盾叶薯蓣醇浸膏的质量检测方法
【专利摘要】本发明公开了一种盾叶薯蓣醇浸膏的质量检测方法，增加了对盾叶薯蓣的薄层定性检测，还增加了盾叶新苷含量的定量检测。本发明通过对生产工艺过程中盾叶薯蓣醇浸膏有效成分的含量检测控制，可有效地控制由盾叶薯蓣醇浸膏制成的制剂的内在质量。
【专利说明】
盾叶薯蓣醇浸膏的质量检测方法
技术领域
[0001] 本发明属于药物分析技术领域，具体涉及一种盾叶薯蓣醇浸膏的质量检测方法。
【背景技术】
[0002] 随着中药制药工艺及质量检测手段的发展，中药品种的质量标准从天然药材到中 间品到成品都提出了更高的要求。在生产工艺的质量检控过程中，对中药组成中有效成分 的全过程检控是药品达到质量高标准的关键。
[0003] 中药材盾叶薯蓣经乙醇回流提取后可得盾叶薯蓣醇浸膏。由盾叶薯蓣醇浸膏进一 步可制成胶囊、片剂、颗粒剂等盾叶冠心宁制剂，该类中成药具有活血化瘀、行气止痛、养血 安神功效。用于治疗胸痹、心痛属气滞血瘀证，高脂血症，以及冠心病、心绞痛见上述症候 者。现代研究表明，盾叶薯蓣中具有调节血脂，抗心肌缺血的有效成分为留体总皂苷类成 分，主要有盾叶新苷、薯蓣皂苷等。目前在盾叶冠心宁制剂生产工艺的质量检测控制过程 中，只限于盾叶薯蓣醇浸膏的水分，对中间体盾叶薯蓣醇浸膏缺乏相应的质量控制，这会影 响到以其制成的相关制剂广品的质量和疗效，不利于药品的标准化生广。
【发明内容】
[0004] 本发明所要解决的技术问题是提供一种盾叶薯蓣醇浸膏的质量检测方法。
[0005] 为解决上述技术问题，本发明采用的技术方案如下：
[0006] 盾叶薯蓣醇浸膏的质量检测方法，该方法包括下列a、b两种检测方法中的至少一 种实施质量检控：
[0007] a盾叶薯蓣的定性检测：
[0008] (al)取盾叶薯蓣醇浸膏，加乙醇水溶液超声处理，滤过，滤液浓缩制成供试品溶 液；
[0009] (a2)取盾叶薯蓣对照药材，加乙醇水溶液超声处理，滤过，滤液浓缩制成对照药材 溶液；
[001 0] (a3)取盾叶新苷对照品，加甲醇水溶液制成盾叶新苷对照品溶液；
[0011] (a4)薄层色谱法检测:将供试品溶液、对照药材溶液、盾叶新苷对照品溶液分别点 于同一薄层板上，以三氯甲烷-甲醇-水溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以显色剂，加热 至斑点显色清晰；
[0012] (a5)供试品色谱中，在与对照药材色谱和盾叶新苷对照品色谱相应的位置上显示 相同颜色的斑点；
[0013] b盾叶新苷的定量检测：
[0014] (bl)取盾叶新苷对照品，加甲醇水溶液配制成盾叶新苷对照品溶液；
[0015] (b2)取盾叶薯蓣醇浸膏，加乙醇水溶液，称定重量，超声处理，补重，摇匀，滤过，取 续滤液，得供试品溶液；
[0016] (b3)分别吸取盾叶新苷对照品溶液与供试品溶液，通过高效液相色谱法，测定盾 叶薯蓣醇浸膏中盾叶新苷的含量。
[0017] 步骤(al)或(a2)中，所述的乙醇水溶液，其浓度为60%~80 % (v/v)，优选70 % (v/ v) 〇
[0018] 步骤(al)制备得到的供试品溶液中，盾叶薯蓣浸膏量为0.1~0.3g/ml，优选0.2g/ mL〇
[0019] 步骤(al)也可以取盾叶薯蓣醇浸膏，加乙醇水溶液超声处理，滤过，滤液蒸干后加 乙醇水溶液配成供试品溶液，控制盾叶薯蓣浸膏量为0.2~0.3g/mL即可。
[0020] 步骤(a2)制备得到的对照药材溶液中，盾叶薯蓣对照药材量为0.2~0.3g/mL，优 选0·2g/mL。
[0021] 步骤(a2)也可以取盾叶薯蓣对照药材，加乙醇水溶液超声处理，滤过，滤液蒸干后 加乙醇水溶液配成对照药材溶液，控制盾叶薯蓣对照药材量为0.2~0.3g/mL。
