专利名称:与dickkopf-1或dickkopf-4或两者的结合分子的组合物及使用方法
与DICKK0PF-1或DICKK0PF-4或两者的结合分子的组合物
及使用方法
发明背景
Wnt信号传导通路涉及对胚胎发育和致瘤性过程的控制。胞外Wnt蛋白负责胚胎发生过程中的多种细胞类型的生长和分化，并对许多癌症的发展有贡献。
存在至少两个抑制Wnt信号传导的蛋白质家族，即分泌性frizzled相关家族和 Dickkopf(DKK)家族。DKK家族目前含有四个家族成员，即DKKl(人DNA登录号NM_012242 ； PRT 登录号094907)、DKK2 (人登录号ΝΜ_014421 ；PRT 登录号NP_055236)、DKK3 (人登录号NM_015881 ；PRT 登录号AAQ88744)，和 DKK4 (人登录号NM_014420 ；PRT 登录号 NP_055235)。
Dickkopf-I (DKKl)是Wnt/β-catenin信号传导通路的分泌性抑制剂。参见例如 Niehrs 的 PCT 公开号 W09922000 ；McCarthy 的 W09846755 ；Shulok 等人的 W02007/084344。 DKKl具有抑制Wnt诱导的轴复制(axis duplication)的能力，遗传分析表示DKKl在上游作用来抑制Wnt信号传导。DKKl与LRP6拮抗性的相互作用，阻断Wnt介导的信号激活。参见例如Mao等人，2001Nature 411:321。DKKl还在脂肪生成、软骨发生、胃肠道上皮增殖的增殖、骨丢失相关性风湿病，和启动毛囊基板形成中发挥作用。参见Online Mendelian Inheritance 中的 Man ( “0MIM，，)登录号 6O5I890
Dickkopf-4 (DKK4)表征较差，但也是Wnt通路的分泌性抑制剂。DKK4表现出沉积在患阿兹海默氏病的斑块中，并在肌肉、小脑、T细胞、食管和肺中表达。参见OMIM登录号 605417。
对治疗癌症、骨密度异常和代谢紊乱的组合物和方法存在需要，包括干扰或中和 DKKl和/或DKK4介导的对Wnt信号传导的拮抗作用的此类活性剂。
Wnt蛋白在细胞发育中发挥重要作用，并已知调控脂肪生成。WntlOb过表达的ob/ ob和agouti小鼠具有显著更少的脂肪组织，并且更耐受葡萄糖和对胰岛素敏感。
发明概述
本发明涉及特异性针对Dickkopf-I (DKKl)、Dickkopf-4 (DKK4)或两者(其中，对 DKKl或DKK4或两者的特异性在本文中称为“DKK1/4”)的结合分子的组合物以及使用方法， 用于治疗与DKK1/4相关的骨、骨密度、代谢、糖尿病、癌症等的异常。
本发明的实施方案在本文中提供了选择性结合和中和DKKl和/或DKK4多肽或其片段的结合分子或其抗原结合部分，及其在治疗疾病中的用途。
在某些实施方案中，本发明提供了治疗与DKKl和/或DKK4(DKKl/4)的表达相关的病症或病况的方法。DKKl或DKK4相关性疾病包括但不限于骨髓瘤(包括多发性骨髓瘤、 重要性不明的单克隆丙种球蛋白病(MGUS)或良性单克隆丙种球蛋白病、平台型(plateau) 和郁积型(smoldering)骨髓瘤)；恶性纤维状组织细胞增多症(MFH)(也称为高度未分化多形性肉瘤)；神经母细胞瘤；β地中海贫血；炎性肠病；和骨疾。其他疾病或病症包括但不限于例如骨疾，包括但不限于骨折愈合、骨溶解性病损——尤其是与骨髓瘤(尤其是多发性骨髓瘤、MGUS、平台型和郁积型骨髓瘤)相关的骨溶解性病损和转移、或者与下述的癌症或其转移相关的骨溶解性病损和转移骨、乳房、结肠、黑色素细胞、肝细胞、上皮、食道、 脑、肺、前列腺或胰腺；与移植相关的骨丢失；骨质减少、骨质疏松、骨密度异常、骨肉瘤和骨质溶解。其他疾病或病症包括但不限于例如癌症、各种肌肉和代谢疾病、阿兹海默氏病、 风湿病、结肠炎和/或不想要的脱发。还包括脂肪生成、软骨发生和色素沉着的病症。其他病症包括但不限于心血管疾病，例如冠状动脉病、血管钙化、跛行、动脉粥样硬化、动脉硬化、急性心力衰竭、充血性心力衰竭、心肌病、心肌梗塞、心绞痛、高血压、低血压、中风、局部缺血、缺血再灌注损伤、动脉瘤、再狭窄和血管狭窄。已知DKKl和Wnt通路基因在多种这类疾病中具有改变的表达，包括MFH(也称为高度未分化多形性肉瘤)(Matushanasky等人，2007 J. Clin. Invest. 117 :3248-3257)；炎性肠病(You 等人，2008 Dig. Dis. Sci. 53 1013-1019)；骨肉瘤(Lee 等人，2007 Brit. J. Cancer 97 :1552-1559 ;Gregory 等人，2003 J. Biol. Chem. 278 :28067-28078)；骨髓(骨骼肌)转移(Granchi 等人，2008 Int. J. Cancer 123 :1526-1535)；和肺癌和食道鳞状细胞癌(ESCC) (Yamabuki 等人，2007 Cancer Res. 67 2517-2525)。与DKKl或DKK4相关的特定肌肉和代谢疾病包括抗胰岛素性、非胰岛素依赖性糖尿病(NIDDM)、低胰岛素血症、糖尿病(尤其是2型糖尿病，或糖皮质激素或其它药物相关性糖尿病)、肥胖、体重减轻、持续体重减轻(weight loss maintenance)、神经性厌食、贪食症、恶病质、X综合征、代谢综合征、餐后高血糖症、餐后高脂血症和/或高甘油三酯血症、 低血糖症、高血糖症、高尿酸血症、高胰岛素血症、高胆固醇血症、高脂血症、血脂异常、混合型血脂异常、高甘油三酯血症、胰腺炎和非酒精性脂肪肝病；以及肌肉创伤、萎缩、消耗、变性、修复、再生。在相关的实施方案中，待治疗的癌症是骨髓瘤，例如MGUS、多发性骨髓瘤或郁积型或平台型骨髓瘤、下述的癌症或其转移骨、乳房、结肠、黑色素细胞、肝细胞(例如肝细胞癌(HCC))、上皮、食道、脑、肺、前列腺或胰腺。
