一种豆浆中大豆异黄酮的检测方法
【专利摘要】本发明公开了一种豆浆中大豆异黄酮的检测方法，包括如下具体步骤：豆浆样品离心取上清液，经滤膜过滤后加入正己烷溶液中，于涡旋混合仪中震荡脱脂，吹干剩余的正己烷溶液；之后加入丙酮溶液，超声处理后加入高压釜中，高压提取后大孔树脂震荡吸附，收集洗脱液，加入旋转蒸发器中除去溶剂，得到大豆异黄酮提取物。本发明通过将高压浸提与有机溶液萃取相结合的方法提取豆浆中的大豆异黄酮，在浸提前对提取液进行超声预处理，超声波的辐射压强可以增大物质分子运动频率和速度，增加溶剂穿透力，从而加速目标分子进入溶剂，促进提取的进行，本发明能够快速提取大豆异黄酮样品，为豆浆中大豆异黄酮含量测定提供了一种行之有效的检测手段。
【专利说明】
一种豆浆中大豆异黄酮的检测方法
技术领域
[0001]本发明属于食物安全检测行业中的一种样品提取方法，特别是涉及一种豆浆中大豆异黄酮的检测方法。
【背景技术】
[0002]大豆异黄酮是存在于大豆等豆科植物中的一类重要生物活性物质。近来研究发现，大豆异黄酮具有抗癌、防治动脉硬化、抗炎等多种药理作用。从大豆异黄酮中分离得到的染料木素，其结构与17-β雌二醇的结构相似，能与内源性雌激素受体结合，发挥雌激素效应，同时又没有雌二醇的副作用，被人们称为植物雌激素。大豆异黄酮是一种混合物，主要为两类:苷元及其葡萄糖苷。
[0003]豆浆作为中国人喜食的豆制品，富含蛋白质和钙、铁、磷、锌等几十种矿物质以及维生素Α、维生素B等多种维生素。豆浆中蛋白质的含量比牛奶的还要高，另外豆浆中还含有卵磷脂、大豆皂甙、大豆异黄酮等有防癌健脑意义的特殊保健因子。近年来我国政府提出了一系列政策和措施以促进大豆和大豆制品的生产及推广。特别是“国家大豆行动计划”和“学生饮用豆奶工程”的实施，对我国大豆和大豆制品的生产与利用起到了积极的作用。我国居民饮用豆浆方式主要有家庭自磨豆浆及市售豆浆粉冲制等。
【发明内容】
[0004]本发明的目的在于提供一种豆浆中大豆异黄酮的检测方法，通过将高压浸提与有机溶液萃取相结合的方法在浸提前对提取液进行超声预处理，保证提取样品的可靠性，为豆浆中大豆异黄酮含量测定提供了一种行之有效的检测手段。
[0005]本发明是通过以下技术方案实现的:
[0006]—种豆浆中大豆异黄酮的检测方法，包括如下具体步骤:
[0007]S1、豆浆样品离心取上清液，经滤膜过滤后得到豆浆粗提样品；
[0008]S2、取SI中得到的豆浆粗提样品，加入正己烷溶液中，将该正己烷悬液加入涡旋混合仪中震荡脱脂，吹干剩余的正己烷溶液；
[0009]S3、取S2中脱脂后的豆浆粗提样品加入丙酮溶液，固液比为1:15，将该有机悬液超声处理20min，超声功率800-1200W;
[0010]S4、将S3中制备的超声处理后的丙酮有机悬液加入高压釜中，高压提取后得到丙酮提取液；
[0011]S5、称取大孔树脂加入S4中得到的丙酮提取液中，震荡吸附2-4h，之后用蒸馏水洗涤大孔树脂，过滤后加入丙酮溶液洗脱震荡l_2h，收集洗脱液，将所述洗脱液加入旋转蒸发器中除去溶剂，得到大豆异黄酮提取物；
[0012]S6、采用紫外分光光度法测定S5中得到的大豆异黄酮提取物中大豆异黄酮的含量。
[0013]进一步地，所述SI中离心速率为8000-12000r/min，离心时间为30_60min。
[0014]进一步地，SI中所述滤膜为0.1-0.18μηι。
[0015]进一步地，所述S2中豆浆粗提样品与正己烷溶液固液比为1:1O。
[0016]进一步地，所述S4中高压提取压力为14atm个大气压，高压提取时间为1-1.5h。
[0017]进一步地，所述S5中大孔树脂与丙酮提取液固液比为1:15。
[0018]本发明具有以下有益效果:
[0019]本发明通过将高压浸提与有机溶液萃取相结合的方法提取豆浆中的大豆异黄酮，在浸提前对提取液进行超声预处理，超声波的辐射压强可以增大物质分子运动频率和速度，增加溶剂穿透力，从而加速目标分子进入溶剂，促进提取的进行，本发明能够快速提取大豆异黄酮样品，保证提取样品的可靠性，为豆浆中大豆异黄酮含量测定提供了一种行之有效的检测手段。
[0020]当然，实施本发明的任一产品并不一定需要同时达到以上所述的所有优点。