[0022] 步骤(a3)中，所述的甲醇水溶液，其浓度为60 %~80 % (v/v)，优选70 % (v/v)，制 备得到的对照品溶液中，盾叶新苷的含量为〇. 4~0.6mg/mL，优选0.5mg/mL。
[0023]步骤(a4)中，所述的展开剂为三氯甲烷、甲醇和水按体积比14:6:1的混合溶剂。 [0024]步骤(a4)中，所述的显色剂为硫酸的乙醇溶液，其中硫酸的浓度为10% (v/v);所 述的加热温度为l〇〇°C或105°C。
[0025] 步骤(bl)中，所述的甲醇水溶液，其浓度为60%~80% (v/v)，制备得到的对照品 溶液中，盾叶新苷的含量为〇. 1~〇. 3mg/mL，优选0.25mg/mL。
[0026] 步骤(b2)中，所述的乙醇水溶液，其浓度为60 %~80% (v/v);制备得到的供试品 溶液中，每25ml乙醇水溶液中盾叶薯蓣浸膏量为O.lg~0.3g，优选0.2g。
[0027] 步骤(b2)中，所述的高效液相色谱法，具体参数如下：
[0028]以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈为流动相A，以水为流动相B，流速0.8 ~lmL/min，梯度洗脱条件见表1;用蒸发光散射检测器检测，理论塔板数按盾叶新苷计算应 不低于3000;
[0029] 表1
[0030]
[0031] 所述的-表示匀速变化。
[0032] 柱温为20~30Γ，优选23Γ。
[0033] 蒸发光散射检测器漂移管温度为55~75°C，优选65°C。气体流速2.0mL/min。
[0034] 优选的方式是分别精密吸取对照品溶液10μ1与20μ1，供试品溶液10μ1，注入液相 色谱仪，测定，用外标两点法对数方程计算，即得。
[0035] 有益效果:本发明方法通过对生产工艺的中间体盾叶薯蓣醇浸膏进行相应的有效 成分质量控制，可有效地控制由盾叶薯蓣醇浸膏制成的成品药的内在质量。
【附图说明】
[0036]图1盾叶薯蓣醇浸膏薄层色谱图。其中，Y1~Y10为不同批次的盾叶薯蓣醇浸膏样 品，批号分别为 131226,140328,140521，140531，140705,150805,151009,1503603， 1507606，1510603; S1盾叶薯蓣对照药材;S2盾叶新苷对照品。
【具体实施方式】
[0037]根据下述实施例，可以更好地理解本发明。然而，本领域的技术人员容易理解，实 施例所描述的内容仅用于说明本发明，而不应当也不会限制权利要求书中所详细描述的本 发明。
[0038] 实施例1:
[0039]仪器与试药：
[0040] 仪器:高效液相色谱仪:Agilent 1200;奥泰3300蒸发光散射检测器;XS205电子天 平(瑞士Mettler Toledo公司）；KH-500DE型超声波清洗器（昆山禾创超声仪器有限公司）； 硅胶G薄层板(青岛海洋硅胶有限公司）。
[0041] 试剂：甲醇、乙腈为色谱纯、水位超纯水，其他化学试剂均为分析纯。
[0042] 对照品:盾叶新苷，纯度98.0%，宝鸡市辰光生物科技有限公司提供。
[0043] 盾叶薯蓣对照药材，批号：121446-201102。
[0044] 供试品：盾叶薯蓣浸膏，批号：批号分别为131226,140328,140521，140531， 140705,150805,151009,1503603,1507606,1510603,均由江苏黄河药业股份有限公司提 供。
[0045] 1、制备方法
[0046] 薯截科植物盾叶薯截Dioscorea zingiberensis C.H.Wright的干燥根莖。秋冬二 季采挖，除去泥沙，切片晒干。取盾叶薯蓣，用65%~70%乙醇加热回流提取两次，每次2小 时，滤过，合并滤液，回收乙醇并浓缩至相对密度为1.30~1.35(70°C)的稠膏，干燥，即得。