方法涉及向需要其的对象施用有效量的包括本发明的结合分子的药物组合物。
本发明的中和性DKK1/4结合分子适合治疗患有或有风险患胆固醇相关性病症的人类患者，包括但不限于升高的胆固醇或与升高的胆固醇相关的病况，例如脂类病症(例如，高脂血症、I型、II型、III型、IV型或V型高脂血症、继发性高甘油三酯血症、高胆固醇血症、黄瘤病、胆固醇乙酰转移酶缺陷)。DKK1/4结合分子还适合治疗患有心血管疾病的人类患者，和有风险患该病的患者，例如由于存在一种或多种风险因子(例如，高血压、吸烟、 糖尿病、肥胖或高同种半胱氨酸血症)的。
在某些实施方案中，任何上述方法都还涉及施用化疗活性剂或其他药用活性剂。 在相关的实施方案中，化疗剂是抗癌剂。在另一个相关的实施方案中，化疗剂是抗骨质疏松剂。在一个实施方案中，将结合分子与一种或多种骨合成代谢疗法、体重减轻疗法和/或糖尿病疗法组合施用。
在一个实施方案中，结合分子是DKK1/4中和性结合分子(即，特异性的中和DKKl 或DKK4或两者)。在多个实施方案中，DKK1/4中和性结合分子的抗原结合部分不结合DKK2 或DKK3。
在一个实施方案中，结合分子或其抗原结合部分排列在免疫球蛋白样支架内，例如选自如人、人源化、人体工程(humaneering)、鲨鱼或骆驼(camelid)支架的构架，和/或额外的是重组的、嵌合的或移植CDR的抗体。例如，设计将人抗鼠抗体反应最小化的技术 (Kalobios的人体工程技术或PDL的人源化技术)被认为落入本发明的范围内。此外，特异性针对DKKl或DKK4的抗原结合部分可以在非免疫球蛋白样支架内，包括例如排列在源自 adnectin、纤维蛋白原、锚蛋白的重复等构架类型内的。
在一个实施方案中，DKKl结合分子的特征是具有特异性针对靶蛋白DKKl的抗原结合区，和结合分子或功能片段结合DKKl或其片段。在相关的实施方案中，DKK4结合分子的特征是具有特异性针对靶蛋白DKK4的抗原结合区，并且结合分子或功能片段结合DKK4 或其片段。在一个实施方案中，结合分子或其抗原结合部分结合DKKl或DKK4多肽或两者， 但不结合DKK2或DKK3多肽。
在另一个实施方案中，结合分子或其抗原结合部分是单克隆的。在另一个实施方案中，抗原结合部分是多克隆的。在多个实施方案中，DKKl结合分子或其抗原结合部分结合由DKKl或DKK4多肽的30个连续的氨基酸组成的肽。在一个实施方案中，本发明的结合分子结合包含不连续的氨基酸的DKKl或DKK4表位。
在相关的实施方案中，通过至少一个下列测定来确定与DKKl或DKK4的结合抑制 DKKl或DKK4对Wnt信号转录的拮抗作用；表面等离振子共振亲和测定、酶联免疫吸附测定结合；基于电化学发光的结合分析；FMAT、SET、SPR、ALP、TopFlash、生物标记物例如骨钙蛋白(OCN)、I型前胶原含氮前肽(PlNP)和护骨蛋白(OPG)的血清浓度，以及与细胞表面受体例如Frizzled(Fz)、LRP(LRP5/6)或Kremen(Krm)的结合。在某些实施方案中，DKKl结合分子或抗原结合部分具有至少一个下列特性与DKKl的选择性比与人DKK2或DKK3的大至少IO3-倍、IO4-倍或IO5-倍；与DKKl或DKK4的结合具有小于100ηΜ、50ηΜ、ΙΟηΜ、1. OnM、 500pM、100pM、50pM 或 IOpM 的 Kon ；与 DKKl 具有小于 1(Γ2 每秒、1(Γ3 每秒、1(Γ4 每秒或 1(Γ5 每秒的脱离速率。
在相关的实施方案中，本发明的结合分子与DKKl和/或DKK4竞争结合LRP5/6。 在相关的实施方案中，本发明的结合分子与DKKl和/或DKK4竞争结合Krm。
在另一个实施方案中，本发明提供了任何上述结合分子或其功能性片段的分离的抗原结合区，及其氨基酸序列。因而，在某些实施方案中，本发明提供了选自SEQ ID NO 2-20和SEQ ID NO :40-72的分离的氨基酸序列，以及这些序列的保守的或人体工程变体。
在另一个实施方案中，本发明提供了本发明的结合分子的核苷酸序列和多肽序列，尤其包括DKK1/4抗体的，重链和轻链的⑶R1、⑶R2和⑶R3区，以及各种构架区和支架的核苷酸序列和多肽序列。
在一个实施方案中，优化序列用于表达、生产和临床应用。为临床应用而优化的特征包括但不限于例如半衰期、药物动力学(PK)、抗原性、效应子功能、FcRn清除率和患者应答，包括抗体依赖性细胞的细胞毒性(ADCC)或补体依赖性细胞毒性(CDC)活性。
在其他实施方案中，本发明提供了与表18所述的任何一个或多个加阴影的CDR区 (SEQ ID NO 49-98)具有至少 60、70、80、90、95、96、97、98 或 99% 同一性的氨基酸序列，其中表18提供了本发明抗体的重链可变区(SEQ ID NO :2-20)和轻链可变区(SEQ ID NO: 21-39)。在一个实施方案中，本发明提供了与SEQ ID NO :40-48的任何一个或多个所提供的Vh链亚类的⑶R共有序列，和/或SEQ ID NO 113-118的任何一个或多个所提供的/链亚类的CDR共有序列具有至少60、70、80、90、95、96、97、98或99 %同一性的氨基酸序列。表 18的克隆支架序列显示在SEQ ID NO =125-130中。
