一种乌苯美司的合成方法
【专利说明】一种乌苯美司的合成方法
[技术领域]
[0001] 本发明属于药物合成领域，具体涉及一种乌苯美司的合成方法。
[【背景技术】]
[0002] 乌苯美司（Ubenimex，Bestatin)，化学名为 N-[(2S，3R)-3-氨基-2-羟基-4-苯 基丁酰基]-L-亮氨酸，结构式如下所示：
[0003]
[0004] 乌苯美司是从橄榄网状链霉菌属（Streptomycesofivorecticuli)的培养液中分 离得到的二肽化合物，由日本Nippon Kayaku公司研制开发，于1987年首次在日本上市。乌 苯美司是氨肽酶抑制剂，可竞争性地抑制氨肽酶B(aminopeptidaseN/CD13)及亮氨酸肽酶 (Leucineamino-Peptidase)。乌苯美司能增强T细胞的功能，使NK细胞的杀伤活力增强， 能干扰肿瘤细胞的生成和分泌，促进抗肿瘤效应细胞的产生和增殖，用于抗癌化疗、放疗的 辅助治疗，老年性免疫功能缺陷等。也可与其他抗癌药物联合应用，提高急性髓性白血病、 急性髓性白血病、多发性骨髓瘤、骨髓增生异常综合症、恶性黑瘤、胃癌、食道癌等多种肿瘤 的治疗效果。
[0005] 随着临床应用的增加，通过发酵法生产乌苯美司已不能满足市场的需求，因此国 内外进行了许多合成研究，发表了一些合成方法的文献（US4281180, J. of Antibiotics， 1983,36 (6) :659-699,J. Org. Chem. 1989,54(17) :4235-4237, Tetrahedron Letters,1992, 33 (45) :6803-6806, Synthesis,2003,6 :829-836, Tetrahedron Letters,2005,46 (44)： 7581-7582, CN101891647)。这些文献中从（2S，3R)-3-氨基-2-羟基-4-苯基丁酸到最后 乌苯美司的反应路线大多为 ：
[0008] 这些反应的主要缺点是：氨基的保护使用较为昂贵的S-4,6-二甲基嘧啶基-2-硫 代甲酸苄酯，且反应通常要用二氧六环作为溶剂，这个溶剂是难降解有机污染物，被美国环 保署列为B2级（可能的）人类致癌物；脱保护基使用钯炭进行氢化脱保护基，容易在终产 品中带入重金属污染，且对工厂的设备及安全有很高的要求。因此，这条路线不太适合大规 模生产。
[
【发明内容】
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[0009] 乌苯美司具有二肽的化学结构，本身合成较好的方法是两个带保护基的相应氨基 酸缩合后再脱去保护基。以前的文献方法都较复杂，合成路线长，是因为要从头合成二个相 应的氨基酸。目前由于化工供应商已有这两个氨基酸的成熟技术，能提供质量好、数量充足 的产品。因此制药企业合成乌苯美司的步序大大缩短，问题集中在最后两步的二个带保护 基的氨基酸的缩合和脱保护基以及保证产品的化学纯度、光学纯度和杂质的种类和数量。 [0010] 解决上述问题的关键是两个氨基酸保护基的选择，不同的保护基决定了缩合和脱 保护基方法的不同，氨基和羧基的保护基都有多种，选择保护基的原料是易上又易脱，接保 护基、缩合及脱保各步反应收率高，产物化学和光学纯度高，并且要保护基试剂价廉易得。
[0011] 在目前使用的方法中，氨基用苄氧羰基（Cbz)保护，羧基用苄基保护，其中接保护 基、缩合及脱保的收率质量均较好，但脱保护基的方法不理想，用Pd/c氢化。本发明克服了 这一缺点，用叔丁氧羰基（Boc)保护氨基、叔丁基保护羧基，接保护基、缩合及脱保各步反 应收率质量均较好，关键是本发明脱保护基不用Pd/C氢化，而是采用氯化氢，更为简便，成 本更低。