[0047] 2、性状
[0048] 本品为黄褐色至棕褐色的无定形块状或粉末;味苦，微甜。
[0049] 3、盾叶薯蓣的定性鉴别
[0050] 取本品粉末0.4g，研细，加70 % (v/v)乙醇60ml，超声处理30分钟，放冷，滤过，滤液 蒸干，加70% (v/v)乙醇2ml使溶解，静置，取上清液作为供试品溶液。另取盾叶薯蓣对照药 材0.5g，自加70 % (v/v)乙醇60ml起，同法制成对照药材溶液。另取盾叶新苷对照品适量，加 7 0 % (v / v)甲醇制成每1 m 1含0.5 m g的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法（《中国药典》 2015年版四部通则0502)试验，吸取上述三种溶液各1~2μ1，分别点于同一硅胶G薄层板上， 以三氯甲烷-甲醇-水（14:6:1)溶液为展开剂，展开，取出，瞭干，喷以10% (v/v)硫酸乙醇溶 液，在105°C加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照药材色谱和对照品色谱相应的 位置上，显相同颜色的斑点。
[0051] 对10批盾叶薯蓣醇浸膏的供试品溶液及盾叶薯蓣对照药材、盾叶新苷对照品溶液 点于同一薄层板上，展开，取出，晾干，显色，薄层色谱图如图1所示。其中，Y1~Y10为不同批 次的盾叶薯蓣醇浸膏样品，批号分别为131226，140328，140521，140531，140705，150805， 151009，1503603，1507606，1510603; S1盾叶薯蓣对照药材;S2盾叶新苷对照品。
[0052] 4、含量测定
[0053] 照高效液相色谱法(《中国药典》2015年版四部通则0512)测定。
[0054] 4.1色谱条件：
[0055] 色谱柱:Agilent Cis柱 4.6X250mm
[0056] 流动相：以乙腈为流动相A，以水为流动相B，具体色谱条件见表1。
[0057] 柱温23°C ;流速0.8mL/min;漂移管温度:65°C ;气体流速:2. OmL/min。
[0058] 对照品溶液的制备取盾叶新苷对照品适量，精密称定，加70% (v/v)甲醇制成每 lml含0.25mg的溶液，即得。
[0059] 供试品溶液的制备取本品，研细，取约0.2g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入 70 % (v/v)乙醇25ml，密塞，称定重量，超声处理（功率500w，频率40kHz) 30分钟，放冷，再称 定重量，用70% (v/v)乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
[0060] 测定法分别精密吸取对照品溶液ΙΟμΙ与20μ1、供试品溶液ΙΟμΙ，注入液相色谱仪， 测定，用外标两点法对数方程计算，即得。
[0061 ] 4.2方法学考察
[0062] 4.2.1线性
[0063] 精密称取盾叶新苷对照品适量，加70%甲醇配制成0.9820mg/ml的贮备液，精密吸 取贮备液0 · 5ml、lml、2ml、3ml、4ml、5ml、6ml、7ml分别以70 % (v/v)甲醇定容至1 Oml容量瓶 中，摇勾，配置成浓度为Ο · 〇491mg/ml、0 · 0982mg/ml、0 · 1964mg/ml、0 · 2946mg/ml、0 · 3928mg/ ml、0 · 4910mg/ml、0 · 5892mg/ml、0 · 6874mg/ml的对照品溶液，精密吸取各浓度溶液ΙΟμΙ注入 液相色谱仪，按2.4项下色谱条件测定峰面积，以峰面积的对数值为纵坐标、浓度的对数值 为横坐标、绘制标准曲线，计算回归方程，得回归方程为l〇gA= 1.46431ogC+3.8186，R2 = 0.9992，在0.491yg~6.874yg线性范围内线性关系良好。