表18 提供了 SEQ ID NO 2-39 的重链和轻链可变区。SEQ ID NO :99、101、103、105、107、109和111提供了本发明抗体的优化的LC和HC变体的DNA序列，而SEQ ID NO :100、 102、104、106、108、110和112分别提供了所编码的多肽序列。在一个实施方案中，本发明提供了与SEQ ID NO 2-39和100、102、104、106、108、110与112所述的任何一个或多个序列具有至少60、70、80、90、95、96、97、98或99%同一性的氨基酸序列。在一个实施方案中，本发明提供了与SEQ ID NO :99、101、103、105、107、109和111所述的任何一个或多个序列具有至少60、70、80、90、95、96、97、98或99%同一性的核苷酸序列。
优化的八链的序列，更具体的是它的DNA正义链、它的相应的反义链及其编码的多肽，分别提供在SEQ ID N0:119-121中。优化的Vh链的序列，更具体的是它的DNA正义链、它的相应的反义链及其编码的多肽，分别提供在SEQ ID NO :122-1 中。在一个实施方案中，本发明提供了与SEQ IDNO 121或1 所述的序列具有至少60、70、80、90、95、96、 97、98或99%同一性的氨基酸序列。在一个相关的实施方案中，本发明提供了与SEQ IDNO 119-120和122-123所述的序列具有至少60、70、80、90、95、96、97、98或99%同一性的核苷酸序列。
在某些实施方案中，任何上述分离的抗体是IgG。在相关的实施方案中，任何上述分离的抗体是IgGl、IgG2、IgG3或IgG4。在另一个实施方案中，所述抗体是IgE、IgM、IgD 或IgA。在相关的实施方案中，本发明选自单克隆或多克隆抗体组合物。在其他实施方案中，抗体是嵌合的、人源化的、人体工程的、重组的，等。
功能性片段包括Fv和Fab片段(包括单链版本，例如scFv)，以及本发明抗体的其他抗原结合区，包括与非免疫球蛋白支架和重链抗体例如骆驼和鲨鱼抗体和纳米抗体相连的那些。在相关的实施方案中，上述分离的抗体是IgG。在另一个相关的实施方案中，上述分离的抗体是IgGl、IgG2、IgG3或IgG4。在另一个实施方案中，所述抗体是IgE、IgM、IgD 或IgA。在相关的实施方案中，本发明是多克隆抗体组合物。
在一个实施方案中，本发明提供了分离的人或人源化结合分子或其功能性片段， 其具有特异性针对DKKl的表位的抗原结合区，并且结合分子或功能片段结合DKKl或DKK4， 或者另外阻断DKKl或DKK4与细胞表面受体(例如受体如LRP5/6、Kremen, Frizzled)的结合。在某些实施方案中，结合分子或其片段预防、治疗或缓解骨溶解性病损的发展。在其他实施方案中，本发明的抗DKK组合物预防、治疗或缓解与DKKl-或DKK4-相关的癌症或疾病。
在一个实施方案中，本发明提供了分离的人或人源化结合分子或其功能性片段， 其具有特异性针对靶DKKl或DKK4的表位的抗原结合区，和所述表位含有来自这样的多肽片段的6个或更多个氨基酸残基，所述多肽片段包含DKKl和/或DKK4的CYSl-接头-CYS2 结构域。在相关的实施方案中，表位是构象表位。在一个实施方案中，表位位于CYS2结构域中。在特定的实施方案中，表位包括修饰的氨基酸残基。在相关的实施方案中，表位含有至少一个糖基化的氨基酸残基。
在另一个实施方案中，本发明提供了这样的药物组合物，所述药物组合物具有至少一个任意或多种上述结合分子或功能性片段或保守变体，以及其可药用的载体或赋形剂。
在另一个实施方案中，任意上述人的或人源化的结合分子或其片段是合成的。
在另一个实施方案中，本发明提供了任何上述结合分子或其功能性片段以及额外的治疗剂的药物组合物。额外的治疗剂可以选自抗癌剂；抗骨质疏松剂；抗生素；抗代谢剂；抗糖尿病剂；抗炎剂；抗血管发生剂；生长因子；骨合成代谢剂、体重减轻疗法、抗糖尿病剂、降血脂剂(hypylipidemic agent)、和减肥药(anti-obesity agent)、抗高血压剂、和 /或过氧化物酶体增殖子-激活子受体(PPAR)的激动剂，和细胞因子。
本发明还涉及用下述药剂的组合的预防或治疗哺乳动物特别是人中的与DKK1、 DKK4或DKK1/4相关的疾病或病症的方法，所述药剂组合包括
(a)本发明的DKK1/4结合分子；和
(b) 一种或多种药用活性剂；和任选的
(c)可药用的载体；
其中至少一种药用活性剂是抗癌治疗剂。
本发明还涉及药物组合物，包括
(a) DKK1/4 中和剂；禾口
(b)药用活性剂；和任选的
(c)可药用的载体；
其中至少一种药用活性剂是骨合成代谢剂、体重减轻治疗剂或糖尿病治疗剂。
本发明还涉及商业化包装或产品，包括
(a)DKKl/4中和性结合分子的药物制剂；和
(b)同时的、共同的、分别的或顺序的使用的药用活性剂的药物制剂；
其中至少一种药用活性剂是抗癌治疗剂、骨合成代谢剂、体重减轻治疗剂或糖尿病治疗剂。
附图简介
图1显示了抗DKK1/4抗体与人DKKl具有高亲和力(2pM)，其结合动力学对于具有该亲和力的抗体是典型的。
图2A显示了全长和截短的DKKl的示意图。
图2B描述了中和性抗DKK1/4抗体与DKKl蛋白的结合。
图3显示了抗DKK1/4抗体竞争性抑制DKKl与LRP6结合。
图4显示了抗DKK1/4抗体重新激活被DKKl抑制的Wnt信号传导，表观EC50为 0.16nM。
图5显示了建立的体外测定，用于测量多能性小鼠细胞系C3H10Tl/2(10Tl/2)的 Wnt介导的成骨细胞分化。
图6显示了抗DKK1/4抗体3次给药对肿瘤生长的效应。
图7显示了在用PBS、IgG和抗DKKl/4(抗体)处理的动物中的百分比钙化骨骼。
