一种基于XBP1和XBP1s表达水平的检测胃癌组织的试剂盒的利记博彩app
【专利摘要】本发明涉及一种基于XBP1和XBP1s表达水平的检测胃癌组织的试剂盒，包含以下试剂：用于检测XBP1和XBP1s的蛋白水平的蛋白质检测试剂组和用于检测XBP1和XBP1s的mRNA水平的核酸检测试剂组；所述蛋白质检测试剂组包含抗XBP1抗体；所述核酸检测试剂组包含检测引物组；所述XBP1的蛋白质序列如SEQ ID NO:1所示，所述XBP1的cDNA编码序列如SEQ ID NO:2所示；所述XBP1s的蛋白质序列如SEQ ID NO:3所示，所述XBP1s的cDNA编码序列如SEQ ID NO:4所示。使用本发明，可有效地甄别正常组织和胃癌组织，既可用于科研工作中，也有助于胃癌早期诊断。
【专利说明】
一种基于XBP1和XBP1 s表达水平的检测胃癌组织的试剂盒
技术领域
[0001] 本发明涉及肿瘤检测领域，更特别地，涉及一种检测胃癌组织的试剂盒。
【背景技术】
[0002] 我国是胃癌高发国家，其发病率和死亡率分别高居全部恶性肿瘤的第3位和第2 位。由于胃癌起病隐匿，早期多无明显症状，不易觉察，使得胃癌的早期发现非常困难。特别 是在我国，超过80%的胃癌在确诊时就已处于进展期，预后很差，严重威胁着人们的生命健 康。
[0003] 目前，除了影像学检查和内镜检查之外，生物大分子肿瘤标志物的检测也可用于 胃癌的诊断。临床上常用的生物大分子肿瘤标志物如癌胚抗原(CEA)、糖蛋白类抗原(CA19-9、CA125)能提高体内恶性肿瘤特别是胃肠道恶性肿瘤的检出率，但这些标志物并不能做到 早期高灵敏度、高特异性地诊断胃癌。由于体内各器官分化来源、肿瘤的成瘤原因以及肿瘤 分泌的肿瘤因子均不相同，因此要特异性地、高灵敏地早期检测出某一种特定肿瘤，仍是一 项很庞大的课题。
[0004] 内质网是一种重要的真核细胞器，主要负责可溶性蛋白和膜蛋白的生物合成、折 叠以及修饰，同时也是细胞内的动态Ca2+储存库。由于病毒感染、药物损伤等原因引起的内 质网中出现错误折叠、或未折叠蛋白在内质网腔内聚集以及Ca 2+平衡紊乱的状态称为内质 网应激(endoplasmic reticulum stress，ERS)。为了确保蛋白折叠的正确性以及预防非折 叠或者错误折叠蛋白在细胞内的聚集，抵抗ERS的不利作用，细胞初期呈现出保护性的未折 叠蛋白反应(Unfold Protein Response，UPR)，其改变细胞的转录和翻译程序以缓解ERS， 因此一定程度的ERS能激活细胞保护性适应机制。而严重的应激损伤内质网功能，则引发细 胞的自发性死亡程序，最终诱导细胞凋亡。内质网应激发生后可通过IRE1、PERK和ATF6三个 重要蛋白诱导三种不同的信号途径来介导UPR。而正确的蛋白折叠和转录后修饰需要大量 的内质网分子伴侣蛋白的参与，比如GRP78、f丐连接蛋白（calnexin)、f丐网蛋白 (calreticulin，CALR)和蛋白质二硫键异构酶(protein disulfide isomerases，PDI)等。
[0005] X盒连接蛋白l(X-box binding protein-1，XBP1)，以活化形式XBPls来激活目的 基因的表达，其功能非常庞杂。它一方面促进细胞适应环境在缺氧条件下生存和增殖，另一 方面诱导蛋白折叠、ER相关蛋白降解(ERAD)、蛋白易位和蛋白分泌来减轻ERS。在一些研究 中也发现，ERS激活有助于对抗肿瘤。特别是对抗肠道肿瘤的发生方面，XBP1具有保护作用。
【发明内容】
