，但不作为对本发明保护范围的限制。
[0022] 实施例1 仪器和条件
岛津高效液相色谱仪，C18柱(4.6\250臟，5以111)，以缓冲盐溶液(0.01111〇1/1的磷酸氢二 钠水溶液，用磷酸调节pH至6.0)为流动相A，以乙腈作为流动相B，检测波长为250nm，流速 l.Oml/min，柱温30°C，稀释液为乙腈:水（50:50)。进样量为1(^1。按如下梯度程序进行洗 脱： 实脫步骤： 取利伐沙班及各杂质适量，称重，用稀释液超声溶解，配制成每lml中含利伐沙班和利 伐沙班的杂质(杂质2、杂质3、杂质5、杂质8、杂质9、杂质10、杂质11、杂质12、杂质14、中间体 B、中间体C、SM2)各约0.5yg的混合溶液。按上述条件进行高效液相分析，记录色谱图。结果 见图2。
[0023]
1工丄XCCj租眾?Τ I，口本w心丨口 "丄肉反义丁，?Τ本匕恨双wyv j。川〇,且 45min内结束整个有关物质检测，分析时间短，效率高，节约成本，满足中国药典的要求。
[0024] 实施例2 仪器和条件 岛津高效液相色谱仪，C18柱(4.6\250臟，5以111)，以缓冲盐溶液(0.01111〇1/1的磷酸氢二 钠水溶液，用磷酸调节pH至6.0)为流动相A，以乙腈作为流动相B，检测波长为250nm，流速 l.Oml/min，柱温30°C，稀释液为乙腈:水（50:50)。进样量为1(^1。按如下梯度程序进行洗 脱：
实验步骤： 取利伐沙班及各杂质适量，称重，用稀释液超声溶解，配制成每lml中含利伐沙班和利 伐沙班的杂质(杂质2、杂质3、杂质5、杂质8、杂质9、杂质10、杂质11、杂质12、杂质14、中间体 B、中间体C、SM2)各约0.5yg的混合溶液。按上述条件进行高效液相分析，记录色谱图。结果 见图1。
[0025]在上述色谱条件下，利伐沙班的杂质之间分离度好，各杂质理论板数均大于3000， 拖尾因子符合要求，且45min内结束整个有关物质检测，分析时间短，效率高，节约成本，满 足中国药典的要求。
【主权项】
1. 一种利伐沙班及有关物质的高效液相色谱检测方法，其特征在于该方法是采用十八 烷基硅烷键合硅胶为固定相的色谱柱，W缓冲盐水溶液和乙腊为流动相，W紫外检测器为 检测器的高效液相色谱检测方法。2. 根据权利要求1所述的检测方法，其中，所述流动相流速为0.5~1.5ml/min，优选1.0 ml/min。3. 根据权利要求1所述的检测方法，其中，所述紫外检测器的检测波长为220~250nm， 最佳检测波长250nm。4. 根据权利要求1所述的检测方法，其中，色谱柱的溫度为20~45°C，最佳柱溫为30°C。5. 根据权利要求1所述的检测方法，其中，所述缓冲盐水溶液和乙腊体积比例为如下梯 度：优选为，缓冲盐水溶液和乙腊比例优选为如下梯度：6. 根据权利要求1-5中任一权利要求所述的检测方法，其中，所述缓冲盐选自可溶于水 的憐酸金属盐，优选地，选自憐酸的钢盐、或钟盐，更优选地，选自憐酸氨二钟、憐酸二氨钟、 憐酸氨二钢、憐酸二氨钢中的一种或几种;特别优选地，为憐酸氨二钢。7. 根据权利要求1-5中任一权利要求所述的检测方法，其中，所述缓冲盐水溶液的抑范 围为5.0~7.0。8. 根据权利要求7所述的检测方法，其中，所述缓冲盐水溶液为憐酸氨二钢的水溶液， 并且用憐酸将其调节pH值为5.0~7.0。9. 根据权利要求1所述的检测方法，包括如下操作： 取本品（即利伐沙班)适量，称重，用稀释液超声溶解，配成每1ml含利伐沙班0.5mg的样 品溶液，流速为1. OmVml，检测波长为250皿，柱溫30°C ;精密量取样品溶液10山注入液相色 谱仪，完成利伐沙班中活性组分及有关物质检测。
【专利摘要】本发明公开了一种利伐沙班及有关物质测定方法，该检测方法为高效液相色谱法，色谱条件为：以十八烷基硅烷键合硅胶为色谱柱填充剂，以缓冲盐水溶液和乙腈为流动相进行梯度洗脱，以紫外检测器为检测器。采用本发明的方法，可以将利伐沙班与杂质很好的分离，分析时间短、效率高，为利伐沙班有关物质检测提供了简单可靠的方法。
【IPC分类】G01N30/02
【公开号】CN105651871
【申请号】
【发明人】廖兴婷, 谭瑶, 肖玉梅, 胡容, 罗礼平, 于国锋, 张竞, 李宏伟
【申请人】重庆植恩药业有限公司
【公开日】2016年6月8日
【申请日】2015年12月18日