图8显示了抗DKK1/4抗体表现出类似hmeta的抗溶骨活性。
图9显示了抗DKK1/4抗体的骨合成代谢效率是剂量依赖性的，最小有效剂量在20 和60 μ g/只小鼠3x/周之间。
图IOA和图IOB显示了 Wntl和DKKl对分化标志物的RNA表达的影响，其中GLUT4 蛋白质的表达随Wnt3a和DKKl增加。
图11是用Wnt3a、DKKl和M0R4910 (“BHQ880”)处理的细胞的分化标志物PPAR γ、C/EBP2和AP2的表达水平的图示。
图12描述了用Western印迹分析的GLUT4水平。
发明详述
本发明涉及分离的DKK1/4结合分子，特别是人抗体的用途，所述分子特异性结合 DKKl或DKK4，且抑制DKKl或DKK4的功能特性。在一个实施方案中，DKK1/4结合分子(结合DKKl和/或DKK4的分子)不特异性的结合DKK2或DKK3。
如本文中使用的，“DKK1相关的疾病或病症”或者“DKK4相关的疾病或病症”，或者可选的“DKK1/4相关的疾病或病症”(与DKKl和/或DKK4相关的疾病或病症)，包括但不限于骨髓瘤(包括多发性骨髓瘤、MGUS、平台型和郁积型骨髓瘤)、恶性纤维状组织细胞增多症或组织细胞瘤(MFH)、神经母细胞瘤、β地中海贫血、肠易激惹综合征、炎性肠病和骨病症。如本文中使用的，对DKKl或DKK4或两者的指代都称为“DKK1/4”。其他此类疾病或病症包括但不限于例如骨病症，包括但不限于骨折愈合、骨溶解性病损和转移；与移植相关的骨丢失；骨质减少、骨质疏松、骨密度异常、骨肉瘤和骨质溶解。其他此类疾病或病症包括但不限于例如癌症、各种肌肉和代谢疾病、阿兹海默氏病、风湿病、结肠炎和/或不想要的脱发。还包括脂肪生成、软骨发生和皮肤色素沉着的病症。其他疾病或病症包括但不限于心血管疾病。在相关的实施方案中，待治疗的癌症是骨髓瘤(例如多发性骨髓瘤、MGUS、 平台型和郁积型骨髓瘤)、下述的癌症或者其转移骨、乳房、结肠、黑色素细胞、肝细胞、上皮、食道、脑、肺、前列腺或胰腺。如果对象患有或有风险患升高的胆固醇或与升高的胆固醇相关的病况，例如脂类病症(例如，高脂血症、I型、II型、III型、IV型或V型高脂血症、 继发性高甘油三酯血症、高胆固醇血症、黄瘤病、胆固醇乙酰转移酶缺陷)，或者如果对象患有心血管疾病或有风险患此类病症，例如由于存在一种或多种风险因子(例如，高血压、吸烟、糖尿病、肥胖或高同种半胱氨酸血症)，则所述对象可能也具有DKK1/4相关性疾病或病症。本申请呈递的数据显示，用DKKl抗体M0R4910处理3T3L1成纤维细胞，抑制其分化为脂肪细胞。对脂肪细胞的抑制可用于与脂肪细胞活性和体脂相关的代谢疾病和病况，例如， 肥胖、持续体重减轻和高脂血症，以及癌症患者中的体脂降低。
方法涉及向需要其的对象施用有效量的包含本发明的结合分子的药物组合物。
在某些实施方案中，本发明的结合分子是源自特定重链和轻链序列的抗体，和/ 或包括特定的结构特征，例如包含特定氨基酸序列的CDR区。本发明提供了分离的抗体，制备此类抗体的方法，包含此类抗体的免疫缀合物和双特异性分子，以及含有本发明的抗体、 免疫缀合物或双特异性分子的药物组合物。如本文提供的，本发明还涉及使用所述抗体抑制与DKKl或DKK4或两者相关的病症或病况的方法。
为了更便于理解本发明，首先定义某些术语。在详细描述中列出其它定义。
术语“免疫应答”指淋巴细胞、抗原呈递细胞、吞噬细胞、粒细胞和上述细胞或肝脏产生的可溶性大分子(包括抗体、细胞因子和补体)的作用，其导致选择性损害、破坏或从人体清除侵入性病原体、受病原体感染的细胞或组织、癌性细胞，或者(在自身免疫或病理炎症的情况下)正常人细胞或组织。
“信号转导通路”指多种信号转导分子之间的生物化学关系，所述分子在信号从细胞的一部分传递到细胞的另一部分中起作用。本文所用的短语“细胞表面受体”包括例如， 分子或分子复合体，其能够接受信号并且能够将这种信号经细胞的质膜传递。本发明的“细胞表面受体”的实例是DKKl或DKK4蛋白质分子结合的受体。这类细胞表面受体包括但不限定于 Frizzled (Fz)、LRP (LRP5 和 LRP6)和 Kremen (Krm)。
如本文中使用的，术语“结合分子”指特异性识别和结合靶分子的表位的免疫球蛋白和非免疫球蛋白部分。
如本文中使用的，"DKK1/4结合分子”是特异性结合DKKl或DKK4或两者的多肽。 在一个实施方案中，DKK1/4结合分子优先结合DKKl，与结合DKK4的亲和力相差约10倍至约1000倍。在一个实施方案中，亲和力的差异是100倍。在一个实施方案中，DKK1/4结合分子不识别DKK2或DKK3多肽。DKK1/4结合分子的实例包括但不限于至少一个⑶R片段。 本发明的具体的CDR片段可以是本领域已知的多种支架，包括但不限于例如抗体或抗体片段，或特异性识别和结合一种或多种靶分子的表位的免疫球蛋白或非免疫球蛋白部分。
本文所用的术语“抗体”指免疫球蛋白例如多克隆抗体、单克隆抗体、人源化抗体、 单链抗体及其片段如Fab、F(ab)2、Fv，以及保留母体抗体的抗原结合功能的其他片段。同样地， 抗体可指免疫球蛋白或糖蛋白，或其片段或部分，或指包括修饰的免疫球蛋白样构架内包含的抗原结合部分的结构，或指包含非免疫球蛋白样构架或支架的结构内包括的抗原结合部分。
本文所用的术语“单克隆抗体”指含有同源抗体群体的抗体组合物。该术语未限定关于抗体的种类或来源，也未旨在由制备的方式所限定。该术语包括全部免疫球蛋白以及片段如Fab、F(ab)2、Fv，以及保留抗体的抗原结合功能的其他片段。在本发明中可使用任一哺乳动物种类的单克隆抗体。然而，实践中，由于大鼠或鼠细胞系在用于制备产生单克隆抗体所需的杂交细胞系或杂交瘤中的实用性，抗体一般将是大鼠或鼠源性的。