[0006] 发明人在研究胃癌的过程中，发现胃癌患者的胃癌组织样本中XBP1的表达受到显 著抑制。在该发现的基础上，本发明提供了一种基于XBP1和XBPls表达水平的检测胃癌组织 的试剂盒，包含以下试剂：用于检测XBP1和XBPls的蛋白水平的蛋白质检测试剂组和用于检 测XBP1和XBP1 s的mRNA水平的核酸检测试剂组；
[0007] 所述蛋白质检测试剂组包含抗XBP1抗体;所述核酸检测试剂组包含检测引物组；
[0008] 所述XBP1的蛋白质序列如SEQ ID N0:1所示，所述XBP1的cDNA编码序列如SEQ ID NO: 2所示；
[0009] 所述XBPls的蛋白质序列如SEQ ID N0:3所示，所述XBPls的cDNA编码序列如SEQ ID NO:4所示。
[0010] 进一步地，所述蛋白质检测试剂组中还包含针对所述抗XBP1抗体的具有显示标志 物的二抗、与所述显示标志物对应的显示系统。所述显示标志物可为辣根过氧化物酶，所述 显示系统可为DAB显示系统或ECL显示系统。
[0011] 进一步地，所述蛋白质检测试剂组中还包含上样量标度，例如β-actin，以保证上 样量相同。
[0012] 进一步地，所述检测引物对由如SEQ ID N0:5所示序列的引物1、如SEQ ID N0:6所 示序列的引物2、如SEQ ID NO:7所示序列的引物3和如SEQ ID NO:8所示序列的引物4组成。 其中，，所述引物1与所述引物2用于检测所述XBP1的mRNA水平，所述引物3和所述引物4用于 检测所述XBP1 s的mRNA水平。
[0013] 进一步地，所述核酸检测试剂组还包含逆转录酶及其缓冲液、荧光探针、dNTP、RNA 酶抑制剂。
[0014] 使用本发明，可有效地甄别正常组织和胃癌组织，既可用于科研工作中，也有助于 胃癌早期诊断。
【附图说明】
[0015] 图1为使用本发明的试剂盒检测正常组织和胃癌组织中的XBP1以及XBPls蛋白含 量的Westren blot图；
[0016] 图2为使用本发明的试剂盒检测正常组织和胃癌组织中的XBP1 mRNA水平的统计 图。
[0017]图3为使用本发明的试剂盒检测正常组织和胃癌组织中的XBPls mRNA水平的统计 图。
【具体实施方式】
[0018]以下结合实施例和附图对本发明的原理和特征进行描述，所举实例只用于解释本 发明，并非用于限定本发明的范围。
[0019] 发明人在研究胃癌的过程中对ESR蛋白例如CALR、PDIA3、H)IA6和GRP94进行了检 测，发现在胃癌组织中以上蛋白质的表达均呈不同程度的升高，通过进而研究ERS相关蛋白 的信号通路上的因子，发明人意为地发现，XPB1和XPBls的mRNA水平和蛋白质水平在胃癌组 织中都显示出显著降低，这提示，XPB1和XPBls的表达水平可用于鉴别胃癌组织和正常胃部 组织。
[0020] 实施例1基于XBP1和XPBls表达水平的检测胃癌组织的试剂盒
[0021] 本实施例的试剂盒包含以下试剂：
[0022] 1)用于检测XBP 1和XPB1 s的蛋白水平的蛋白质检测试剂组，包含抗XBP 1抗体 (abcam3715，Abcam)、抗XPBls抗体（）、辣根过氧化物酶标记的二抗、DAB显示系统、抗β-actin抗体；
[0023] 2)用于检测XBP1和XPBls mRNA水平的核酸检测试剂组，包含如SEQ ID N0:5所示 序列的引物1、如SEQ ID NO :6所示序列的引物2、如SEQ ID NO :7所示序列的引物3和如SEQ ID N0:8所示序列的引物4,以及逆转录酶M-MLV及其缓冲液、荧光探针SYBR-Green I、dNTP、 RNA酶抑制剂。