[0064] 4.2.2稳定性
[0065] 取同一盾叶薯蓣浸膏样品溶液，分别于011、211、411、811、121 1、2411测定，对所得到的图 谱分别计算指标成分盾叶新苷的保留时间、峰面积的RSD考察稳定性。相关数据见表2。 [0066]表2稳定性考察结果
[0067]
[0068] 结果表明，在24h内，盾叶新苷峰面积RSD为1.64%，在3%以下，符合要求，说明盾 叶薯截浸膏样品中盾叶新苷含量在24h内测定稳定。
[0069] 4.2.3精密度
[0070] 取盾叶薯蓣浸膏按照供试品制备方法处理，按确定的色谱方法平行进样6次，对所 得到的图谱分别计算指标成分盾叶新苷的保留时间、峰面积的RSD。相关数据见表3。
[0071] 表3精密度考察结果
[0072]
[0073]结果表明，同一样品连续进样六次，盾叶新苷相对保留时间的RSD为0.60%，峰面 积RSD为1.94%，均在3%以下，符合要求，说明精密度良好。
[0074] 4.2.4重复性
[0075]取盾叶薯蓣浸膏按照供试品处理方法平行处理六份，按确定的色谱方法进样分 析，对所得到的图谱计算指标成分盾叶新苷含量的RSD。相关数据见表4。
[0076]表4重复性考察结果
[0077]
[0078]
[0079] 结果表明，同一样品平行处理6份，盾叶新苷含量的RSD为1.50%，在3%以下，符合 要求，说明方法重复性良好。
[0080] 4.2.5加样回收率
[0081] 取已测定盾叶新苷含量的盾叶薯蓣浸膏粉末约0.1g(盾叶薯蓣浸膏，批号： 140531，含量为8.32% )9份，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入50%，100%，150%倍量 的盾叶新苷对照品各3份，按供试品溶液的制备方法制备并测定，按公式：回收率％ =(实测 盾叶新苷量-供试品中所含盾叶新苷量)/对照品加入量X 100%计算加样回收率。结果见表 5〇
[0082]表5加样回收率考察结果
[0083]
[0084] 结果表明，平均回收率为102.42%，9份加样样品的回收率均在95%~105%的范 围内，RSD为1.04%，在3%以下，符合相关要求。说明方法准确度良好。
[0085] 4.2.6耐用性 [0086]不同厂家色谱柱考察
[0087] 考察了不同厂家的三根色谱柱(Agilent Cis柱，Alltima Cis柱，Thermo Cis柱，均 为4.6 X 250mm)测定同一样品情况，考察结果见表6。
[0088]表6色谱柱耐用性考察结果
[0089]
[0090]结果表明，三根不同色谱柱所测同一样品盾叶新苷含量的RSD小于2%，说明该方 法对不同色谱柱耐用性良好。
[0091] 4.2.7盾叶薯蓣浸膏中盾叶新苷的含量测定
[0092] 取盾叶薯蓣浸膏，按含量测定方法制备样品并测定，经过对7批盾叶薯蓣醇浸膏的 测定，结果见表7。
[0093] 表7盾叶薯蓣醇浸膏含量测定结果
[0094]
[0095] 结果表明，目前测定的7批盾叶薯蓣醇浸膏的含量范围在5.5%~8.5%范围内，7 批平均含量为7.54%。考虑到盾叶薯蓣药材目前并无法定标准收载含测项，故市场上的盾 叶薯蓣药材中盾叶新苷含量会因产地等因素导致较大的差异从而导致盾叶薯蓣醇浸膏中 盾叶新苷含量的差异，后续需通过不断累积药材、提取物和成品的数据来固定盾叶薯蓣药 材的主要来源。目前暂定盾叶薯蓣醇浸膏含量以盾叶新苷计不得少于盾叶冠心宁含盾叶新 苷不得少于4.0%。