【具体实施方式】
[0021]本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其它实施例，都属于本发明保护的范围。
[0022]实施例1
[0023]S1、取豆浆样品于25°C条件下以8000r/min离心30min，取上清液经Ο.?μπι滤膜过滤，得到豆浆粗提样品；
[0024]S2、取SI中得到的豆浆粗提样品，加入正己烷溶液中，固液比为1:1O，将该正己烷悬液加入至涡旋混合仪中震荡脱脂I次，吹干剩余的正己烷溶液；
[0025]S3、取S2中脱脂后的豆浆粗提样品加入丙酮溶液，固液比为1:15，将该有机悬液于25°C条件下超声处理20min，超声功率800w;
[0026]S4、将S3中制备的超声处理后的丙酮有机悬液加入高压釜中，于14atm个大气压下提取lh，得到丙酮提取液；
[0027]S5、称取大孔树脂加入S4中得到的丙酮提取液中，固液比为1:15，震荡吸附2h，之后用蒸馏水洗涤大孔树脂，过滤后加入丙酮溶液洗脱震荡Ih，收集洗脱液；
[0028]将所述洗脱液加入旋转蒸发器中除去溶剂，得到大豆异黄酮提取物；
[0029]S6、采用紫外分光光度法测定S5中得到的大豆异黄酮提取物中大豆异黄酮的含量；
[0030]所述紫外分光光度法包括如下步骤:称取5mg干燥至恒重的染料木素，用0.0lmol/L NaOH配置样品溶液50mL。分别取0.1、0.2、0.3、0.4、0.5mL样品溶液，加入0.0ImoI/L NaOH稀释至1mL，以0.0lmol/L NaOH溶液为空白溶液，放入紫外分光光度计中测量27Inm处吸光度，以染料木素浓度(yg/mL)为横坐标，以吸光度为纵坐标绘制标准曲线；
[0031]称取S5中得到的大豆异黄酮提取物20mg加入0.01mol/L NaOH配置成50mL样品溶液，放入紫外分光光度计中测量271nm处吸光度，计算大豆异黄酮的含量。
[0032]实施例2
[0033]S1、取豆楽样品于25°C条件下以12000r/min离心60min，取上清液经0.18μηι滤膜过滤，得到豆浆粗提样品；
[0034]S2、取SI中得到的豆浆粗提样品，加入正己烷溶液中，固液比为1:1O，将该正己烷悬液加入至涡旋混合仪中震荡脱脂3次，吹干剩余的正己烷溶液；
[0035]S3、取S2中脱脂后的豆浆粗提样品加入丙酮溶液，固液比为1:15，将该有机悬液于25°C条件下超声处理20min，超声功率1200w;
[0036]S4、将S3中制备的超声处理后的丙酮有机悬液加入高压釜中，于14atm个大气压下提取I.5h，得到丙酮提取液；
[0037]S5、称取大孔树脂加入S4中得到的丙酮提取液中，固液比为1:15，震荡吸附4h，之后用蒸馏水洗涤大孔树脂，过滤后加入丙酮溶液洗脱震荡2h，收集洗脱液；
[0038]将所述洗脱液加入旋转蒸发器中除去溶剂，得到大豆异黄酮提取物；
[0039]S6、采用紫外分光光度法测定S5中得到的大豆异黄酮提取物中大豆异黄酮的含量；
[0040]所述紫外分光光度法包括如下步骤:称取5mg干燥至恒重的染料木素，用0.0lmol/L NaOH配置样品溶液50mL。分别取0.1、0.2、0.3、0.4、0.5mL样品溶液，加入0.01mol/L NaOH稀释至1mL，以0.0lmol/L NaOH溶液为空白溶液，放入紫外分光光度计中测量27Inm处吸光度，以染料木素浓度(yg/mL)为横坐标，以吸光度为纵坐标绘制标准曲线；
[0041 ] 称取S5中得到的大豆异黄酮提取物30mg加入0.0lmol/L NaOH配置成50mL样品溶液，放入紫外分光光度计中测量271nm处吸光度，计算大豆异黄酮的含量。
[0042]实施例3
[0043]S1、取豆楽样品于25°C条件下以10000r/min离心45min，取上清液经0.15μηι滤膜过滤，得到豆浆粗提样品；
[0044]S2、取SI中得到的豆浆粗提样品，加入正己烷溶液中，固液比为1:1O，将该正己烷悬液加入至涡旋混合仪中震荡脱脂2次，吹干剩余的正己烷溶液；
