一种DNA pulldown方法及试剂盒的利记博彩app
【专利摘要】本发明涉及一种DNA pulldown方法及试剂盒。所述方法包含以下步骤：S1、磁珠预处理：使用BSA(牛血清白蛋白)和寡核苷酸随机引物封闭链霉亲和素标记的磁珠；S2、制备探针?磁珠复合物；S3、提取并预处理细胞核蛋白：向提取核蛋白样品中加入脱氧核糖核酸酶孵育，再加入磁珠孵育，去除磁珠，收集上清；S4、pulldown；S5、蛋白样品的收集。本发明具有如下有益效果：本发明通过预先使用BSA、寡核苷酸随机引物封闭磁珠，降低了磁珠与蛋白、基因组DNA的非特异性结合。本发明通过系统性核酸酶防护，防止核酸酶的污染，增加了实验的稳定性和可靠性，重复性好，简化了实验流程。
【专利说明】
_种DNA pu I I down方法及试剂盒
技术领域
[0001]本发明涉及生物技术领域，尤其涉及一种用于研究DNA与蛋白相互作用的DNApul Idown方法及试剂盒。
【背景技术】
[0002]随着功能基因组学的兴起，蛋白质-DNA相互作用的研究变得越来越重要。蛋白质_DNA相互作用涉及很多生物学功能，如基因调节、DNA修复和DNA重组(ROHS RJIN X1WEST SM，et al.2010.0rigins of specificity in protein—DNA recognit1n.Annu RevB1chem[J]，79:233-269)。现有研究DNA-蛋白相互作用的技术方案有多种，如酵母单杂交(ΠΗ)方法、ChlP-seq方法、凝胶迀移实验(EMSA)和DNA pulIdown方法。
[0003]DNA pulldown方法是一种非常重要的蛋白质-DNA相互作用的研究方法。该方法可以在同一个样品中分离DNA-蛋白复合体。通常，是通过高亲和性的标签(如生物素)标记DNA，标签的目的是固定DNA，通过琼脂糖珠子或磁珠可以分离出生物素化的DNA，从而分离出细胞裂解液中的DNA-蛋白复合体。分离出的蛋白进行洗脱后可以通过Western Blot进行检测，或通过质谱进行筛选(DENG W G，ZHU Y,M0NTER0 A，et al.2003.Quantitativeanalysis of binding of transcript1n factor complex to b1tinylated DNA probeby a streptavidin-agarose pulldown assay.Anal B1chem[J]，323:12-18)0
[0004]DNA pulldown方法具有很多优点，如可以富集低丰度的靶标，可以通过多种方法构建尾端标记的DNA，可以分离出完整的DNA-蛋白复合体，可以联合Western Blot或质谱进行分析等。随着DNA pulldown技术的不断完善，其在生命科学研究及医学领域中扮演的角色愈加重要。
[0005]Kazuhito Yamashita等报道在血管内皮细胞中，通过DNA pulldown实验发现，在低氧情况下HIF-1结合ET-1基因的启动子区域，启动ET-1的表达。进一步的研究发现ET-1启动子中的HIF-1结合区不足以应答低氧反应，还需要附近额外的50bp的序列帮助，此区域包括AP-l、GATA-2、NF-l的结合区。证实了AP-l、GATA-2、NF-l可以稳定HIF-l与ET-l启动子的结合，进一步招募P300/CBP形成ET-1低氧应答复合体(YAMASHITA KjDISCHER D J，HU J，etal.2001.Molecular regulat1n of the endothelin—lgene by hypoxia.Contribut1nsof hypoxia-1nducible factor-1,activator protein-1，GATA_2，AND p300/CBP.J B1lChem[J]，276:12645-12653)0
[0006]Deng WG等使用双生物素化的环氧化酶2(⑶X_2)的启动子作为探针，开展DNApulldown，检测了经过不同处理的人类成纤维细胞的细胞核提取物，发现佛博尔酯或肿瘤坏死因子alpha处理后DNA探针与p300和PCAF的结合增加，但是不影响与Srb7、Med7或TFII(B)的结合，证实在肿瘤中p300和PCAF通过结合C0X-2的启动子启动C0X-2的表达。
[0007]但是，DNA pulIdown实验还存在很多缺点，如DNA探针与蛋白结合的特异性不高，实验过程还会受到核酸酶污染的影响。
【发明内容】
