药，按以下配方配制注射液 (以Iml量列明配方，但实际配液时批次量为1000ml):格隆溴铵0. 2mg，IN盐酸和/或IN 氢氧化钠适量调节注射液的最终pH值为2. 5,注射用水适量加至Iml。
[0267]按常规的注射液配制方法，制备注射液。在配液时，任选地向注射液中添加适量杂 质Iy，得到具有不同杂质Iy含量的注射液。
[0268] 将这些注射液熔封于Iml棕色玻璃瓶中，将这些注射液密封，在40°C条件下密封、 避光放置4个月，计算在此条件下处置4个月后某杂质相对于该杂质在0月时的含量增加 百分数。
[0269]结果发现，在各种含量情况下，杂质Ix和杂质Iy两者在6个月时相对于其在0月 时的含量增加百分数均低于51%。例如对于实施例1步骤（4)为原料未添加杂质Iy的注 射液，杂质Ix在0月时为0.024%，在6月时为0.031%，杂质Ix含量增加百分数为29% ; 杂质Iy在0月时为0. 021 %，在6月时为0. 028 %，杂质Iy含量增加百分数为33 %。
[0270] 但是对于杂质Iz，其在高温处置4个月后的含量增加百分数却显示与样品中杂质 Iy含量有关：当杂质Iy含量低于0.300%时，杂质Iz含量增加百分数均低于45%;但是当 杂质Iy含量大于〇. 300%时，杂质Iz含量增加百分数显示增加至90%以上，并且样品中杂 质Iy含量越高则杂质Iz含量增加百分数越大。具体结果见表5。
[0271]表5:
[0272]
[0273] 组合物例2：
[0274] 参照组合物例1进行，不同的仅仅是在注射液中补充增加9mg/ml浓度的苯甲醇。 同样照组合物例1中的方法进行40°C 4月处置试验，结果杂质Ix和杂质Iy两者在4个月 时相对于其在〇月时的含量增加百分数均低于47%。但杂质Iz在4个月时相对于其在0 月时的含量增加百分数与表5中相应杂质Iy含量的组配物结果基本相同（均不超过7个 百分点），例如与表5编号9的试样相应的注射液的Iz增加百分数为168%。
[0275] 组合物例3：
[0276] 参照组合物例1进行，不同的仅仅是在投时将使用的实施例1步骤（4)所得格隆 溴铵原料药改为实施例3步骤（3)所得格隆溴铵原料药。同样照组合物例1中的方法进行 40°C 4月处置试验，结果杂质Ix和杂质Iy两者在4个月时相对于其在0月时的含量增加 百分数均低于53%。但杂质Iz在4个月时相对于其在0月时的含量增加百分数与表5中 相应杂质Iy含量的组配物结果基本相同（均不超过5个百分点），例如与表5编号7的试 样相应的注射液的Iz增加百分数为38%。
[0277] 组合物例4：
[0278] 原料药：使用上文实施例1步骤（5)产物、制备例1产物杂质Ix、制备例1产物 杂质Iy、以及市售所得杂质Iz，将它们进行混配，得到具有以下杂质含量的原料药：原料 药 I :RRT0. 89 = 0? 005 %，RRTL 14 = 0? 003 %、RRT2. 68 = 0? 002 % ;原料药 2 :RRT0. 89 = 0? 500%，RRT1. 14 = 0? 300%、RRT2. 68 = 0? 400%;原料药 3 :RRT0. 89 = 0? 250%，RRT1. 14 =0? 150 %、RRT2. 68 = 0? 200 % ;原料药 4 :RRT0. 89 = 0? 450 %，RRTL 14 = 0? 185 %、 RRT2. 68 = 0? 330 % ;原料药 5 :RRT0. 89 = 0? 224 %，RRTL 14 = 0? 125 %、RRT2. 68 = 0? 255%〇