本文所用的术语“多克隆抗体”指含有异源抗体群体的抗体组合物。多克隆抗体常源自免疫动物或所选人类的混合血清。
本文所用的短语“单链抗体”指通过测定结合抗体的结合结构域(重链和轻链)， 以及提供允许保持结合功能的连接部分制备的抗体。实质上，这形成仅具有结合抗原所需可变结构域的部分的极短缩抗体。单链抗体的测定和构建描述于Ladner等人的美国专利号 4，946，778。
“天然存在的抗体”是糖蛋白，其包含通过二硫键连接的至少两条重(H)链和两条轻(L)链。每条重链包含重链可变区(本文中简写和重链恒定区。重链恒定区包含三个结构域CH1、CH2和CH3。每条轻链包含轻链可变区(本文中简写为Vj和轻链恒定区。轻链恒定区包含一个结构域Q。可以将V1^nt进一步细分为高变区，称作互补决定区 (CDR)，其散布着更保守的称作构架区(FR)的区域。每个V1^Pt由三个CDR和四个DR组成，它们从氨基末端到羧基末端以下面的顺序排列FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3、FR4。 重链和轻链的可变区含有与抗原相互作用的结合结构域。抗体的恒定区可以介导免疫球蛋白与宿主组织或因子的结合，所述组织或因子包括免疫系统的多种细胞(例如，效应细胞) 和经典补体系统的第一组分(Clq)。
本文所用的术语抗体的“抗原结合部分”(或简单地“抗原部分”)指结合靶标的蛋白质序列，例如一个或多个CDR。它包括例如，全长抗体、一个或多个抗体片段，和/或保留抗原(如DKK1)特异性结合能力的非免疫球蛋白相关的支架上的CDR。抗体的抗原结合功能可以通过全长抗体的片段执行。术语抗体的“抗原结合部分”内包括的结合片段的实例包括Fab片段、由/、Vh、(^和CHl结构域组成的单价片段；F (ab) 2片段、包含通过二硫键在铰链区连接的两个Fab片段的二价片段；由V1^P CHl结构域组成的Fd片段；由抗体的单臂的/和Vh结构域组成的Fv片段；由Vh结构域组成的dAb片段(Ward等人，1989Nature 341 =544-546)；和分离的互补决定区(CDR)。
本文所用的“抗原”或“表位”可互换使用，指靶蛋白上的多肽序列，所述多肽序列由抗体、抗体片段、结合分子或其等价体的抗原结合部分特异识别。抗原或表位包括在靶序列内连续或非连续的至少六个氨基酸。构象表位可包括非连续残基，并且任选可包括天然或人工修饰的氨基酸残基。对残基的修饰包括但不限定于，磷酸化、糖基化、聚乙二醇化、泛素化、呋喃化等。
此外，尽管Fv片段的两个结构域/和Vh由单独的基因编码，但是它们可以用重组方法通过合成接头连接，所述接头使得它们成为一条蛋白质链，其中/和Vh区配对形成单价分子(称作单链Fv(scFv)；参见例如，Bird等人，1988 Science 242 :423-426 ；和Huston 等人，1988 Proc. Natl. Acad. Sci. 85 :5879-5883)。此类单链抗体意在被术语抗体的“抗原结合部分”包括。使用本领域技术人员已知的常规技术得到这些抗体片段，并且以与完整抗体相同的方式筛选所述片段的效用。
如本文描述的，保守变体包括任何鉴定的氨基酸序列中的氨基酸残基，特别是蛋白质工程领域任一普通技术人员众所周知的保守改变。
本文所用的“分离的抗体”指抗体，其基本上没有具有不同抗原特异性的其他抗体 (例如，特异结合DKKl的分离的抗体基本上无特异结合不同于DKKl的抗原的抗体)。然而， 特异结合DKKl的分离的抗体可以与其他抗原，如来自其他物质的DKKl分子，或其他家族成员如DKK4或相关的侧向同源物具有交叉反应性。此外，分离的抗体可以基本上无其他细胞物质和/或化学品。
本文所用的术语“人抗体”意在包括具有可变区的抗体，其中构架区和CDR区都来自人来源的序列。此外，如果抗体含有恒定区，那么该恒定区也来自此类人序列，例如，人种系序列，或者人种系序列的突变形式。本发明的人抗体可以包括不由人序列编码的氨基酸残基(例如，通过在体外随机或位点特异性诱变或通过体内体细胞突变导入的突变)。然而，如本文所用的术语“人抗体”不意在包括这样的抗体，其中来自另一哺乳动物物种如小鼠的种系的CDR序列已经被嫁接到人构架序列上。
术语“人单克隆抗体”指显示出单结合特异性的抗体，其具有可变区，其中构架区和⑶R区都来自人序列。在一个实施方案中，通过杂交瘤产生人单克隆抗体，杂交瘤包括来自转基因非人动物，例如转基因小鼠的B细胞，其具有包含与永生细胞融合的人重链转基因和轻链转基因的基因组。
本文所用的术语“人源化抗体”指衍生自人类免疫球蛋白序列的免疫球蛋白构架区的至少一部分。已移植到人类构架序列上的“人源化”抗体如具有CDR序列的抗体源自其他物种的种系，特别是哺乳动物种如小鼠。技术实例包括PDL的人源化技术。
本文所用的术语“人工程化的抗体”指结合相同表位但序列不同的抗体。技术实例包括通过Kalobios的人工程化技术制备的人工程化抗体，其中抗原结合区序列是源于例如突变而非源于保守性氨基酸取代。
本文所用的术语“重组人抗体”包括通过重组手段制备、表达、产生或分离的所有人抗体，如从对于人免疫球蛋白基因为转基因或转染色体的动物(例如，小鼠)或从其制备的杂交瘤分离的抗体，从被转化而表达人抗体的宿主细胞分离的抗体，例如，从转染瘤分离的抗体，从重组的组合人抗体文库分离的抗体，和通过涉及将人免疫球蛋白基因序列的全部或部分剪接成其他DNA序列的任何其他手段制备、表达、产生或分离的抗体。此类重组人抗体具有可变区，其中构架区和CDR区来自人种系免疫球蛋白序列。然而，在一些实施方案中，此类重组人抗体可以进行体外诱变(或者，当使用人Ig序列转基因的动物时，体内体细胞诱变)，并且从而重组抗体的Vh和/区的氨基酸序列是这样的序列，其尽管来自并且涉及人种系％和/序列，但是可以不天然在体内存在于人抗体种系所有组成成分。