[0008]有鉴于此，有必要针对上述的问题，提供一种DNA pulIdown方法及试剂盒。
[0009]为了实现上述目的，本发明采用如下技术方案:
[0010]一种DNA pulIdown方法，包含以下步骤:
[0011]S1、磁珠预处理:使用BSA(牛血清白蛋白)和寡核苷酸随机引物封闭链霉亲和素标记的磁珠；
[0012]S2、制备探针-磁珠复合物:将步骤SI预处理的磁珠与生物素标记的DNA探针结合；
[0013]S3、提取并预处理细胞核蛋白:向提取的核蛋白样品中加入脱氧核糖核酸酶孵育，再加入未预处理的磁珠孵育，去除磁珠，收集上清；
[OOM] S4、pulIdown:将步骤S3收集的上清加入到步骤S2制备的探针-磁珠复合物中，加入DNA precipitat1n buffer及脱氧核糖核酸酶抑制剂孵育，收集磁珠，用DNAprecipitat1n buffer洗涤磁珠，得到蛋白-探针-磁珠复合物；
[0015]S5、探针-蛋白复合物的收集:将步骤S4制得的蛋白-探针-磁珠复合物加入UreaCHAPS buffer孵育，去除磁珠，收集上清即得探针-蛋白复合物。
[0016]优选地，所述步骤SI磁珠预处理的方法为:用ImL I X TES洗涤80yL链霉亲和素标记的磁珠，去除TES洗涤液，再向磁珠中加入ImL含BSA和寡核苷酸随机引物的I X TES，室温孵育30min后去除TES溶液。
[0017]优选地，所述TES中BSA的浓度为0.05-0.5wt%，寡核苷酸随机引物的浓度为10-20ymol/L0
[0018]优选地，所述步骤SI中寡核苷酸随机引物为20bp以内的DNA序列。
[0019]优选地，所述步骤S2制备探针-磁珠复合物的方法为:向2-5ygDNA探针中加入DNAstructure buffer至100yL，再将其加入步骤SI预处理后的磁珠中，并加入10yL 2XTES,25°C温和旋转混合30-60min，去上清；用I X TES洗涤磁珠两次，去除TES。
[0020]优选地，所述步骤S3中预处理细胞核蛋白的方法为:向1.5 X 17个细胞提取获得的核蛋白提取物中加入5yL DNase和1.6yL DNase Buffer，25°C温和孵育Ih;再加入40yL未预处理的磁珠，4°C温和旋转30min;收集上清液为预处理的核蛋白。
[0021 ] 优选地，所述步骤S3提取细胞核蛋白的方法为:用含0.5mM PMSF的I3BS洗涤1.5 X17个细胞两次，每次4°C、100rpm离心5min，弃上清；加入390yL预冷Buffer 1、4yL 1mg/ml的PMSF溶液、4yL protease inhibitor cocktail和2yL100mM DTT溶液，重悬细胞后，剧烈涡旋10秒钟充分混匀，冰浴101^11;4°(:、140(^-250(^离心5111丨11，弃上清；加入39(^1^冷Buffer 2、4yL 10mg/ml的PMSF溶液、4yL protease inhibitor cocktail和2yL 10mM DTT溶液，涡旋充分重悬沉淀，冰浴20min，每隔2min高速剧烈涡旋15-30秒钟充分混匀;4°C、12，OOOg-16，000g离心1min，弃沉淀，上清为核蛋白提取物；所述Buffer I的配方为:1mMHEPES-K0H(pH 7.9)、1.5mM MgCl2'1mM KCl、0.ImMEDTA和0.4wt%NP_40;所述Buffer 2的配方为50mM HEPES-K0H(pH 7.9)、5mM MgCl2、420mM NaCK0.1mM EDTA和2wt%glycerol(丙三醇)。
[OO22 ] 优选地，所述步骤S4pu 11 down的具体方法为:将步骤S3制备的核蛋白加入到探针-磁珠复合物中，并加入465yL DNA precipitat1n buffer、5yL protease inhibitorcocktail、15yg poly(dI.dC)、5yL lOmg/ml的PMSF(苯甲基横醜氣)溶液、2.5yL 10mMDTT(二硫苏糖醇)、5yL 0.5M EDTA(乙二胺四乙酸)溶液和2.5yL 0.5M EGTA(乙二醇二乙醚二胺四乙酸)溶液；4°C旋转混合孵育30-60min，收集磁珠，4°C，加入975yL DNAprecipitat1n buffer、1yL 1mg/ml|3tlPMSFi§'y^n1yL protease inhibitor cocktail和5yL 10mM DTT溶液，洗涤磁珠，再重复洗涤四次。本发明中选用EDTA作为脱氧核糖核酸酶的抑制剂。