[0279]参照组合物例1进行，不同的仅仅是在投时将使用的实施例1步骤（4)所得格隆 溴铵原料药改为以上原料药1、原料药2、原料药3、原料药4、原料药5,得到5批组合物，为 格隆溴铵注射液。对这些格隆溴铵注射液同样照组合物例1中的方法进行40°C 4月处置试 验，结果杂质Ix、杂质Iy、杂质Iz三者在4个月时相对于其在0月时的含量增加百分数均 低于48%。
[0280]参照组合物例2进行，不同的仅仅是在投时将使用的实施例1步骤（4)所得格隆 溴铵原料药改为以上原料药1、原料药2、原料药3、原料药4、原料药5,得到5批组合物，为 格隆溴铵注射液。对这些格隆溴铵注射液同样照组合物例1中的方法进行40°C 4月处置试 验，结果杂质Ix、杂质Iy、杂质Iz三者在4个月时相对于其在0月时的含量增加百分数均 低于45%。
[0281] 以上这些组合物经测试，其中杂质Iy含量最低的为0. 003%，杂质Iz含量最低的 为0.002%。显然，就本发明组合物而言，其中杂质Iy相对于格隆溴铵而言含量低于0.75% (例如低于〇. 50%、低于0. 4%、低于0. 3% )是有益的，例如Iy杂质含量（相对于格隆溴 铵计）在0? 003%~0? 750%范围内（例如在0? 003%~0? 500%范围内、例如在0? 003%~ 0.400%范围内、例如在0.003%~0.300%范围内）是有益的。
[0282] 以上这些制备的可作为制剂特别是注射液的格隆溴铵组合物经测试，其中杂质Ix 含量最低的试样为〇. 005%，杂质Iy含量最低的试样为0. 003%，杂质Iz含量最低的试样 为0.002%。显然，就本发明组合物而言，其中杂质Iy相对于格隆溴铵而言含量低于0.75% (例如低于〇. 50%、低于0. 4%、低于0. 3% )是有益的，例如Iy杂质含量（相对于格隆溴 铵计）在0? 003%~0? 750%范围内（例如在0? 003%~0? 500%范围内、例如在0? 003%~ 0.400%范围内、例如在0.003%~0.300%范围内）是有益的。已经测试上述可作为制剂 特别是注射液的格隆溴铵组合物对于它们杂质Iy相对于格隆溴铵而言含量低于0. 300% 的试样，它们的杂质Ix相对于格隆溴铵而言含量均低于0. 5%，它们的杂质Iz相对于格 隆溴铵而言含量均低于0.400%。一一即对于可作为本发明的格隆溴铵组合物而言，作为 本发明的一个实施方案，本发明的格隆溴铵组合物中，杂质Ix相对于格隆溴铵而言含量在 0. 005%~0. 500%范围内，杂质Iy相对于格隆溴铵而言含量在0. 003%~0. 300%范围内， 杂质Iz相对于格隆溴铵而言含量在0. 002%~0. 400%范围内，具有这些特点的格隆溴铵 组合物是本发明优选的。
[0283] 试验例3 :牛物学试验
[0284] 本试验例考察相关物质对小鼠血液中的中性粒细胞的影响。
[0285] (1)动物：BALB/c小鼠，雌性6~8周龄。
[0286] (2)试药：使用本发明实施例1步骤（5)所得格隆溴铵对照品、制备例1所得杂质 Ix、制备例2所得杂质Iy、市售杂质Iz、它们的混配物进行测试，使用0. 9%生理盐水配制成 适宜浓度的无菌溶液。