本文所用的“同种型”指重链恒定区基因提供的抗体类别(例如IgA、IgD、IgM、 IgE、IgG 如 IgGl、IgG2、IgG3 或 IgG4)。
短语“识别抗原的抗体”和“抗原特异性的抗体”在本文中与术语“特异性结合抗原的抗体”可互换使用。本文所用的“特异性结合人DKK1”的抗体意指以切10_1或更小、 2χ ΙΟ—Ι或更小，或Ix IO-ltlM或更小的Kd结合到人DKKl的抗体。“与不同于人DKKl的抗原交叉反应”的抗体意指以0. 10_%或更小、5x KTi3M或更小，或h 101或更小的Kd结合该抗原的抗体。“不与特定抗原交叉反应”的抗体意指以1. ΙΟΛ 或更大，或5-lOx IO-8M 或Ix KT7M或更大的Kd结合该抗原的抗体。在某些实施方案中，不与所述抗原交叉反应的此类抗体在标准结合测定中显示出对于这些蛋白质的基本上检测不到的结合。
本文所用的“抑制DKKl结合细胞表面受体”的结合分子如LRPJz或&!11，指以InM 或更小，0. 75nM或更小，0. 5nM或更小，或0. 25nM或更小的K抑制DKKl结合受体的结合分子。
本文所用的“骨质溶解”指骨密度的减少，其可能由于多种作用机理，包括例如，减少的成骨细胞活性、增加的破骨细胞活性。骨质溶解因此包含通常影响骨矿物质密度的机理。本文所用的“抑制骨质溶解活性”的结合分子意指通过增加骨形成或阻碍骨再吸收来抑制骨密度损失的结合分子。
本文所用的术语"Kass。。”或“Ka”意指特定抗体-抗原相互作用的结合速率，而本文所用的术语"Kdis“或"KD，“意指特定抗体-抗原相互作用的解离速率。如本文所用的，术语〃 K/意指解离常数，其从Kd与Ka的比(即Kd/Ka)得到并且表达为摩尔浓度(M)0 可以使用本领域成熟的方法测定抗体的Kd值。用于测定抗体Kd的方法是通过使用表面等离振子体共振，或者使用生物传感器系统，如Biacore 系统。
本文所用的术语“亲和力”指在单个抗原位点上结合分子例如抗体和抗原之间相互作用的强度。在每一抗原位点，抗体“臂”的可变区通过弱的非共价力与抗原在多位点相互作用；相互作用越强，亲和力越强。
本文所用的术语“抗体亲抗原性”指结合分子-抗原复合物全部的稳定性或强度的度量。它由三种主要因素调节结合分子表位亲和力；结合分子和抗原两者的效价；以及相互作用部分的结构排列。最终这些因素限定结合分子的特异性，即特定结合分子结合到精确的抗原表位的可能性。
为获得更高抗体亲抗原性探针，可构建二聚缀合物(连结FACS标记的两分子 JWJ-1)，从而使得低亲和力相互作用(如与种系抗体)通过FACS更易检测到。此外，增加结合抗原的抗体亲抗原性的其他方法包括产生DKKl或DKK4结合分子的任一本文描述的纤连蛋白结构的二聚体或多聚体。可通过各个分子间的共价结合产生这类多聚体，例如，通过模拟天然C至N端结合或通过模拟经其恒定区保持在一起的抗体二聚物。设计进入Fc/Fc 界面的键可以是共价的或非共价的。此外，在DKKl或DKK4杂化物中可使用不同于Fc的二聚化或多聚化配偶体以创建这种更有序的结构。
本文所用的术语“交叉反应”指结合分子或结合分子群体结合其他抗原表位。这可由结合分子的低抗体亲抗原性或特异性，或由具有同样或非常相似表位的多个不同抗原引起。当需要大体结合到抗原相关组时，或当抗原表位序列在进化中不是高度保守而尝试跨种标记时，交叉反应有时是所期望的。
本文所用的术语IgG抗体的“高亲和力”或“高特异性”指对靶抗原具有ΙΟΛ 或更小、101或更小，或ΙΟ,Μ或更小的Kd的抗体。然而，“高亲和力”结合可因其他抗体同种型而不同。例如，IgM同种型的“高亲和力”结合指具有10_7Μ或更小，或10_%或更小的Kd 的抗体。
本文所用的术语“对象”包括任何人或非人动物。
术语“非人动物”包括所有脊椎动物，例如，哺乳动物和非哺乳动物，如非人灵长类动物、绵羊、狗、猫、马、奶牛、鸡、两栖动物、爬行动物等。术语“非人细胞”指不是人起源的任何细胞，其为真核的或原核的，尤其包括脊椎动物、无脊椎动物、微生物、真菌或其他来源的细胞。
本文所用的术语“优化”指已被改变成此类氨基酸序列的核酸序列，所述氨基酸序列使用在产生的细胞或有机体中优选的密码子，和/或已被改变成除去潜在的剪接供体或剪接受体位点的核酸序列。对于多种物种的优化的密码子表是本领域众所周知的。剪接供体或受体位点的序列也是本领域公知的并且潜在的剪接位点可通过例如分析转录或表达数据来鉴定。产生的细胞包括但不限定于，原核细胞，例如如细菌(大肠杆菌(E. coli))的原核细胞，或真核细胞，例如酵母(如毕赤酵母属(Pichia))、真菌细胞、杆状病毒感染的细胞、中国仓鼠卵巢细胞(CHO)、骨髓瘤细胞或人细胞。将优化的核苷酸序列设计成完全保留或尽可能多地保留由也被认为是“母本”序列的启动核苷酸序列最初编码的氨基酸序列和残基数。本文已将优化序列设计成具有在产生的细胞中优选的密码子，然而本文也预见其他真核或原核细胞中这些序列的优化表达。优化核苷酸序列编码的氨基酸序列任选称为优化的。
在相关的实施方案中，本发明的中和抗-DKK1/4组合物的多肽序列以及编码它们的核苷酸进行生产和临床用途的优化。临床使用优化的特征包括但不限定于，例如，半寿期、药物代谢动力学(PK)、抗原性、效应功能、FcRn清除，以及包括抗体依赖细胞的细胞毒性(ADCC)或补体依赖细胞毒性(CDC)活性的患者应答。