[0023]优选地，所述步骤S5探针-蛋白复合物的收集方法为:向蛋白-探针-磁珠复合物中加入40yL Urea CHAPS buffer和0.4yL 10mM DTT溶液，4°C孵育5_10h，上清即为探针-蛋白复合物。
[0024]一种DNA pulIdown试剂盒，包含下述试剂:
[0025]磁珠及其处理试剂:2X TES溶液，链霉亲和素标记的磁珠，寡核苷酸随机引物;所述寡核苷酸随机引物的浓度为10-20ymol/L;
[0026]DNA处理试剂:DNase，DNase Buffer；
[0027]蛋白提取及处理试剂:BufferI ,Buffer 2 , Urea CHAPS buffer ,proteaseinhibitor cocktail、DTT溶液、PMSF溶液;所述DTT溶液的浓度为100mM，所述PMSF溶液的浓度为 10mg/mL;
[0028]探针及结合处理试剂:DNAstructure buffer ,DNA precipitat1n buffer ,poly(dl.dC)；
[0029]所述Buffer I 的配方为:1mM HEPES_K0H(pH 7.9)、1.5mM MgCl2、10mM KCU0.1mMEDTA和0.4wt%NP-40;所述Buffer 2的配方为50mM HEPES_K0H(pH 7.9)、5mM MgCl2、42OmM NaCl、0.1mM EDTA和2wt%glycerol。
[0030]本发明针对目标区域设计特异性DNA探针，探针经过脱硫生物素标记;链霉亲和素偶联在磁珠上，并和脱硫生物素亲和结合;细胞核提取物与磁珠-探针复合物孵育，作用蛋白分子可以和DNA探针特异性结合;经过洗涤可以将非特异性结合蛋白分子去除；最后，在洗脱液(针对链霉亲和素)进行洗脱，得到目的探针-蛋白复合物，再经过Western Blot或质谱鉴定蛋白质类型。
[0031]与现有技术相比，本发明具有如下有益效果:
[0032]①本发明通过预先使用BSA封闭磁珠，降低了磁珠与蛋白的非特异性结合;本发明通过预先使用寡核苷酸随机引物封闭磁珠，降低了磁珠与基因组DNA的非特异性结合。BSA和寡核苷酸随机引物的大小正合适，既能封闭磁珠增强实验的特异性，又不会过大而影响探针与蛋白的结合。
[0033]②本发明采用脱氧核糖核酸酶预处理蛋白样品，采用未预处理的磁珠对蛋白样品进行预洗涤，除去蛋白样品内的基因组DNA，防止其缠绕磁珠从而影响耦连在磁珠上的DNA探针与蛋白质的结合，再采用脱氧核糖核酸酶抑制剂灭活脱氧核糖核酸酶。本发明通过系统性核酸酶防护，防止核酸酶的污染，增加了实验的稳定性和可靠性，重复性好，简化了实验流程。
[0034]③本发明中磁珠首先与探针孵育，去除多余探针后再与蛋白孵育，较传统探针先与蛋白孵育再与磁珠孵育或探针、蛋白和珠子同时孵育极大的节约了磁珠的使用量，节约实验成本。本发明采用磁珠取代了琼脂糖珠，省掉离心的步骤，节约试验时间。同时，采用磁珠法洗涤取代了琼脂糖珠离心的步骤，可以使上清液去除的更加彻底，提高反应的特异性。
【附图说明】
[0035]图1为不同方法pulldown效果图。
【具体实施方式】
[0036]为了更好的说明本发明，下面结合附图和【具体实施方式】做进一步说明。本发明中所用试剂或仪器均可由市场购得，使用的检测方法等都是本领域所熟知的，在此不再赘述。
[0037]实施例1
[0038]本实施例中针对目标区域P53蛋白设计特异性DNA探针，探针经过脱硫生物素8-oxoG标记。探针的设计和标记方法是本领域技术人员所熟知的，在此不再赘述。链霉亲和素偶联在磁珠(BeaverBeads? Streptavidin，海狸生物科技有限公司)上，并和脱硫生物素亲和结合;细胞核提取物与磁珠-DNA探针孵育，作用蛋白分子可以和探针特异性结合;经过洗涤可以将非特异性结合蛋白分子去除;最后，再用洗脱液(针对链霉亲和素)进行洗脱，得到目的探针-蛋白复合物，再经过Western Blot鉴定蛋白质类型。具体步骤如下:
[0039]S1、磁珠预处理
[0040]①取SOyL链霉亲和素标记的磁珠置于EP管中，加入ImLI XTES洗涤磁珠；
[0041 ] ②置于磁力架上去除TES洗涤液，向磁珠加入ImL含0.5wt%BSA和ΙΟμπιοΙ/L寡核苷酸随机引物的I XTES，室温孵育30min后置于磁力架上去除TES溶液。所述寡核苷酸随机引物为20bp以内的DNA序列。
[0042]S2、制备探针-磁珠复合物
