一种裸藻蛋白的制备方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及一种裸藻蛋白的制备方法，属于精细化工领域。
【背景技术】
[0002]裸藻是一种古老的单细胞生物，是同时具有植物和动物两种特征的微细胞藻类，可以在淡水、海水和混合水中生长繁殖。裸藻无细胞壁，胞质裸露，只包附一层内膜起到包裹隔离和内外物质交换的作用。裸藻能够依靠自身表面吸收水中的有机物质，在光照的条件下，能够进行光合作用，在利用(》2的同时释放氧气。
[0003]裸藻蛋白也可称为裸藻活性蛋白，裸藻蛋白是一种光敏蛋白，担负裸藻内能量合成与电子传递、调节细胞活性和免疫功能等功效，尤其是该蛋白对肿瘤细胞具有特殊的亲和力和杀灭作用，使其在肿瘤的临床治疗中有广阔的研究和应用前景。但迄今为止，国内外商未见有关于分离提取裸藻蛋白技术方法的报道。常用食物蛋白提取过程中应用的细胞膜裂解剂、蛋白水解酶及喷雾高燥等试剂与方法，不但操作过程繁琐，而且有可能对裸藻蛋白的结构和活性造成损害，因而不适宜用于裸藻蛋白的分离提取。
【发明内容】
[0004]本发明所要解决的技术问题是提供一种裸藻蛋白的制备方法。
[0005]为解决上述技术问题，本发明所采取的技术方案是，以新鲜裸藻为原料，经过清洗、弱酸溶膜、沉淀蛋白和冷冻干燥干燥等步骤，最后制成裸藻蛋白，主要包括以下工艺步骤:
(1)清洗干燥:将新鲜裸藻先用自来水反复请洗，去掉杂物，再用蒸溜水冲洗至无色清澈后滤干，再进行喷雾干燥；
(2)弱酸溶膜:将上述清洗裸藻加入5-6倍体积、PH值为6.6-6.8、温度为36_39°C的醋酸溶液，浸泡并搅拌2-3小时，使包附裸藻胞质的内膜溶解，胞质充分释放到溶液中；
(3)沉淀蛋白:将上述溶解了裸藻的醋酸溶液，加入盐酸调节PH值为4.8-5.2，使其处于裸藻蛋白等电点范围，静置5-6小时，使裸藻蛋白沉淀，离心后丢弃上清液，收集裸藻蛋白沉淀；
(4)冷冻干燥:将上述收集的裸藻蛋白沉淀置于冷冻干燥机内，冷冻干燥10-12小时，获得干燥裸藻蛋白；
(5)密封包装:将上述干燥裸藻蛋白置于塑料袋中真空密封包装;常温条件下可长期保存。
[0006]本发明的有益效果:
本发明依据裸藻无细胞壁，裸露的胞质表面只包附一层内膜，而且该内膜在中性环境下非常稳定，对电解质的成分和浓度不敏感，但在酸性水体中部稳定等特点，建立了采用弱酸溶膜、沉淀蛋白和冷冻干燥等技术分离提取裸藻蛋白的方法，蛋白测定用考马斯亮蓝法，样品中蛋白含量87%_91%。本发明不仅能很好保持裸藻蛋白的原有生物活性，而且方法简便，易于推广应用。
【具体实施方式】
[0007]下面结合具体实施例对本发明进一步详细说明。
[0008]实施例1
本实施例提供的裸藻蛋白的制备方法，其包括下列内容:
1、清洗干燥:取500g新鲜裸藻用自来水清洗，去掉海水及泥沙杂物，再用300ml蒸馏水冲洗3次，过滤去水，获得清洗后的新鲜裸藻，再进行喷雾干燥。
[0009]2、弱酸溶解:将上述收集的裸藻置于1000ml PH值为6.6的醋酸溶液中浸泡3小时，溶液温度为38°C，每间隔I小时充分搅拌一次。
[0010]3沉淀蛋白:将上述溶解了裸藻溶液，加入盐酸调节PH值为4.8，静置5小时，每分钟1500转离心后丢弃上清液，收集裸藻蛋白沉淀。