[0045]S3、取S2中脱脂后的豆浆粗提样品加入丙酮溶液，固液比为1:15，将该有机悬液于25°C条件下超声处理20min，超声功率100w;
[0046]S4、将S3中制备的超声处理后的丙酮有机悬液加入高压爸中，于14atm个大气压下提取I.2h，得到丙酮提取液；
[0047]S5、称取大孔树脂加入S4中得到的丙酮提取液中，固液比为1:15，震荡吸附3h，之后用蒸馏水洗涤大孔树脂，过滤后加入丙酮溶液洗脱震荡I.5h，收集洗脱液；
[0048]将所述洗脱液加入旋转蒸发器中除去溶剂，得到大豆异黄酮提取物；
[0049]S6、采用紫外分光光度法测定S5中得到的大豆异黄酮提取物中大豆异黄酮的含量；
[0050]所述紫外分光光度法包括如下步骤:称取5mg干燥至恒重的染料木素，用0.0lmol/L NaOH配置样品溶液50mL。分别取0.1、0.2、0.3、0.4、0.5mL样品溶液，加入0.01mol/L NaOH稀释至1mL，以0.0lmol/L NaOH溶液为空白溶液，放入紫外分光光度计中测量27Inm处吸光度，以染料木素浓度(yg/mL)为横坐标，以吸光度为纵坐标绘制标准曲线；
[0051 ] 称取S5中得到的大豆异黄酮提取物25mg加入0.01mol/L NaOH配置成50mL样品溶液，放入紫外分光光度计中测量271nm处吸光度，计算大豆异黄酮的含量。
[0052]本发明通过将高压浸提与有机溶液萃取相结合的方法提取豆浆中的大豆异黄酮，在浸提前对提取液进行超声预处理，超声波的辐射压强可以增大物质分子运动频率和速度，增加溶剂穿透力，从而加速目标分子进入溶剂，促进提取的进行，本发明能够快速提取大豆异黄酮样品，保证提取样品的可靠性，为豆浆中大豆异黄酮含量测定提供了一种行之有效的检测手段。
[0053]以上内容仅仅是对本发明所作的举例和说明，所属本技术领域的技术人员对所描述的具体实施例做各种各样的修改或补充或采用类似的方式替代，只要不偏离发明或者超越本权利要求书所定义的范围，均应属于本发明的保护范围。
【主权项】
1.一种豆浆中大豆异黄酮的检测方法，其特征在于，包括如下具体步骤: 51、豆浆样品离心取上清液，经滤膜过滤后得到豆浆粗提样品； 52、取SI中得到的豆浆粗提样品，加入正己烷溶液中，将该正己烷悬液加入涡旋混合仪中震荡脱脂，吹干剩余的正己烷溶液； 53、取S2中脱脂后的豆浆粗提样品加入丙酮溶液，固液比为1:15，将该有机悬液超声处理 20min，超声功率800-1200W; 54、将S3中制备的超声处理后的丙酮有机悬液加入高压釜中，高压提取后得到丙酮提取液； 55、称取大孔树脂加入S4中得到的丙酮提取液中，震荡吸附2-4h，之后用蒸馏水洗涤大孔树脂，过滤后加入丙酮溶液洗脱震荡l_2h，收集洗脱液，将所述洗脱液加入旋转蒸发器中除去溶剂，得到大豆异黄酮提取物； 56、采用紫外分光光度法测定S5中得到的大豆异黄酮提取物中大豆异黄酮的含量。2.根据权利要求1所述的一种豆浆中大豆异黄酮的检测方法，其特征在于:所述SI中离心速率为8000-12000r/min，离心时间为30-60min。3.根据权利要求1所述的一种豆浆中大豆异黄酮的检测方法，其特征在于:S1中所述滤膜为 0.1-0.18μηι。4.根据权利要求1所述的一种豆浆中大豆异黄酮的检测方法，其特征在于:所述S2中豆浆粗提样品与正己烷溶液固液比为1:10。5.根据权利要求1所述的一种豆浆中大豆异黄酮的检测方法，其特征在于:所述S4中高压提取压力为14a tm个大气压，高压提取时间为1-1.5h。6.根据权利要求1所述的一种豆浆中大豆异黄酮的检测方法，其特征在于:所述S5中大孔树脂与丙酮提取液固液比为I: 15。
【文档编号】G01N21/33GK106053373SQ201610649299
【公开日】2016年10月26日
【申请日】2016年8月9日 公开号201610649299.2, CN 106053373 A, CN 106053373A, CN 201610649299, CN-A-106053373, CN106053373 A, CN106053373A, CN201610649299, CN201610649299.2
【发明人】林松
【申请人】安徽青松食品有限公司