[0043]①向2_5yg DNA探针中加入DNA structure buffer至100yL，再将其加入步骤SI预处理的磁珠中，并加入10yL 2XTES，25°C旋转温和混合30min-60min，置于磁力架上去上清;
[0044]②加入0.35mL I XTES，25°C温和旋转洗涤磁珠5min，置于磁力架上去除洗涤液；
[0045]③重复步骤②一次。
[0046]S3、提取并预处理细胞核蛋白
[0047]S31、提取核蛋白
[0048]①用含0.5mM PMSF的PBS洗涤I.5 X 17个Hela细胞两次，每次4°C 100rpm离心5min，弃上清；
[0049]②加入390yL预冷Bufferl、4yL 10mg/mL的PMSF(Thermo Fisher)溶液、4yLprotease inhibitor cocktail (Thermo Fisher)和2yL 10mM DTT(Thermo Fisher)溶液，重悬细胞后，剧烈涡旋10秒钟充分混匀，冰浴I Omin;所述Buffer I的配方为:I OmM HEPES-K0H(pH 7.9)、1.5mM MgCl2、10mM KCl、0.ImMEDTA和0.4wt%NP_40;
[0050]③4°C，1400g_2500g离心5min，弃上清；
[0051 ]④加入390yL预冷Buffer 2、4yL 10mg/mL的PMSF溶液、4yL protease inhibitorcocktail和2yL 10mM DTT溶液，涡旋充分重悬沉淀，冰浴20min，每隔2min高速剧烈涡旋15-30秒钟充分混匀；所述Buffer 2的配方为50mM HEPES_K0H(pH 7.9)、5mM MgCl2、420mMNaCl、0.1mM EDTA和2wt%glycerol;
[0052]⑤4°C，12，OOOg-16，OOOg离心1min，弃沉淀，上清为核蛋白提取物；
[0053]⑥考马斯亮蓝或BCA试剂盒测定蛋白质浓度；
[0054]⑦蛋白样品-80°C保存备用。
[0055]S32、预处理核蛋白
[0056]①向上述制备的核蛋白提取物中加入5yL DNase (TURBO? DNase)、1.6yL DNaseBuffer (TURBO? DNase Buffer)，室温 25°C 温和孵育 lh;
[0057]②向蛋白样品中加入40yL未预处理的磁珠，40C温和旋转30min;
[0058]③磁力架上收集磁珠，将上清液预处理的核蛋白转移到新的EP管中。
[0059]S4、puIIdown
[0000]①将制备的核蛋白加入到探针-磁珠复合物中，并加入465yL DNA precipitat1nbuffer、15yg poly(dI.dC)、5yL lOmg/mL的PMSF溶液、5yL protease inhibitorcocktail、2.5yL 10mM DTT溶液、5yL 0.5M EDTA溶液和2.5yL 0.5M EGTA溶液;
[0061]②4°C旋转混合孵育30min;
[0062]③磁力架上收集磁珠，去除上清液；
[0063]④4°C，加入975yLDNA precipitat1n buffer、1yL 10mg/mL的PMSF溶液、1yLprotease inhibitor cocktail和5yL 10mM DTT溶液，洗涤磁珠，去除非特异性结合的蛋白，再重复洗涤四次，得到蛋白-探针-磁珠复合物。
[0064]S5、蛋白样品收集
[0065]①向蛋白-探针-磁珠复合物中加入40yL Urea CHAPS buffer和0.4yL 10mM DTT溶液，4°C孵育5-10h。
[0066]②磁力架上收集磁珠，上清即为探针-蛋白复合物，将上清转移到新的管子中。
[0067]③产物置于_80°C保存，供进一步Western Blot分析。
[0068]为了更好的说明本发明的效果，发明人还进行了两组对比实验。
