一种多囊卵巢动物模型的建立方法及其应用
【技术领域】
[0001]本发明属于医药技术领域，涉及一种动物模型，尤其涉及一种多囊卵巢动物模型的建立方法及其应用。
【背景技术】
[0002]多囊卵巢综合征(Polycystic Ovarian Syndrome, PC0S)是女性代谢异常与生殖内分泌功能障碍相关联的一种特殊疾病。临床表现围绕月经紊乱同时可伴有肥胖、痤疮等症状。病理生理出现了高雄激素血症(睾酮T，雄烯二酮A2.、脱氢表雄酮DHEA)、高黄体生成素(LH)血症、高胰岛素(INS)血症等；PC0S肥胖、胰岛素抵抗，及高胰岛素血症成为2型糖尿病和心脑血管疾病的高危因素。由于PCOS病因的复杂性及异质性，其发病机制的研究仍处于探索之中。遗传和环境因素的相互作用在其发病过程中起重要作用。
[0003]良好的动物模型对于研究PCOS的发病机制至关重要。国内外已建立了多个PCO动物模型，有雄激素(脱氢表雄酮、睾酮或双氢睾酮)诱导、雌激素诱导、胰岛素联合促性腺激素诱导、芳香化酶抑制剂诱导等。但是迄今尚没有一种动物模型可以呈现出PCOS全部的病理生理状态。
[0004]因此，现有技术中由于PCOS发病机制不明确，现有模型大多数仅模拟病理状态，需要经过激素类药物诱导动物出现高雄激素等多囊卵巢病理表现，用于研究药物对病理表现的干预及机制研究，缺少对该疾病如何出现高雄激素等病理特征的机制研究。
[0005]专利CN 1558383公开了一种早老性痴呆大鼠动物模型的构建方法，通过将大鼠置于持续光强度为10?100Lux的光照环境中，光照环境中的时间为I?10周。该类模型可用于研究在AD发病早期或过程中可能的机制以及其之间的内在联系，具体内容包括β -淀粉样蛋白增多及聚集、骨架蛋白TauAD样异常过度磷酸化、神经原纤维缠结样病理变化、蛋白激酶与磷酸酯酶的相对活性失衡及行为异常等，并可以用于筛选治疗早老性痴呆药物、评价治疗早老性痴呆方法以及研究早老性痴呆发病机制的非损伤性大鼠动物模型的构建方法。但该专利不能应用于多囊卵巢综合征中。
[0006]专利CN 101025869公开了一种慢性复合应激动物模型的制备方法，具体操作是，取成年WISTAR大鼠，采用垂直旋转、睡眠剥夺、捆绑和夜间光照4种应激原无规律交替应激动物6周，每天6Η，即制成本发明慢性复合应激动物模型，本动物模型模拟人类所处生存状态产生的应激效应，可用来研究慢性复合应激引起的大鼠学习和记忆能力增强的神经生物学机制。但该专利任不能应用于多囊卵巢综合征中。
【发明内容】
[0007]有鉴于此，本发明提供了一种多囊卵巢动物模型的建立方法。
[0008]为达到上述目的，具体技术方案如下:
[0009]—方面，提供了一种多囊卵巢动物模型的建立方法，包括以下步骤:
[0010]步骤I，将试验用动物至于实验空间；
[0011]步骤2，对动物进行持续光照，并观察动物卵巢是否出现多囊卵巢综合征的病理特征。
[0012]优选的，所述动物为大鼠。
[0013]优选的，所述实验空间包括通风换气、自由进食及饮水的环境。
[0014]优选的，步骤2中包括将实验用光源至于暗室中，通过实验用光源对动物进行持续光照。
[0015]优选的，所述暗室包括支架和设于所述支架上的遮光布帘。
[0016]优选的，所述实验用光源上还设有调控开关。
[0017]优选的，所述步骤2中上持续光照时间为90?120天。
[0018]优选的，所述步骤2中通过每天对动物阴道涂片观察大鼠卵巢周期的变化。
[0019]优选的，所述步骤2中多囊卵巢综合征的病理特征包括阴道上皮持续角化、雄激素性脱发/脱毛、卵巢病理出现多囊样改变、血清检测雄激素水平升高。
[0020]另一方面，提供了多囊卵巢动物模型的建立方法的应用，应用于多囊卵巢综合征形成机理研究、光照致各组织器官损伤机制研究、各种治疗药物对多囊卵巢综合征的治疗疗效及机制研究。
[0021]相对于现有技术，本发明的技术方案通过持续光照成功诱导实验用动物出现PCOS主要的病理特征，建立多囊卵巢动物模型，能够适用于多囊卵巢综合征机制研究及相关病理机制研究和药物疗效研究。
【附图说明】
[0022]构成本发明的一部分的附图用来提供对本发明的进一步理解，本发明的示意性实施例及其说明用于解释本发明，并不构成对本发明的不当限定。在附图中:
[0023]图1是本发明实施例的实验空间的示意图；
[0024]图2是本发明实施例的建立流程示意图。
【具体实施方式】
[0025]下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
[0026]需要说明的是，在不冲突的情况下，本发明中的实施例及实施例中的特征可以相互组合。
[0027]以下将结合附图对本发明的实施例做具体阐释。
[0028]本发明的实施例的一种多囊卵巢动物模型的建立方法，包括:
[0029]首先，如图1中所示，将试验用动物至于实验空间。试验用动物优选为大鼠。其中，实验空间，即清洁级大鼠饲养室，采用大于动物饲养箱的金属空间支架6构造基本结构制作，高效遮光布帘3遮盖支架6，该布帘3即可以起到遮光作用，又不影响动物暗室的透气性。两侧安装静音排风进风扇(图1中所示进风扇1、排风扇2)。空间支架6顶部安装实验用照射光源4，暗室中微电子调控开关5，可以调节光照时间和节律。
