一种二萜类化合物及其制备方法与应用
【技术领域】
[0001] 本发明属于植物有效成分提取技术领域，具体涉及一种二萜类化合物及其制备方 法与应用。
【背景技术】
[0002] 橡木属植物（JraJia)全世界共有40余种，主要分布在亚洲和北美，我国有28 种，其中20种可供药用，分布几乎遍布全国，资源丰富。该属植物主要以根、根皮入药， 有祛风除湿，利尿消肿，活血止痛的作用。用于肝炎，淋巴结肿大，肾炎水肿，糖尿病，白 带，胃痛，风湿关节痛，腰腿痛，跌打损伤。对橡木属植物的化学成分及药理研究主要集中 在辽东橡木 eJate (Miq. )Seem.)、黄毛橡木 ofecaisfleana Hance.)、棘莖橡木 ecAiflocaWis Hand.-Mazz.)、龙眼独活 Franch.)、东北土当归 Kitag.)、食用土当归〇4. cart/ateThunb.)等（郑玲玲，裴凌鹏.橡木属 植物研究进展[J].中国民族医药杂志，2010，6 (6): 57-59)。目前从橡木属植物中已 分离出二萜、三萜皂苷、脂肪油、有机酸、香豆素、黄酮、聚炔烯、木脂素、留醇等单体化合物 数百种。药理研究表明该属植物有抗炎、抗菌、抗肿瘤、降血糖、调节血脂、保护肝脏及保护 心血管等作用。
[0003] 黑果土当归（Arabia Hand.-Mazz)在云南称"牛角七"，"白九股牛"， "蜜油参"。民间以根入药，入脾、胃二经。中草药，2001，32(9) :847-850)报道，该植物有补 中益气、托毒外出、消炎的功效，用于淋巴腺炎、慢性化脓性骨髓炎和疖痈等症。目前对黑果 土当归植物化学成分以及药理活性的研究报道较少。本发明试图对黑果土当归中二萜类化 合物的抗肿瘤作用做进一步深入研究，以期发现其中的细胞毒活性天然产物，为筛选高效、 低毒的抗肿瘤药物提供依据。
【发明内容】
[0004] 本发明的第一目的是提供一种二萜类化合物；第二目的在于提供所述二萜类化合 物的制备方法；第三目的在于提供所述二萜类化合物的应用。
[0005] 本发明的第一目的是这样实现的，所述的二萜类化合物是以黑果土当归根为原 料，经浸膏提取、有机溶剂萃取、硅胶柱层析、高压液相色谱分离得到的，该化合物分子式为 C 20H28O2，命名为对映-6,8(14)，15-海松三烯酸（￡Wi-pimar-6, 8 (14)，15- trien-19-oic acid)，具有下述结构式：
[0006] 本发明的第二目的是这样实现的，是以黑果土当归根为原料，经浸膏提取、有机溶 剂萃取、硅胶柱层析、高压液相色谱分离获得，具体为： A、 浸膏提取：将黑果土当归根晾干粉碎得到0. 05~0. 15cm粒径大小的颗粒，加入黑果 土当归根重量比4~8倍的体积百分浓度80~95%乙醇溶液于65~74°C下回流提取3~5次，每 次l~3h，合并提取液，提取液过滤，减压浓缩提取液至比重为I. 1~1. 3得到浸膏a ; B、 有机溶剂萃取：浸霄a中加入重量比2~4倍量的水，依次用与水等体积的石油醚、乙 酸乙酯和正丁醇溶剂进行萃取，每种溶剂萃取4~6次，蒸去溶剂分别得到石油醚萃取物b、 乙酸乙酯萃取物c和正丁醇萃取物d ; C、 硅胶柱层析：将石油醚萃取物b上硅胶柱，装柱硅胶为100~200目，用量为萃取物b 重量6~8倍量；用体积比为25:1~0:1的石油醚-乙酸乙酯有机溶剂梯度洗脱，收集梯度洗 脱液、浓缩，经TLC监测，合并相同的部分； D、 高效液相色谱分离：将C步骤中以2:1配比的石油醚-乙酸乙酯有机溶剂进行 洗脱得到的洗脱液采用半制备高效液相色谱仪分离纯化，即得所述的二萜类化合物对 映-6, 8 (14)，15-海松三稀酸（￡>/?卜pimar-6, 8 (14)，15-trien-19-oicacid) 〇
[0007] 本发明二萜类化合物是首次被分离出来的，通过核磁共振和其他波谱技术测定方 法确定为二萜类化合物，并表征其具体结构为：
