,37°C，振荡 10min，于550nm波长下测定每孔的吸光度值，用于反映细胞的增殖状况，以矫正细胞数目 差异引起的葡萄糖吸收差异。最后计算各组葡萄糖消耗量相对于模型组消耗量的百分比。
[0026] 结果见图1，五味子甲素组，二甲双胍组及五味子甲素与二甲双胍的组合物作用于 胰岛素抵抗的BNL CL. 2细胞24小时后均可增加细胞的葡萄糖消耗量，经t检验，与模型组 比较具有统计学差异。且ImM二甲双胍与10 UM五味子甲素组合物的增加细胞葡萄糖消耗 量效果显著优于五味子甲素和二甲双胍组（P〈〇. 001)。组合物组增加的细胞葡萄糖消耗量 大于二甲双胍组和五味子甲素组增加的葡萄糖消耗量总和，证明二甲双胍和五味子甲素组 合产生协同作用。
[0027] 实施例2
[0028] 小鼠胚胎肝细胞BNL CL. 2用含10%胎牛血清的低糖型DMEM培养基于37°C、5% C02细胞培养箱中孵育，隔天更换新鲜培养液。待细胞生长至80-90%时，弃去培养液，加入 31^?83润洗一次，加入11^0.05%胰蛋白酶40了4溶液消化约21^11，加入三倍量培养液 终止消化，将细胞液900r/min离心5min，弃去上清液，加入一定量培养液，将细胞吹散，取 10 y L计数，将BNL CL. 2细胞接种于96孔板，每孔2万细胞，并设无细胞空白对照孔。培养 24小时后，弃去原培养基，用磷酸盐缓冲液（PBS)洗一遍，换上无血清无酚红的低糖DMEM培 养液，分组加受试药。
[0029] 设空白对照组（加入正常细胞培养液100yL)，模型组（加入含liiM的胰岛素 的细胞培养液100 y L)，五味子甲素组（加入含1 yM的胰岛素及5 yM的五味子甲素的细 胞培养液100 yL)，二甲双胍组（加入含lyM的胰岛素及2mM的二甲双胍的细胞培养液 100 yL)，以及五味子甲素与二甲双胍的组合物组（加入含1 yM的胰岛素及含有5 yM五味 子甲素+2mM二甲双胍的细胞培养液100 y L)。作用24小时后，用葡萄糖氧化酶法测定每孔 培养液的葡萄糖含量，即每孔取5 y L培养液于另一 96孔板中，加入200 y L葡萄糖氧化酶 测试液，37°C孵育30min，于492nm波长下测定每孔吸光度。在0-10mm〇l/L浓度范围内按标 准曲线法计算每孔葡萄糖含量。每孔葡萄糖消耗量=无细胞空白孔培养液葡萄糖含量-每 孔培养液葡萄糖含量，每组设3个或3个以上复孔，相同实验重复3次。
[0030] 葡萄糖含量测定后，原培养孔弃去原培养液，每孔加入含有0. 5mg/mL MTT溶液的 培养液，于37°C、5% C02的条件下孵育4h。弃去上清液，每孔加入100 y 1 DMS0, 37°C，振荡 10min，于550nm波长下测定每孔的吸光度值，用于反映细胞的增殖状况，以矫正细胞数目 差异引起的葡萄糖吸收差异。最后计算各组葡萄糖消耗量相对于模型组消耗量的百分比。
[0031] 结果见图2,5yM五味子甲素，2mM二甲双胍作用于胰岛素抵抗的BNL CL.2细胞 24小时后均可增加葡萄糖消耗量，经t检验，与模型组比较具有统计学差异。2mM二甲双胍 与5 iiM五味子甲素组合物的增加葡萄糖消耗量效果显著优于5 iiM五味子甲素和2mM二甲 双胍。而且，组合物组增加的细胞葡萄糖消耗量大于2mM二甲双胍和5 y M五味子甲素组增 加的细胞葡萄糖消耗量总和，证明二甲双胍和五味子甲素组合产生协同作用。
[0032] 实施例3
[0033] 盐酸二甲双胍与五味子甲素组合物片剂制备