[0030]综上，本发明实施例的实验专用可调节光照空间，即动物实验用暗室具有良好的通风换气设备。
[0031]另如图1中所示，光照室制作完成后，利用实验用光源4调节进行每天24小时的持续照射。
[0032]然后，如图2中所示，将造模用大鼠放置于专用实验空间，每日自由进食及饮水，开始造模过程。优选持续光照时间90天。并进行对照组实验对比，对照组采用常规实验室12小时光照、12小时黑暗饲养。
[0033]如图2中所示，在造模期间，每天对大鼠进行阴道涂片，观察大鼠卵巢周期的变化。在本发明的实施例中，造模30天，大鼠开始出现阴道涂片不规则的发情周期。造模90天，90%大鼠出现阴道上皮持续角化(类似PCOS无排卵状态)。此操作在需要用于观察药物对造模周期干预的实验中必须使用，以方便观察药物对卵巢功能的保护作用，以造模结束状态为观察点的实验可以省略此操作。
[0034]此外，造模结束时，大鼠表现出明显的体毛无光泽，及大块区域脱落等现象，类似PCOS尚雄激素性脱发症状。
[0035]同时，90天造模结束时，通过大鼠腹主动脉采血，Elisa检测血清睾酮水平明显较对照组升高。大鼠卵巢病理出现表面白膜增厚，其下有许多不同阶段的卵泡(包括闭锁卵泡)，以及颗粒细胞层减少，类似PCOS卵巢病理表现。
[0036]本发明实施例的动物模型旨在模拟现代生活自然环境，制作出新型的非药物诱导动物模型。由于良好的睡眠为人体内分泌系统各种激素的平衡提供了很重要的基础，而现代文明造就了灯光闪烁的夜晚。因此睡眠时间缩短、昼夜节律紊乱对人体生殖内分泌系统造成不可逆的伤害。本发明实施例的动物模型采用持续光照，模拟睡眠紊乱状态，诱导大鼠出现卵巢功能紊乱。
[0037]本发明实施例的动物模型通过光照成功诱导大鼠出现PCOS主要的病理特征:1)卵巢周期紊乱(阴道上皮持续角化)；2)雄激素性脱发(脱毛)；3)卵巢病理出现多囊样改变；4)血清检测雄激素水平升高。
[0038]本发明实施例的动物模型可以进行以下研究应用:1)多囊卵巢综合征高雄激素血症形成机理研究；2)多囊卵巢综合征下丘脑-垂体-卵巢轴功能紊乱机制研究；3)高雄激素相关代谢、免疫机制研究；4)光照对卵巢功能损伤的机制研究；5)光照致脱发机制研究；6)光照致各组织器官损伤机制研究；7)不同光照时间对内分泌代谢影响的机制研究；8)各种治疗药物对多囊卵巢综合征的治疗疗效及机制研究等。
[0039]以上对本发明的具体实施例进行了详细描述，但其只是作为范例，本发明并不限制于以上描述的具体实施例。对于本领域技术人员而言，任何对本发明进行的等同修改和替代也都在本发明的范畴之中。因此，在不脱离本发明的精神和范围下所作的均等变换和修改，都应涵盖在本发明的范围内。
【主权项】
1.一种多囊卵巢动物模型的建立方法，其特征在于，包括以下步骤: 步骤1，将试验用动物至于实验空间； 步骤2，对动物进行持续光照，并观察动物卵巢是否出现多囊卵巢综合征的病理特征。2.如权利要求1所述的多囊卵巢动物模型的建立方法，其特征在于，所述动物为大鼠。3.如权利要求2所述的多囊卵巢动物模型的建立方法，其特征在于，所述实验空间包括通风换气、自由进食及饮水的环境。4.如权利要求3所述的多囊卵巢动物模型的建立方法，其特征在于，步骤2中包括将实验用光源至于暗室中，通过实验用光源对动物进行持续光照。5.如权利要求4所述的多囊卵巢动物模型的建立方法，其特征在于，所述暗室包括支架和设于所述支架上的遮光布帘。6.如权利要求5所述的多囊卵巢动物模型的建立方法，其特征在于，所述实验用光源上还设有调控开关。7.如权利要求6所述的多囊卵巢动物模型的建立方法，其特征在于，所述步骤2中上持续光照时间为90?120天。8.如权利要求7所述的多囊卵巢动物模型的建立方法，其特征在于，所述步骤2中通过每天对动物阴道涂片观察大鼠卵巢周期的变化。9.如权利要求8所述的多囊卵巢动物模型的建立方法，其特征在于，所述步骤2中多囊卵巢综合征的病理特征包括阴道上皮持续角化、雄激素性脱发/脱毛、卵巢病理出现多囊样改变、血清检测雄激素水平升高。10.如权利要求1所述的多囊卵巢动物模型的建立方法的应用，其特征在于，应用于多囊卵巢综合征形成机理研究、光照致各组织器官损伤机制研究、各种治疗药物对多难卵巢综合征的治疗疗效及机制研究。
【专利摘要】本发明公开了一种多囊卵巢动物模型的建立方法及其应用，包括将试验用动物至于实验空间；对动物进行持续光照，并观察动物卵巢是否出现多囊卵巢综合征的病理特征。本发明的技术方案通过持续光照成功诱导实验用动物出现PCOS主要的病理特征，建立多囊卵巢动物模型，能够适用于多囊卵巢综合征机制研究及相关病理机制研究和药物疗效研究。
【IPC分类】A61B19/00
【公开号】CN105640645
【申请号】
【发明人】贾丽娜, 康学智
【申请人】华东医院
【公开日】2016年6月8日
【申请日】2014年11月26日