[0012] 本发明乌苯美司合成方法的第一步是氨基保护：
[0013]
[0014] (2S，3R)-3-氨基-2-羟基-4-苯基丁酸溶于丙酮、水、三乙胺中，加入二碳酸二叔 丁酯，室温搅拌。减压蒸去大部分溶剂，用盐酸调酸性，用乙酸乙酯提取。干燥，减压浓缩。 残留物用乙酸乙酯/正己烷结晶，得Boc保护物（3)。
[0015] 本发明乌苯美司合成方法的第二步是缩合：
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[0017] 中间体1溶于二氯甲烷中，加入（3)、H0Bt和三乙胺，0~5°C下滴加 DCC的二氯甲 烷溶液，再室温搅拌。反应毕加稀盐酸破坏残留的DCC，过滤除去固体。滤液用稀碱液及水 洗涤。干燥后减压浓缩，用乙酸乙酯和正己烷结晶，得缩合物（4)。
[0018] 本发明的第三步反应是脱保护基：
[0019]
[0020] 搅拌下将缩合物（4)加入氯化氢的有机溶液中，室温搅拌过夜，析出固体。过滤， 丙酮洗，得到白色固体。溶于水，加活性炭脱色，用浓氨水调pH至5~6,析出白色固体，过 滤水洗。真空干燥，得乌苯美司。
[【具体实施方式】]
[0021] 下面结合实施例，具体说明本发明的内容。但本发明的实施并不局限于下面的实 施例，对本发明所作的形式上的改变或变通都将包括在本发明保护范围内。
[0022] 实施例1 : (2S，3R) -N-Boc-3-氨基-2-羟基-4-苯基丁酸（3)的制备
[0023]
[0024] 向反应瓶中加入3-氨基-2-羟基-4-苯基丁酸39. 0g(0. 2mol)、水200mL、丙酮 400mL，加入三乙胺42mL(0. 3mol)，搅拌使全溶，加入二碳酸二叔丁酯48. 0g(0. 22mol)，室 温搅拌反应。反应液减压浓缩除去大部分溶剂，冷却后用盐酸调至酸性，用乙酸乙酯提取， 无水硫酸钠干燥。
[0025] 滤去干燥剂，减压旋干，残留粘稠状物，加入乙酸乙酯60mL，加热溶解，再加入预热 正己烷360mL，冷却析晶。过滤，乙酸乙酯/正己烷洗涤，烘干，得（3)38g，mp :128-130°C，收 率64%，含量98. 7% (HPLC归一化法）。
[0026] 实施例2，[(23,3?-1^00-3-氨基-2-羟基-4-苯丁酰]-1^亮氨酸叔丁酯的 制备
[0027]
[0028] 向反应瓶中加入Boc保护物（3) 35. 4g (0. 12mol)和二氯甲烷400mL，再加入 L-亮氨酸叔丁酯盐酸盐32. 4g(0. 144mol)、l-羟基苯并三氮唑19. 5g(0. 144mol)、三乙胺 20. 2mL(0. 144mol)，溶解。冷却到0°C，滴入DCC溶液32. lg(0. 156mol)，滴入不久有白色固 体出现，加毕再室温搅拌4小时。加入稀盐酸200mL搅拌20分钟，过滤，滤液用稀氢氧化钠 溶液及水洗涤，无水硫酸钠干燥。
[0029] 滤去固体，滤液减压旋干，残留物用乙酸乙酯60mL加热溶解，加入预热正己烷 300mL，冷却析晶，抽滤，烘干，得（4)49g，收率88%。mp:143-7°C。含量99.4% (HPLC归一 化法）
[0030] 实施例3 :乌苯美司的制备
[0031]
[0032] 向反应瓶中缩合物（4)50g(0. 108mol)，搅拌下加入浓度为4M的氯化氢/丙酮溶液 250mL，立即溶解，随后又析出固体，继续反应过夜。