[0287] (3)分组：小鼠随机分组，每组10只；具体组别如下：a)对照组：注射与各给药组 等体积的生理盐水；b)格隆溴铵组：实施例1步骤（5)所得格隆溴铵对照品；c)杂质Ix组； d)杂质Iy组；e)杂质Iz组；f)格隆溴铵/杂质Iz混配组（含0. 230%的Iz和余量的格 隆溴铵）；g)格隆溴铵/杂质Iz混配组（含0. 400%的Iz和余量的格隆溴铵）；h)格隆溴 铵/杂质Iz混配组（含0. 750%的Iz和余量的格隆溴铵）；i)格隆溴铵/杂质Iz混配组 (含1. 50%的Iz和余量的格隆溴铵）；j)格隆溴铵/杂质Iz混配组（含5. 0%的Iz和余 量的格隆溴铵）；k)格隆溴铵/杂质Iz混配组（含10.0%的Iz和余量的格隆溴铵）；1) 格隆溴铵/杂质Iz混配组（含25. 0%的Iz和余量的格隆溴铵）；m)格隆溴铵/杂质Iz混 配组（含50. 0%的Iz和余量的格隆溴铵）。
[0288] (4)剂量、给药、方法：各动物在给药前至少饲养48小时，于-24小时、0小时时眼 眶取血，按常规细胞计数法（使用美国Coulter公司生产的血常规自动分析仪测定）对中 性粒细胞计数，计算每组动物在每个时间点的中性粒细胞数均值（该均值在以下可简写为 PNG，0小时的该均值可简写为PNG0)，对于每组动物，-24小时与0小时两个时间点的PNG相 差不超过3%。分别于0小时、24小时、48小时经腹腔注射给予各组试药3次，每次给予总 化合物量（以格隆溴铵、杂质lx、杂质Iy、杂质Iz、或其总和计）50 ymol/kg动物体重，例如 对于m)格隆溴铵/杂质Iz混配组，Iz和格隆溴铵的总和计50 ymol/kg动物体重的剂量。 在第54小时（即末次给药后6小时）各动物眼眶取血，按常规细胞计数法对中性粒细胞计 数，计算每组动物在第54小时时的中性粒细胞数均值（该均值简写为PNG56)。
[0289] (5)结果计算：按下式计算每组动物的中性粒细胞相对数：
[0290]中性粒细胞相对数（％ ) = (PNG56 + PNG0) X100%
[0291] 以上中性粒细胞相对数反映外周血中中性粒细胞的变化情况，该参数越接近于 100 %表明血液中的中性粒细胞变化越小，该参数低于100 %时，数值越低则表明中性粒细 胞减少越多，该参数大于1〇〇 %时表明中性粒细胞增加。结果见表6。
[0292]表 6:
[0293]
[0294] 对于e)组，中性粒细胞计数由第0小时时的4530个/ y L，降低至第54小时时的 70个/ y L。对于Iz含量低于0. 4%组配物，血液中的中性粒细胞数基本没有变化，但是当 Iz含量大于等于〇. 75%时，血液中的中性粒细胞数急剧降低，这对于受试者维持正常的机 体功能特别是正常的免疫功能是极为不利的。
[0295]试验例4:牛物学试验
[0296] 照 B. V. Franko 等人的文献（B. V. Franko et al.，Toxicol. Appl. Pharmacol. 17, 361(1970))中记载的方法，测定本发明实施例1步骤（4)的所得格隆溴铵以 及杂质Iz的半数致死量（LD50值，小鼠，i.p.给药，72hr)，以考察相关物质对小鼠的急性 毒性。结果格隆溴铵的LD50 = 136mg/kg，杂质Iz的LD50 = 17mg/kg，显示杂质Iz的安全 性远比格隆溴铵差。
[0297] 产业话用件
[0298] 本发明提供的格隆溴铵原料药或制剂，作为一种抗胆碱能药，在临床上可用于麻 醉、消化性溃疡、流涎等。该原料药或制剂具有抑制胃液分泌及调节胃肠蠕动作用；具有比 阿托品更强的抗唾液分泌作用，但没有中枢性抗胆碱活性。临床上通常用于胃及十二指肠 溃疡、慢性胃炎、胃酸分泌过多等症。
【主权项】