[0034] 五味子甲素 80g 盐酸二甲双胍 250g 2%羟丙甲基纤维素溶液 适量 微晶纤维素 260g 低取代甲基纤维素 6g 硬脂酸镁 4g
[0035] 制备工艺：将处方中微晶纤维素和低取代甲基纤维素过80目筛，称量处方量的五 味子甲素、盐酸二甲双胍与微晶纤维素和低取代甲基纤维素混合均匀，加入2%羟丙甲基纤 维素溶液适量制粒，干燥，整粒，加入处方量的硬脂酸镁混匀，压片，即得1〇〇〇片。
[0036] 实施例4
[0037] 盐酸二甲双胍与五味子甲素组合物片剂制备
[0038] 五味子甲素 160g 盐酸二甲双胍 500g 2%羟丙甲基纤维素溶液 适量 微晶纤维素 230g 低取代甲基纤维素 6g 硬脂酸镁 4g
[0039] 制备工艺：将处方中微晶纤维素和低取代甲基纤维素过80目筛，称量处方量的五 味子甲素、盐酸二甲双胍与微晶纤维素和低取代甲基纤维素混合均匀，加入2%羟丙甲基纤 维素溶液适量制粒，干燥，整粒，加入处方量的硬脂酸镁混匀，压片，即得1〇〇〇片。
[0040] 实施例5
[0041] 盐酸二甲双胍与五味子甲素组合物胶囊剂制备
[0042] 五味子甲素 SO_g 盐酸二甲双狐 250g 微晶纤维素 290g 交联羧甲基纤维素钠 16 g 微粉硅胶 60 g 硬脂酸镁 4g 5%聚乙烯吡咯烷酮水溶液：适量：
[0043] 制备工艺：将处方中微晶纤维素和辅料分别过80目筛，称量处方量的五味子甲 素、盐酸二甲双胍与各辅料混合均匀后，加入5%聚乙烯吡咯烷酮水溶液制软材，制粒，干 燥，整粒、加入滑石粉，混匀，填装胶囊即得1000粒。
[0044] 实施例6
[0045] 盐酸二甲双胍与五味子甲素组合物胶囊剂制备
[0046] 五味子甲素 160g 盐酸二甲双胍 500g 微晶纤维素 260g 交联羧甲基纤维素钠 16 g 微粉硅胶 60 g 硬脂酸镁 4g g 5%聚乙烯吡略烷酮水溶液 适量
[0047] 制备工艺：将处方中微晶纤维素和辅料分别过80目筛，称量处方量的五味子甲 素、盐酸二甲双胍与各辅料混合均匀后，加入5%聚乙烯吡咯烷酮水溶液制软材，制粒，干 燥，整粒、加入滑石粉，混匀，填装胶囊即得1000粒。
【主权项】
1. 一种治疗糖尿病的药物组合物，其特征在于，包含作为有效成分的二甲双胍或其可 药用盐和五味子甲素。2. 如权利要求1所述的药物组合物，其特征在于，所述的二甲双胍可药用盐为盐酸二 甲双胍和硫酸二甲双胍中的一种。3. 如权利要求1所述的药物组合物，其特征在于，所述二甲双胍或其可药用盐以二甲 双胍计与五味子甲素的浓度比为100:1~400:1。4. 如权利要求1所述的药物组合物，其特征在于，所述二甲双胍或其可药用盐以二甲 双胍计的浓度为ImM~2mM。5. 如权利要求1所述的药物组合物，其特征在于，所述五味子甲素的浓度为5yM~ 10 yM〇6. 如权利要求1所述的药物组合物，其特征在于，包括可药用辅料。7. 如权利要求1所述的药物组合物，其特征在于，所述药物组合物为口服给药的剂型。8. 如权利要求7所述的药物组合物，其特征在于，所述口服给药的剂型为溶液剂、片 剂、胶囊剂或颗粒剂。
【专利摘要】本发明公开了一种治疗糖尿病的药物组合物，以二甲双胍或其可药用盐和五味子甲素为有效成分。利用该药物组合物可显著改善胰岛素抵抗，增加胰岛素抵抗肝细胞的葡萄糖吸收，其效果显著优于任意单一成分。
【IPC分类】A61K31/09, A61P3/10, A61K31/155
【公开号】CN105168195
【申请号】
【发明人】程翼宇, 范骁辉, 王毅
【申请人】浙江大学
【公开日】2015年12月23日
【申请日】2015年9月30日