一种维生素a和维生素e的测定方法
【专利摘要】本发明公开了一种维生素A和维生素E的测定方法，所述的方法包括以下步骤：(1)样品皂化步骤；(2)样品萃取步骤；(3)浓缩步骤；(4)检测步骤；本发明与现有技术相比，具有操作简单，重复性好的特点。
【专利说明】
一种维生素 A和维生素 E的测定方法
技术领域
[0001] 本发明属于维生素的检测方法，特别属于一种维生素A和维生素E的快速测定方 法。
【背景技术】
[0002] 维生素是维持人们正常生理功能的营养物质，目前复合维生素的产品越来越多， 而维生素A、E是脂溶性维生素，容易在体内堆积，需要对其进行检测，GB5009.82-2003提供 了一种将食物中的维生素A及维生素E经皂化提取以后，将其不可皂化的部分提取到有机溶 剂中。用HPLC法测定维生素A及维生素E的含量。但上述方法操作步骤多，人为原因对试验结 果的检测结果影响较大，重复性差。
【发明内容】
[0003] 本发明所要解决的技术问题是提供一种简单的维生素A和维生素E的快速测定方 法。
[0004] 本发明解决技术问题的技术方案为:一种维生素A和维生素E的测定方法，包括以 下步骤:（1)样品皂化步骤;（2)样品萃取步骤;（3)浓缩步骤;（4)检测步骤；
[0005] 所述的（3)浓缩步骤:将乙醚提取液经无水硫酸钠(3g)滤入150ml旋转蒸发瓶内， 用乙醚冲洗分液漏斗及无水硫酸钠2次，并入蒸发瓶内，并将其接在旋转蒸发器上，于55°C 水浴中减压蒸馏并回收乙醚，待瓶中乙醚剩下1-0.5ml时，取下蒸发瓶，加入乙醇溶液，溶解 提取物，定容至2ml;将乙醇液移入塑料离心管中，于离心机上以3000转/min离心3分钟；取 上清液供色谱分析。
[0006] 所述的（1)样品皂化步骤：
[0007] 准确称取样品1-10克于三角瓶中（含维生素A 3ug;维生素E40ug)，加40ml无水乙 醇，振摇三角瓶，使样品分散均匀。加入3ml 10 %抗坏血酸和苯并〔e〕芘标准液3ml，混匀；最 后加入15ml氢氧化钾边加边振摇;于沸水浴上回流20min使样品皂化完全;皂化后立即放入 冰水中冷却；
[0008]所述的（2)样品萃取步骤；
[0009] 将皂化后的样品移入分液漏斗中，用100ml水分2次洗皂化瓶，洗液并入分液漏斗 中；用l〇〇ml无水乙醚分两次洗皂化瓶及残渣，乙醚液并入分液漏斗中；振摇分液漏斗2min， 静置分层，弃去水层;然后每次用水将乙醚液洗至中性；
[0010]所述的（4)检测步骤；
[0011] 4.1标准曲线的制备
[0012] 将维生素A和维生素E标准品配置成标准溶液(约lmg/ml)，制备标准曲线前用紫外 分光光度法标定其准确浓度。标准浓度的标定方法取维生素A和维生素E标准液若干微升， 分别稀释至10.〇〇ml乙醇中，并分别按给定波长测定各维生素的吸光值;用比吸光系数计算 该维生素的浓度；
[0013] 4.2样品测量
[0014] 采用内标两点法进行定量:把一定量的维生素A、维生素E及内标苯并〔e〕芘液混合 均匀，选择合适的灵敏度，使上述物质的各峰高约为满量程的70%，作为高浓度点，高浓度 的1/2为低浓度点（内标苯并〔e〕芘的浓度值不变），用此二种浓度的混合标准进行色谱分 析。
[0015] 现有的浓缩步骤中，利用氮气吹掉剩余的乙醚，操作复杂，并且氮气气流在吹掉剩 余的乙醚的时候，经常容易将样品吹出瓶外，造成检测结果偏低，重复性差。
[0016] 本发明与现有技术相比，具有操作简单，重复性好的特点。
【具体实施方式】
[0017] 下面结合实施例对本发明作详细的说明。
[0018] 1、仪器
[0019] (1)高压液相色谱仪(带紫外检测器）