【主权项】
1. 盾叶馨葫醇浸膏的质量检测方法，其特征在于，该方法包括下列a、b两种检测方法中 的至少一种实施质量检控： a盾叶馨葫的定性检测： (al)取盾叶馨葫醇浸膏，加乙醇水溶液超声处理，滤过，滤液浓缩制成供试品溶液； (a2)取盾叶馨葫对照药材，加乙醇水溶液超声处理，滤过，滤液浓缩制成对照药材溶 液； (a3)取盾叶新巧对照品，加甲醇水溶液制成盾叶新巧对照品溶液； (a4)薄层色谱法检测:将供试品溶液、对照药材溶液、盾叶新巧对照品溶液分别点于同 一薄层板上，ΚΞ氯甲烧-甲醇-水溶液为展开剂，展开，取出，惊干，喷W显色剂，加热至斑 点显色清晰； (a5)供试品色谱中，在与对照药材色谱和盾叶新巧对照品色谱相应的位置上显示相同 颜色的斑点； b盾叶新巧的定量检测： (bl)取盾叶新巧对照品，加甲醇水溶液配制成盾叶新巧对照品溶液； 化2)取盾叶馨葫醇浸膏，加乙醇水溶液，称定重量，超声处理，补重，摇匀，滤过，取续滤 液，得供试品溶液； (b3)分别吸取盾叶新巧对照品溶液与供试品溶液，通过高效液相色谱法，测定盾叶馨 葫醇浸膏中盾叶新巧的含量。2. 根据权利要求1所述的盾叶馨葫醇浸膏的质量检测方法，其特征在于，步骤(al)或 (曰2)中，所述的乙醇水溶液，其浓度为60 %~80 % (v/v)。3. 根据权利要求1所述的盾叶馨葫醇浸膏的质量检测方法，其特征在于，步骤(al)制备 得到的供试品溶液中，盾叶馨葫浸膏量为0.1~0.3g/ml。4. 根据权利要求1所述的盾叶馨葫醇浸膏的质量检测方法，其特征在于，步骤(a2)制备 得到的对照药材溶液中，盾叶馨葫对照药材量为0.2~0.3g/mL。5. 根据权利要求1所述的盾叶馨葫醇浸膏的质量检测方法，其特征在于，步骤(a3)中， 所述的甲醇水溶液，其浓度为60%~80% (v/v)，制备得到的对照品溶液中，盾叶新巧的含 量为0.4~0.6mg/mL。6. 根据权利要求1所述的盾叶馨葫醇浸膏的质量检测方法，其特征在于，步骤(a4)中， 所述的展开剂为Ξ氯甲烧、甲醇和水按体积比14:6:1的混合溶剂。7. 根据权利要求1所述的盾叶馨葫醇浸膏的质量检测方法，其特征在于，步骤(a4)中， 所述的显色剂为硫酸的乙醇溶液，其中硫酸的浓度为10% (v/v);所述的加热溫度为100°C 或 105Γ。8. 根据权利要求1所述的盾叶馨葫醇浸膏的质量检测方法，其特征在于，步骤(bl)中， 所述的甲醇水溶液，其浓度为60%~80% (v/v)，制备得到的对照品溶液中，盾叶新巧的含 量为 0.1 ~0.3mg/mL。9. 根据权利要求1所述的盾叶馨葫醇浸膏的质量检测方法，其特征在于，步骤(b2)中， 所述的乙醇水溶液，其浓度为60%~80% (v/v);制备得到的供试品溶液中，每25ml乙醇水 溶液中盾叶馨葫浸膏量为0.1 g~0.3g。10. 根据权利要求1所述的盾叶馨葫醇浸膏的质量检测方法，其特征在于，步骤(b2)中， 所述的高效液相色谱法，具体参数如下： W十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；W乙腊为流动相A，W水为流动相B，流速0.8~ ImL/min，梯度洗脱条件见表1;用蒸发光散射检测器检测，理论塔板数按盾叶新巧计算应不 低于3000; 表1
【文档编号】G01N30/06GK105974012SQ201610279699
【公开日】2016年9月28日
【申请日】2016年4月29日
【发明人】何枢衡, 朱正标, 陶元明, 唐俊, 马博, 张汉华
【申请人】江苏黄河药业股份有限公司