[0033] 过滤，用丙酮充分浸洗，得白色粉末，干燥得31g。用水620mL溶解，加入适量 活性炭脱色，过滤，滤液用浓氨水调pH = 5~6,析出白色固体，过滤，冰水洗，干燥， 得⑴25. 2g，收率76 %。经HPLC检测，含量99. 68% (归一化法），最大单杂0.05 %。 ([?￡-.15.8 (c = 1. OinO. IN HC1);元素分析：C%= 62. 37, N%= 9. 18, H%= 7. 86,理 论值：C%= 62. 32, N%= 9· 08, H%= 7· 84 ;IR(KBr) :2956、1694、1641、1541cm 1 ;MS-ESI : (M+Na)+ = 330. 2 ^HNMRGOOMHz，DMS0-d6) : δ 8. 05(1H，d)，7· 21 ~7. 33(5H，m)，3· 98(1H， d)，3. 88 (1H，d)，3. 51 (1H，m)，2. 84 ~2. 97 (2H，m)，1. 61 (3H，d)，0· 83 ~0· 87 (6H，m); 13CNMR(500MHz, DMS0-d6) ： δ 174. 9,171. 5,137. 5. 129. 3,128. 3,126. 3,68. 9,55. 2,52. 7, 40. 3,35. 8,24. 6,23. 1,21. 3)。
[0034] 实施例4 :乌苯美司的制备
[0035]
[0036] 向反应瓶中缩合物（4)50g(0. 108mol)，搅拌下加入浓度为7M的氯化氢/乙酸乙酯 溶液250mL，立即溶解，随后又析出固体，继续反应过夜。
[0037] 过滤,用乙酸乙酯充分浸洗，得白色粉末，干燥，得29. 5g。用水600mL溶解，加入 适量活性炭脱色，过滤，滤液用浓氨水调pH = 5~6,析出白色固体，过滤，冰水洗，干燥，得 (1)24. lg，收率 73%。
【主权项】
1. 一种乌苯美司的合成方法，包括W (2S，3R)-3-氨基-2-居基-4-苯基了酸（2)为起 始原料，先与二碳酸二叔了醋生成氨基的Boc保护物（3)，再与k亮氨酸叔了醋缩合得到中 间体（4)，最后在氯化氨的有机溶液中同时脱去氨基上的Boc及駿基上的叔了基得到乌苯 美司（1)。2. 根据权利要求1所述的乌苯美司的合成方法，其特征在于，（2S，3R)-3-氨基-2-居 基-4-苯基了酸（2)上氨基的保护基为叔了氧撰基。3. 根据权利要求1所述的乌苯美司的合成方法，其特征在于，与Boc保护物缩合的是亮 氨酸叔了醋。4. 根据权利要求1所述的乌苯美司的合成方法，其特征在于中间体（4)的脱保护基反 应在氯化氨的有机溶液中进行。5. 根据权利要求2所述的氯化氨有机溶液，其特征在于，所用的有机溶剂包括丙丽、己 酸己醋。6. 根据权利要求3所述的氯化氨有机溶液，其特征在于，所使用的氯化氨溶液浓度范 围为4~7mol/L〇
【专利摘要】本发明属于药物制备领域，提出了一种全新的乌苯美司制备方法。所述的制备方法包括首先将起始原料(2S，3R)-3-氨基-2-羟基-4-苯基丁酸(简称AHPA)上的氨基用二碳酸二叔丁酯保护形成Boc保护物，再与L-亮氨酸叔丁酯缩合，最后在氯化氢的有机溶液中脱去保护基得到乌苯美司。本发明采用的合成路线使用的试剂均为常用试剂，已有工业化生产且价格低廉；反应溶剂均为普通溶剂，毒性低，对环境污染少；各步反应的条件温和，操作简便，不需要特殊的设备，适合进行工业化生产。制得的产品纯度达99.5％以上。
【IPC分类】C07C237/20, C07C231/12
【公开号】CN105646273
【申请号】
【发明人】武卫, 张荣久, 邓雪涛, 吴晓明, 邓银来
【申请人】江苏吴中苏药医药开发有限责任公司
【公开日】2016年6月8日
【申请日】2014年8月21日