[0011]4冷冻干燥:将上述收集的裸藻蛋白沉淀置于冷冻干燥机内，冷冻干燥10小时，获得干燥裸藻蛋白。
[0012]5密封包装:将上述干燥裸藻蛋白置于塑料袋中，在抽真空条件下密封包装。
[0013]实施例2
本实施例提供的裸藻蛋白的制备方法，其包括下列内容:
1、清洗干燥:取500g新鲜裸藻用自来水清洗，去掉海水及泥沙杂物，再用300ml蒸馏水冲洗3次，过滤去水，获得清洗后的新鲜裸藻，再进行喷雾干燥。
[0014]2、弱酸溶解:将上述收集的裸藻置于1000ml PH值为6.8的醋酸溶液中浸泡3小时，溶液温度为39°C，每间隔I小时充分搅拌一次。
[0015]3沉淀蛋白:将上述溶解了裸藻溶液，加入盐酸调节PH值为5.2，静置6小时，每分钟1500转离心后丢弃上清液，收集裸藻蛋白沉淀。
[0016]4冷冻干燥:将上述收集的裸藻蛋白沉淀置于冷冻干燥机内，冷冻干燥12小时，获得干燥裸藻蛋白。
[0017]5密封包装:将上述干燥裸藻蛋白置于塑料袋中，在抽真空条件下密封包装。
[0018]对上述实施例提供的方法制备的蛋白进行检测，用考马斯亮蓝法，样品中蛋白含量达到87%-91%。
[0019]以上所述，仅是本发明的较佳实施例而已，并非是对本发明作其它形式的限制，任何熟悉本专业的技术人员可能利用上述揭示的技术内容加以变更或改型为等同变化的等效实施例。但是凡是未脱离本发明技术方案内容，依据本发明的技术实质对以上实施例所作的任何简单修改、等同变化与改型，仍属于本发明技术方案的保护范围。
【主权项】
1.一种裸藻蛋白的制备方法，其特征在于，包括以下工艺步骤: (1)清洗干燥:将新鲜裸藻先用自来水反复请洗，去掉杂物，再用蒸溜水冲洗至无色清澈后滤干，再进行喷雾干燥； (2)弱酸溶膜:将上述清洗裸藻加入5-6倍体积、PH值为6.6-6.8、温度为36-39 °C的醋酸溶液，浸泡并搅拌2-3小时，使包附裸藻胞质的内膜溶解，胞质充分释放到溶液中； (3)沉淀蛋白:将上述溶解了裸藻的醋酸溶液，加入盐酸调节PH值为4.8-5.2，使其处于裸藻蛋白等电点范围，静置5-6小时，使裸藻蛋白沉淀，离心后丢弃上清液，收集裸藻蛋白沉淀； (4)冷冻干燥:将上述收集的裸藻蛋白沉淀置于冷冻干燥机内，冷冻干燥10-12小时，获得干燥裸藻蛋白； (5)密封包装:将上述干燥裸藻蛋白置于塑料袋中真空密封包装;常温条件下可长期保存。
【专利摘要】本发明公开了一种裸藻蛋白的制备方法，包括以下工艺步骤：（1）清洗干燥；（2）弱酸溶膜；（3）沉淀蛋白；（4）冷冻干燥；（5）密封包装。本发明依据裸藻无细胞壁，裸露的胞质表面只包附一层内膜，而且该内膜在中性环境下非常稳定，对电解质的成分和浓度不敏感，但在酸性水体中部稳定等特点，建立了采用弱酸溶膜、沉淀蛋白和冷冻干燥等技术分离提取裸藻蛋白的方法，本发明不仅能很好保持裸藻蛋白的原有生物活性，而且方法简便，易于推广应用。
【IPC分类】C07K1/30
【公开号】CN105646644
【申请号】
【发明人】张延林, 赵璐, 钟进义
【申请人】北京珍生康业生物科技有限公司
【公开日】2016年6月8日
【申请日】2016年2月22日