[0024] 实施例2Western blot测定XBP1和XPBls的表达
[0025]从正常组织和胃癌组织中提取总蛋白，进行SDS-PAGE电泳。使用蛋白质检测试剂 组，按照常规的Western blot法，对总蛋白中的XBP1和XPBls分别用抗XBP1抗体和抗XPBls 抗体进行染色，结果如图1所示，胃癌组织(T泳道）中XBP1和XPBls的蛋白含量显著低于正常 组织(N泳道）。
[0026] 实施例3
[0027]从正常组织和胃癌组织中提取总RNA，使用核酸检测试剂组，按照常规的一步式 RT-PCR法，用引物1和引物2检测总RNA中的XBP1 mRNA的含量，用引物3和引物4检测总RNA中 的XBP1 s mRNA的含量。结果如图2和图3所示，胃癌组织中XBP1和XPB1 s的mRNA水平远低于正 常组织。
[0028]以上所述仅为本发明的较佳实施例，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和 原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。
【主权项】
1. 一种基于XBP1和XBPls表达水平的检测胃癌组织的试剂盒，其特征在于，包含以下试 剂：用于检测XBP1和XBP1 s的蛋白水平的蛋白质检测试剂组和用于检测XBP1和XBP1 s的mRNA 水平的核酸检测试剂组； 所述蛋白质检测试剂组包含抗XBP1抗体;所述核酸检测试剂组包含检测引物组； 所述XBP1的蛋白质序列如SEQ ID N0:1所示，所述XBP1的cDNA编码序列如SEQ ID N0:2 所示； 所述XBPls的蛋白质序列如SEQ ID N0:3所示，所述XBPls的cDNA编码序列如SEQ ID NO: 4所示。2. 根据权利要求1所述的检测胃癌组织的试剂盒，其特征在于，所述蛋白质检测试剂组 中还包含针对所述抗XBP1抗体的具有显示标志物的二抗、与所述显示标志物对应的显示系 统。3. 根据权利要求2所述的检测胃癌组织的试剂盒，其特征在于，所述显示标志物为辣根 过氧化物酶。4. 根据权利要求2所述的检测胃癌组织的试剂盒，其特征在于，所述显示系统为DAB显 示系统或ECL显示系统。5. 根据权利要求1所述的检测胃癌组织的试剂盒，其特征在于，所述蛋白质检测试剂组 中还包含上样量标度。6. 根据权利要求5所述的检测胃癌组织的试剂盒，其特征在于，所述上样量标度为抗β-actin抗体。7. 根据权利要求1所述的检测胃癌组织的试剂盒，其特征在于，所述检测引物组由如 SEQ ID NO:5所示序列的引物1、如SEQ ID NO:6所示序列的引物2、如SEQ ID NO:7所示序列 的引物3和如SEQ ID NO:8所示序列的引物4组成。8. 根据权利要求1-7中任一项所述的检测胃癌组织的试剂盒，其特征在于，所述核酸检 测试剂组还包含逆转录酶及其缓冲液、荧光探针、dNTP、RNA酶抑制剂。
【文档编号】G01N33/574GK106093393SQ201610387223
【公开日】2016年11月9日
【申请日】2016年6月2日 公开号201610387223.7, CN 106093393 A, CN 106093393A, CN 201610387223, CN-A-106093393, CN106093393 A, CN106093393A, CN201610387223, CN201610387223.7
【发明人】田梗, 王滨, 姜文国, 米佳, 李旭日, 杨春华, 刘芳
【申请人】滨州医学院