如本文中使用的，“与DKKl相关的疾病”和/或“与DKK4相关的疾病”(“与DKK1/4 相关的疾病”)包括但不限于骨溶解性病损——尤其是与骨髓瘤(尤其是多发性骨髓瘤、 MGUS、平台型和郁积型骨髓瘤)相关的骨溶解性病损；或者与下述的癌症或其转移转移相关的骨溶解性病损骨、乳房、结肠、黑色素细胞、肝细胞、上皮、食道、脑、肺、前列腺或胰腺； 与移植相关的骨丢失。其他疾病或病症包括但不限于例如骨肉瘤、前列腺癌、肝细胞癌 (HCC)、骨髓瘤(包括多发性骨髓瘤、MGUS、平台型和郁积型骨髓瘤)、糖尿病、肥胖、肌肉萎缩、阿兹海默氏病、骨质疏松、骨质减少、风湿病、结肠炎和/或不想要的脱发。[0101]本文所用的“治疗”是以预防发展或改变病症的病状为目的进行的干预。“治疗” 指治疗性处理和预防或预止性措施。需要治疗的个体包括患有病症的个体以及待预防病症的个体。在肿瘤(如癌症)治疗中，治疗剂可直接减少肿瘤细胞的病状，或使肿瘤细胞更易感于通过其他的活性剂如辐射和/或化学疗法的治疗。癌症的“病状”包括危害患者健康的所有现象。这非限定地包括异常或无法控制的细胞生长、转移、干扰邻近细胞的正常功能、 异常水平释放细胞因子或其他分泌产物、炎症或免疫应答的抑制或恶化等。
患有临床疾病、生物化学疾病、放射性疾病或主观疾病(如骨质溶解)的患者治疗，可包括减轻一些或全部这类症状或减少患病诱因。
通常，本发明的中和抗-DKK1/4组合物预防、治疗或改善与DKK1、DKK4或该两者有关，而不是与DKK2、DKK3或Wnt途径的其他调节剂有关的Wnt相关疾病。
本发明的多个方面进一步详细描述于下面部分。
Wnt途径是充质干细胞(MSC)分化成成骨细胞的主要调节因子。它也是活性成骨细胞的重要存活因子。Dickkopf-I (DKKl)是主要在成人骨中表达的Wnt途径拮抗物并且在患有骨质溶解性损伤的骨髓瘤患者中被增量调节。中和抗-DKK1/4的结合分子确实是合成代谢剂，其通过增加成骨细胞的活性同时减少破骨细胞活性来起作用。相反，目前的药物如作为合成代谢剂销售的PTH，实际上增加了成骨细胞和破骨细胞相关的标记。
本发明提供的是选择用于结合DKKl的多克隆和单克隆抗体。在一个实施方案中， 本发明的抗体具有针对人DKKl小于IOpM的亲和力。在某些实施方案中，抗DKKl抗体与 DKK4(Kd 300pM)交叉反应而不与DKK2交叉反应(应用现有方法不可检测)。
在一个实施方案中，将抗-DKKl或抗-DKK4结合分子的表位定位到Cys_2结构域 (第189-263位氨基酸)，其被认为负责LRP6和Kremen的结合。在一个实施方案中，该表位包括DKKl或DKK4多肽的Cys-2结构域的至少六个且至多三十个氨基酸残基。在一个实施方案中，表位包括至少六个连续的氨基酸的一段序列。在另一实施方案中，结合位点是非线性的，即包括非连续性的氨基酸残基。在某些实施方案中，结合取决于N-糖基化。仅仅预知Cys-2结构域中的残基256处的一个N-糖基化位点。
在某些实施方案中，本发明的结合分子在小鼠中显示剂量线性药物代谢动力学 (AUC)，在小鼠中剂量超过20-200 μ g/小鼠时具有35-96小时的剂量依赖性终末半寿期。
因此，“抑制”依据本领域公知并描述于本文的方法学测定的一种或多种这些DKKl 功能性质(例如，生物化学活性、免疫化学活性、细胞活性、生理学活性或其他生物学活性) 的结合分子，将被认为与相对于缺乏结合分子时(例如，或当无相关特异性的对照结合分子存在时)所显示的特定活性的统计学显著降低相关。抑制DKKl活性的结合分子影响这类统计学显著降低至少10%的测量参数，至少50%、80%或90%，并且在某些实施方案中本发明结合分子可抑制大于95^^98%或99%的DKKl功能性活性。
Dickkopf 家族成员
本发明的DKK 多肽包括 DKKl (SEQ ID NO 1)和 DKK4 (SEQ ID NO: 133)，以及 DKK2 (SEQ ID NO :131)禾口 DKK3 (SEQ ID NO :132)。DKK 家族成员具有示于表 A-DKK1 家族成员堆积(pileup)中的两个CYS结构域(CYS1和CYS2)。DKK蛋白质包含酸性N端信号肽、 由分枝连接区(divergent linker region)隔开的含半胱氨酸残基簇的两个CYS结构域， 以及潜在的C末端N糖基化位点。DKK4中的CYS2结构域具有可在质膜上促进WNT/DKK相互作用的脂质结合功能。OMIM登录号605417。
权利要求
1.治疗与DKKl和/或DKK4的存在相关的病症或病况的方法，包括向需要其的对象施用有效量的药物组合物，所述药物组合物用作药物，所述组合物包括特异性结合DKKl多肽 (SEQ ID NO 1)和/或DKK4多肽(SEQ ID NO :131)中的表位的抗原结合区，其中，抗体或其功能片段结合DKKl或DKK4或两者中的至少一个表位，且所述药物是用于治疗与DKKl和 /或DKK4的存在相关的病症或病况。
2.治疗与DKKl和/或DKK4的存在相关的病症或病况的方法，其中所述病症或病况选自i.恶性纤维状组织细胞增多症(MFH)； . β地中海贫血；iii.神经母细胞瘤；iv.炎性肠病和肠易激惹综合征；v.2型糖尿病；vi.糖皮质激素或其他药物相关性糖尿病；vii.非胰岛素依赖性糖尿病；viii.低胰岛素血症；ix.与色素沉着相关的病症； χ.心血管病症；xi.胆固醇相关性病症；xii.MGUS ；xiii.平台型骨髓瘤；和xiv.郁积型骨髓瘤，所述方法方法包括向需要其的对象施用药学有效量的DKK1/4抗体，所述抗体包含选自表 5、6、7 和 8 的 CDR1、CDR2 和 CDR3 区。
3.权利要求