化合物对映 _6, 8 (14)，15-海松三稀酸（e/^-pima;r-6, 8 (14)，15- trien-19-oic acid)，为白色无定型粉末（溶剂为氯仿），-48. 0° (c 0. 11, CHCl3) ; IR (KBr) 谱在3245-2500，1708，1636，910，863 cm1有吸收，表明分子中存在羧基、羟基和双键。 HRESI-MS 谱显示其准分子离子峰 m/z 299. 2020 [M-H] (calcd. 299. 2011)，结合 NMR 谱 确定其分子式为CmH28O2，不饱和度为7。1H NMR(附图1，数据归属见表1)显示分子中有3 个甲基单峰，分别为Sh 1.32 (3H，s)，1.07 (3H，s)及0.61 (3H，s))，有1个单取 代双键信号（S 5.71 (1H, /= 17.6，10.4 Hz, H-15), 4.96 (1H, /= 10.4， 2.0 Hz, H-16a), 4.86 (1H, /= 17.6，2.0 Hz, H-16b))，有 1 个三取代双键信号 (S 5.23 (1H，& H-14))，有 1 个顺式二取代双键信号（S 6.07 (1H，也 /= 11.2， 2.4 Hz，H-6)，6.03 (1H，/=11.2Hz，H-7));13CNMR(附图 2,数据归属见表 1) 显示分子中有20个碳，其中有5个季碳（含1个羧基碳和1个烯碳），6个次甲基（含4个 烯碳），6个亚甲基（含1个烯碳）及3个甲基。结合HSQC相关谱（附图3)，并对比文献 数据可证实，该化合物与已知化合物ent-pimar-8(14), 15 - 19-oic acid结构相似，区 别在于分子中多了 1个双键（Sc 127. 4及128. 2)，少了 2个亚甲基（Sc 24. 3及36. 5); 在 HMBC 谱（附图 6)中可看到 H-6 ( S 6. 07)与 C-5 ( S 55. 5)有相关，H-7 ( S 6. 03) 与C-8 ( S 135. 9)有相关，证实C-6及C-7位为一双键。进一步经HMBC相关（附图4)、 COSY 相关（附图 5)和 ROESY (附图 6)及与文献（Kang 0? H. ; Chae H. S. ; Choi J. G. ; Oh Y. C. ; Lee Y. S. ; Kim J. H. ; Seung M. J. ; Jang H. J. ; Lee J. H. ; Shin D. H. ; Kwon D. Y. EuropeanJournalofPharmacology,2008，601，179-185)对比证实，使化合物的结构 最终得到确认，化合物具有下述结构式：
通过SCIFINDER数据库检索和文献查询证实该化合物为新化合物。
[0008] 表1 本发明化合物的1H-和13C-NMR (CDCl3)数据
本发明的第三目的是这样实现的，所述的二萜类化合物在制备预防和/或治疗肿瘤药 物中的应用。
[0009] 所述的二萜类化合物在制备预防和/或治疗人肺腺癌、人前列腺癌或人急性髓系 白血病药物中的应用。
[0010] 本发明所述的二萜类化合物进行了细胞毒活性测试，实验结果显示出良好的抑制 人肺腺癌、人前列腺癌及人急性髓系白血病细胞株活性，可为医用工业提供有应用价值的 新化合物或先导化合物。
[0011] 本发明的优点： 1、本发明中的二萜类化合物对人肺腺癌、人前列腺癌或人急性髓系白血病细胞株有显 著的抑制作用，提示其具有良好的抗癌活性，可以作为抗癌活性成分或先导化合物。
[0012] 2、本发明中的二萜类化合物可为天然存在的有机化合物，原料来源广泛，并且化 合物制备操作流程简单，所获得的化合物纯度高，随后的工业化生产易实现。
【附图说明】
[0013] 图1是本发明化合物的核磁共振氢谱（1H NMR); 图2是本发明化合物的核磁共振碳谱（13C NMR); 图3是本发明化合物的HSQC相关谱； 图4是本发明化合物的HMBC相关谱； 图5是本发明化合物的COSY相关谱； 图6是本发明化合物的ROESY相关谱。
【具体实施方式】
[0014] 下面结合实施例和附图对本发明作进一步的说明，但不以任何方式对本发明加以 限制，基于本发明教导所作的任何变换或改进，均落入本发明的保护范围。
[0015] 本发明所述的二萜类化合物，是以黑果土当归根为原料，经浸膏提取、有机溶 剂萃取、硅胶柱层析、高压液相色谱分离得到的，该化合物分子式为CmH28O2，命名为对 映-6,8(14),15-海松三稀酸（ei?卜 pimar-6, 8(14)，15- trien_19-〇ic acid)，具有下述结 构式：
[0016] 本发明所述的二萜类化合物的制备方法，是以黑果土当归根为原料，经浸膏提取、 有机溶剂萃取、硅胶柱层析、高压液相色谱分离获得，具体为： A、 浸膏提取：将黑果土当归根晾干粉碎得到0. 05~0. 15cm粒径大小的颗粒，加入黑果 土当归根重量比