1. 一种供药用的原料药，该原料药的活性成分为格隆溴铵即以下式I化合物：及其对映体；该原料药中还包括作为杂质的下式Iy杂质：所述Iy杂质相对于格隆溴铵而言含量在〇. 003%~0. 130%范围内； 该原料药中还包括作为杂质的以下式Iz杂质：所述Iz杂质相对于格隆溴铵而言含量在0. 002%~0. 500%范围内。2. 根据权利要求1的原料药，其中包括作为主要组分的式I化合物及其对映体，以及任 选的作为杂质的以下式Ix杂质：及其对映体；进一步地，Ix杂质相对于格隆溴铵而言含量低于〇. 5%，例如 低于0. 4%，例如低于0. 3%。3. 根据权利要求1的原料药，其中Iz杂质相对于格隆溴铵而言含量在0.002%~ 0.400%范围内，例如低于0. 30%，例如低于0. 25%，例如低于0. 20%，例如低于0. 15%，例 如低于0. 13%。4. 根据权利要求1-3任一项的原料药，其在40°C条件下密封、避光放置6个月，计算在 此条件下处置6个月后某杂质相对于0月时的含量增加百分数，其中杂质Iz含量增加百分 数低于50 %，例如低于40 %。5. -种药物组合物，其中包含权利要求1-4任一项所述的原料药，以及任选的药学可 接受的载体或辅料；进一步地，其是口服制剂或者注射制剂；进一步地，其是片剂、胶囊剂、 颗粒剂、注射液、冷冻干燥粉针剂、混悬剂、或丸剂；进一步地，其是注射液，该注射液每1ml 中包含：0. 1~0. 5mg的格隆溴铵、酸碱调节剂适量以调节注射液的pH值在2. O~3. O范 围内、和加至全量的注射用水。6. 根据权利要求5的药物组合物，其是注射液，其中还包含苯甲醇，例如苯甲醇浓度为 0. 5~1. 5mg/ml，例如该注射液中的苯甲醇浓度为0. 7~1. 2mg/ml，例如该注射液中的苯甲 醇浓度为〇. 8~1.0 mg/ml，例如该注射液中的苯甲醇浓度为0. 9mg/ml。7. 根据权利要求5的药物组合物，其是冷冻干燥粉针剂，该粉针剂中包含：0. 2重量份 的格隆溴铵、20~400重量份的冻干赋形剂；例如，该粉针剂中包含：0. 2重量份的格隆溴 铵、20~400重量份的冻干赋形剂、任选的pH调节剂适量以使该粉针剂用注射用水稀释至 格隆溴铵浓度为0. 2mg/ml时溶液的pH值在2. 0~3. 0范围内。8. 根据权利要求5至7任一项的药物组合物，其中包括作为活性组分的格隆溴铵，以及 作为杂质的Ix杂质；其中Ix杂质相对于格隆溴铵而言含量低于1.0%，例如低于0.75%， 例如低于〇. 5%，例如低于0. 4%。9. 根据权利要求5至7任一项的药物组合物，其特征在于： 其中包括作为活性组分的格隆溴铵，以及作为杂质的Iy杂质；其中Iy杂质相对于格隆 溴铵而言含量在0.003%~0.300%范围内；和/或 其中包括作为活性组分的格隆溴铵，以及作为杂质的Iz杂质；其中Iz杂质相对于格隆 溴铵而言含量低于I. 00%，例如低于0. 75%，例如低于0. 50%，例如低于0. 4%。10. 根据权利要求5至7任一项的药物组合物，其在40°C条件下密封、避光放置4个月， 计算在此条件下处置4个月后某杂质相对于0月时的含量增加百分数，其中杂质Iz含量增 加百分数低于50%，例如低于40%。
【专利摘要】本发明涉及抗胆碱药物格隆溴铵及组合物。具体地说，本发明涉及一种可用于制药的药物，其中包含下式化合物。本发明还提供了该药物的制剂，它们作为一种抗胆碱能药，在临床上可用于麻醉、消化性溃疡、流涎等。该原料药或制剂具有抑制胃液分泌及调节胃肠蠕动作用；具有比阿托品更强的抗唾液分泌作用，但没有中枢性抗胆碱活性。临床上通常用于胃及十二指肠溃疡、慢性胃炎、胃酸分泌过多等症。及其对映体。
【IPC分类】A61P23/00, A61K31/40, C07D207/12, A61P1/04
【公开号】CN105175304
【申请号】
【发明人】李兴惠
【申请人】李兴惠
【公开日】2015年12月23日
【申请日】2013年11月13日