2的方法，其中所述方法还包括施用第二治疗剂。
4.权利要求
3的方法，其中所述第二治疗剂选自抗癌剂；抗骨质疏松剂；抗生素；抗代谢剂；抗糖尿病剂；抗炎剂；抗血管发生剂；生长因子；骨合成代谢剂，体重减轻疗法，降血脂剂，和减肥药，抗高血压剂，和/或过氧化物酶体增殖子-激活子受体(PPAR)的激动剂， 和细胞因子。
5.权利要求
3的方法，其中所述第二治疗剂是除中和性抗DKK1/4组合物或其衍生物以外的药用活性剂，所述活性剂选自i.芳化酶抑制剂； .抗雌激素物质、抗雄激素物质或促性腺激素释放因子激动剂；iii.拓扑异构酶I抑制剂或拓扑异构酶II抑制剂；iv.微管活性剂、烷化剂、抗肿瘤的抗代谢物或钼化合物；v.靶向/降低蛋白质或脂质激酶活性、或者蛋白质或脂质磷酸酶活性的化合物，或进一步的抗血管发生的化合物或诱导细胞分化过程的化合物；vi.单克隆抗体；vii.环加氧酶抑制剂、双磷酸盐、类肝素酶抑制剂、生物反应调节剂；viii.Ras致癌同种型抑制剂；ix.端粒末端转移酶抑制剂；χ.蛋白酶抑制剂、基质金属蛋白酶抑制剂、甲硫氨酸氨肽酶抑制剂或蛋白酶体抑制剂；xi.用于治疗血液性恶性肿瘤的活性剂或者靶向、降低或抑制Flt-3活性的化合物；xii.HSP90抑制剂；xiii.抗增殖性抗体；xiv.组蛋白脱乙酰酶(HDAC)抑制剂；XV.靶向、降低或抑制丝氨酸/苏氨酸mTOR激酶活性/功能的化合物；xvi.促生长素抑制素受体拮抗剂；xvii.抗白血病的化合物；xviii.肿瘤细胞损伤方式；xix.EDG结合剂；XX.核糖核苷酸还原酶抑制剂；xxi.S-腺苷甲硫氨酸脱羧酶抑制剂；xxii.VEGF或VEGFR的单克隆抗体；xxiii.光动力学治疗；xxiv.血管稳定类固醇；XXV.包含皮质类固醇的植入物；xxvi.ATl受体拮抗剂；xxvii.ACE 抑制剂；xxviii.抗糖尿病剂；xxix.降血脂剂； XXX.减肥药；xxxi.抗高血压齐Ll；禾口xxxii.过氧化物酶体增殖子-激活子受体(PPAR)的激动剂； 和任选的可药用的载体。
6.治疗恶性纤维状组织细胞增多症(MFH)的方法，包括向需要其的对象施用药学有效量的DKK1/4抗体，所述抗体包含选自表5、6、7和8的⑶R1、⑶R2和⑶R3区。
7.权利要求
2的方法，其中所述骨病症选自骨折愈合、骨溶解性病损和转移、骨质减少、骨质疏松、骨密度异常、骨肉瘤和骨质溶解。
8.权利要求
2的方法，其中所述癌症选自骨髓瘤、多发性骨髓瘤、MGUS、郁积型或平台型骨髓瘤；下述的癌症或其转移骨、乳房、结肠、黑色素细胞、肝细胞、肝细胞癌(HCC)、上皮、食道、脑、肺、前列腺或胰腺。
9.权利要求
2的方法，其中所述肌肉疾病选自肌肉创伤、萎缩、消耗、变性、修复、再生。
10.权利要求
2的方法，其中所述代谢疾病选自抗胰岛素性、非胰岛素依赖性糖尿病 (NIDDM)、低胰岛素血症、糖尿病(尤其是2型糖尿病，或糖皮质激素或其它药物相关性糖尿病)、肥胖、体重减轻、持续体重减轻、神经性厌食、贪食症、恶病质、X综合征、代谢综合征、 餐后高血糖症、餐后高脂血症和/或高甘油三酯血症、低血糖症、高血糖症、高尿酸血症、高胰岛素血症、高胆固醇血症、高脂血症、血脂异常、混合型血脂异常、高甘油三酯血症、胰腺炎和非酒精性脂肪肝病。
11.权利要求
2的方法，其中所述心血管疾病选自冠状动脉病、血管钙化、跛行、动脉粥样硬化、动脉硬化、急性心力衰竭、充血性心力衰竭、冠状动脉病、心肌病、心肌梗塞、心绞痛、高血压、低血压、中风、局部缺血、缺血再灌注损伤、动脉瘤、再狭窄和血管狭窄。
12.权利要求
2的方法，其中所述胆固醇相关性病症选自升高的胆固醇、与升高的胆固醇相关的病况、脂类病症、高脂血症、I型、II型、III型、IV型和V型高脂血症、继发性高甘油三酯血症、高胆固醇血症、黄瘤病和胆固醇乙酰转移酶缺陷。
13.治疗MHF的方法，包括向需要其的对象施用药学有效量的DKK1/4抗体，所述抗体包含选自表5、6、7和8的CDRU CDR2和CDR3区。
14.权利要求
2-13的任一项的方法，其中所述选自表5、6、7和8的⑶R1、⑶R2和⑶R3 区是选自 SEQ ID NO :49-52 的 Vh CDRLSEQ ID NO :53-63 的 Vh CDR2，SEQ ID NO :64-69 的 Vh CDR3，和 SEQ ID NO :70-74 的 / CDRl, SEQ ID NO :75-79 的 / CDR2, SEQ ID NO :80-98 的 /CDR3。
15.权利要求
2-13的任一项的方法，其中所述选自表5、6、7和8的⑶R1、⑶R2和⑶R3 区包括选自以下的共有序列，对于Vh⑶SEQ ID NO :40-43的共有序列，对于Vh⑶R2 SEQ ID NO :44-47的共有序列，对于Vh CDR3 SEQ ID NO :48的共有序列，以及对于Vl CDRl SEQ ID NO :113和116的共有序列，对于/ CDR2 SEQ ID NO :114禾Π 117的共有序列，对于八 CDR3 SEQ ID NO :115 和 118 的共有序列。
专利摘要
提供了使用结合蛋白质靶Dickkopf-1(DKK1)、Dickkopf-4(DKK4)或两者(其中，与DKK1或DKK4或两者的特异性在本文中称为“DKK1/4”)的结合分子及其片段的方法。
文档编号A61P3/10GKCN102421798SQ201080019959
公开日2012年4月18日 申请日期2010年5月6日
发明者A·泰勒, D·R·斯托弗, E·布伦德勒, P·雷, S·M·兰瓦拉 申请人:诺瓦提斯公司导出引文BiBTeX, EndNote, RefMan