[0069]对比例I使用的方法简述为:取2OOyg的细胞核提取物在DNA沉淀缓冲液(2OmMHepes-K0H(pH7.9)、ImM MgC12、80mM KCl、0.2mM EDTA、1wt %glycero1、0.5mMdith1threitol、0.lwt%Triton X_100、lmM phenylmethyIsulfonyI fluoride和protease inhibitor mixture)中重悬，在体系中加入15yg poly(dI.dC)，加入生物素化的寡核苷酸探针，4°C混勾30min，然后加入50yL亲和素的磁珠(Dynal)，4°C混勾30min，通过磁铁收集磁珠，再通过DNA沉淀缓冲液洗2次，捕获的蛋白用Western Blot检测(ΤΑΚΑΚΙ H,ICHIYAMA K,KOGA K,et al.2008.STAT6Inhibits TGF-betal-mediated Foxp3induct1nthrough direct binding to the Foxp3promoter,which is reverted by retinoicacid receptor.J B1l Chem[J],283:14955-14962)。
[0070]对比例2使用的方法简述为:通过加入生物素化的引物(Invitrogen)PCR扩增的方法获得生物素化的DNAs。向蛋白中加入免疫纯化的亲和素-琼脂糖珠子(Pierce)孵育lh，然后加入Iyg生物素化的DNA通过转动摇床混匀12K200 X g离心60s，再把沉淀用预冷的TBS缓冲液(20mM Tris,150mM NaCl)洗三次，最后进行Western Blot检测(ΧΙΕ Y,ZHANG Y,ZHAOX,et al.2016.A CAPS-based binding assay provides sem1-quantitative validat1nof protein-DNA interact1ns.Sci Rep[J],6:21030)0
[OO71 ] 使用本实施例和对比例的方法分别验证8-oxoG-DNA探针对P53蛋白的pulldown效果。泳道I为10 % input组;泳道2为LacZ组，使用LacZ DNA探针，此孔作为阴性对照;泳道3为pulIdown组，使用实验组DNA探针。图1A为本发明方法pulIdown效果图；图1B为按照对比例I所述方法pu 11 down效果图；图1C为按照对比例2所述方法pu 11 do wn效果图。可见本发明相对于Takaki报道方法和Xie报道方法的Western Blot的条带拖尾现象更少，说明本试剂盒蛋白富集效率更高，特异性更好。相对于Xie报道的方法中的几乎不能检出的结果，本发明具有更高的灵敏度。
[0072]以上所述实施例仅表达了本发明的几种实施方式，其描述较为具体和详细，但并不能因此而理解为对本发明专利范围的限制。应当指出的是，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，这些都属于本发明的保护范围。因此，本发明专利的保护范围应以所附权利要求为准。
【主权项】
1.一种DNA pulIdown方法，其特征在于，包含以下步骤: 51、磁珠预处理:使用BSA和寡核苷酸随机引物封闭链霉亲和素标记的磁珠； 52、制备探针-磁珠复合物:将步骤SI预处理的磁珠与生物素标记的DNA探针结合； 53、提取并预处理细胞核蛋白:向提取核蛋白样品中加入脱氧核糖核酸酶孵育，再加入未预处理的磁珠孵育，去除磁珠，收集上清； 54、Pu11 down:将步骤S 3制备的蛋白样品加入到步骤S 2制备的探针-磁珠复合物中，加入DNA precipitat1n buffer及脱氧核糖核酸酶抑制剂孵育，收集磁珠，用DNAprecipitat1n buffer洗涤磁珠，得到蛋白-探针-磁珠复合物； 55、探针-蛋白复合物的收集:将步骤S4制得的蛋白-探针-磁珠复合物加入UreaCHAPSbuff er孵育，去除磁珠，收集上清即得探针-蛋白复合物。2.根据权利要求1所述的DNApulIdown方法，其特征在于，所述步骤SI磁珠预处理的方法为:用ImL I XTES洗涤80yL链霉亲和素标记的磁珠，去除TES洗涤液，再向磁珠中加入ImL含BSA和寡核苷酸随机引物的I XTES，室温孵育30min后去除TES溶液。3.根据权利要求2所述的DNApulIdown方法，其特征在于，所述TES中BSA的浓度为0.05-0.5wt%，寡核苷酸随机引物的浓度为10-20ymol/L。4.根据权利要求1或2所述的DNApulIdown方法，其特征在于，所述步骤SI中寡核苷酸随机引物为20bp以内的DNA序列。5.根据权利要求1所述的DNApulIdown方法，其特征在于，所述步骤S2制备探针-磁珠复合物的方法为:向2_5yg DNA探针中加入DNA structure buffer至lOOyL，再将其加入步骤SI中预处理的磁珠中，并加入10yL 2 X TES，25 °C温和旋转混合30_60min，去上清；用I XTES洗涤磁珠两次，去除TES。6.根据权利要求1所述的DNApul I down方法，其特征在于，所述步骤S3中预处理细胞核蛋白的方法为:向1.5 X 17个细胞提取获得的核蛋白提取物中加入5yL DNase和1.6yLDNase Buffer，25°C温和孵育Ih ；再加入40yL未预处理的磁珠，4°C温和旋转30min ；上清液为预处理的核蛋白。7.根据权利要求1所述的DNApulIdown方法，其特征在于，所述步骤S3提取细胞核蛋白的方法为:用含0.5mM PMSF的PBS洗涤1.5 X 17个细胞两次，每次4°C、100rpm离心5min，弃上清；加入390yL预冷Buffer l、4yL 10mg/mL的PMSF溶液、4yL protease inhibitorcocktail和2yL 10mM DTT溶液，重悬细胞后，剧烈涡旋10秒钟充分混匀，冰浴1min;4°C、1400g-2500g离心5min，弃上清；加入390yL冷Buffer 2、4yL 10mg/mL的PMSF溶液、4yLprotease inhibitor cocktail和2yL 10mM DTT溶液，祸旋充分重悬沉淀，冰浴20min，每隔211^11高速剧烈涡旋15-30秒钟充分混匀;4°(:、12，00(^-16，00(^离心101^11，弃沉淀，上清为核蛋白提取物；所述Bufferl 的配方为:1mM HEPES-K0H、1.5mM MgCl2、1mM KCl、0.1111]\^0了4和0.4￥七％肥-40;所述81^€61 2的配方为50mM HEPES-K0H、5mM MgCl2、420mMNaCl、0.1mM EDTA和2wt%glycerol。8.根据权利要求1所述的DNApulIdown方法，其特征在于，所述步骤S4pulIdown的具体方法为:将步骤S3制备的核蛋白加入到探针-磁珠复合物中，并加入465yL DNAprecipitat1n buffer、5yL protease inhibitor cocktail、15yg poly(dI.dC)、5yLlOmg/mL的PMSF溶液、2.5yL 10mM DTT溶液、5yL 0.5M EDTA溶液和2.5yL 0.5M EGTA溶液;4°C旋转混合孵育30_60min，收集磁珠，4°C，加入975yL DNA precipitat1n buffer、10yLlOmg/mL的PMSF溶液、1yL protease inhibitor cocktail和5yL 10mM DTT溶液，洗涤磁珠，再重复洗涤四次。9.根据权利要求1所述的DNApulIdown方法，其特征在于，所述步骤S5蛋白样品的收集方法为:向蛋白-探针-磁珠复合物中加入40yL Urea CHAPSbuffer和0.4yL 10mM DTT溶液，4 °C孵育5-1 Oh，上清即为探针-蛋白复合物。10.一种DNA pulIdown试剂盒，其特征在于，包含下述试剂: 磁珠及其处理试剂:2 X TES溶液，链霉亲和素标记的磁珠，寡核苷酸随机引物;所述寡核苷酸随机引物的浓度为10-20ymol/L; DNA处理试剂:DNase，DNase Buffer； 蛋白提取及处理试剂:Buffer I ,Buffer 2 ,Urea CHAPS buffer ,protease inhibitorcocktail，10mM DTT溶液，lOmg/mL的PMSF溶液； 探针及结合处理试剂:DNA structure buffer ,DNA precipitat1n buffer ,poly(dl.dC)； 所述 Buffer I 的配方为:1mM HEPES-K0H、I.5mM MgCl2、10mM KCl、0.1mMEDTA和 0.4wt%NP-40;所述Buffer 2的配方为50mM HEPES-KOH^5mM MgCl2、420mM NaCK0.1mM EDTA和2wt%glycerol。
【文档编号】G01N33/68GK106093437SQ201610633292
【公开日】2016年11月9日
【申请日】2016年8月3日 公开号201610633292.1, CN 106093437 A, CN 106093437A, CN 201610633292, CN-A-106093437, CN106093437 A, CN106093437A, CN201610633292, CN201610633292.1
【发明人】王晓香, 董先辉, 张娟, 曾健, 周剑
【申请人】广州伯信生物科技有限公司