[0020] (2)六孔恒温水浴锅
[0021] (3)旋转蒸发器
[0022] (4)高纯氮气（纯度"·"％)
[0023] (5)高速离心机
[0024] 2、试剂
[0025] 本发明所用试剂皆为分析纯，所用水皆为蒸馏水
[0026] 2.1无水乙醇:重蒸，不含有醛类物质。
[0027] 2.2 20%抗坏血酸溶液(Vc)W/V临用前配制
[0028] 2.3 40%氢氧化钾溶液(1(0!〇￥/^
[0029] 2.4无水乙醚重蒸，不含过氧化物
[0030] 2.5 pH 1-14试纸
[0031] 2.6无水硫酸钠Na2S〇4
[0032] 2.7甲醇色谱纯或分析纯重蒸后使用
[0033] 2.8重蒸水蒸馏水中加入少量高锰酸钾重蒸后使用
[0034] 2.9苯并〔e〕芘标准液
[0035] 称取苯并〔e〕芘（纯度98% )，用脱醛乙醇配制成2ml相当于10yg苯并〔e〕芘的内标 溶液。
[0036] 2.10维生素A标准液
[0037]视黄醇（纯度85%)用脱醛乙醇溶解维生素A标准品，使其浓度大约为lml相当于 lmg视黄醇。临用前用紫外分光光度法标定其准确浓度。维生素E标准液α-生育酚(纯度95% Sigma公司），δ-生育酚(纯度95%Sigma公司），δ-生育酚(纯度95%Sigma公司）。用脱醛乙醇 分别溶解以上三种维生素E标准品，使其浓度大约为lml相当于lmg。临用前用紫外分光光度 法分别标定此三种维生素E的准确浓度。
[0038] 2.11仪器所需条件
[0039] 预柱：0DS 10ym，4mmX4.5cm。
[0040] 分析柱:0DS 5μηι，4·6mmX25cm。
[0041 ] 流动相：甲醇:水=98:2。混匀，临用前脱气。
[0042] 紫外检测器波长:300nm。量程0 · 02。
[0043] 进样量:20yL进样定量环。
[0044] 流速：1.65-1.70mL/min。
[0045] 实施例1:
[0046] 本发明需避光操作
[0047] (1)样品皂化步骤
[0048] 准确称取样品1-10克于三角瓶中（含维生素A 3ug;维生素E40ug)，加40ml无水乙 醇，振摇三角瓶，使样品分散均匀；加入3ml 10 %抗坏血酸和苯并〔e〕芘标准液3ml，混匀。最 后加入15ml氢氧化钾边加边振摇;于沸水浴上回流20min使样品皂化完全;皂化后立即放入 冰水中冷却；
[0049] (2)样品萃取步骤
[0050]将皂化后的样品移入分液漏斗中，用100ml水分2次洗皂化瓶，洗液并入分液漏斗 中；用l〇〇ml无水乙醚分两次洗皂化瓶及残渣，乙醚液并入分液漏斗中，轻轻振摇分液漏斗 2min，静置分层，弃去水层，然后每次用50ml水将乙醚液洗至中性，总共4-5次；
[0051 ] (3)浓缩步骤
[0052]将乙醚提取液经无水硫酸钠（3g)滤入150ml旋转蒸发瓶内，用20ml乙醚冲洗分液 漏斗及无水硫酸钠2次，并入蒸发瓶内，并将其接在旋转蒸发器上，于55°C水浴中减压蒸馏 并回收乙醚，待瓶中乙醚剩下2ml时，取下蒸发瓶，立即用高纯氮气将乙醚吹干;加入2ml乙 醇溶液，充分混合，溶解提取物。将乙醇液移入塑料离心管中，于离心机上以3000转/min离 心3分钟;上清液供色谱分析；
[0053] 4、样品检测工序
[0054] 4.1标准曲线的制备
[0055] 将维生素A和维生素E标准品配置成标准溶液(约lmg/ml)，制备标准曲线前用紫外 分光光度法标定其准确浓度。标准浓度的标定方法取维生素A和维生素E标准液若干微升， 分别稀释至10.〇〇ml乙醇中，并分别按给定波长测定各维生素的吸光值。用比吸光系数计算 该维生素的浓度。
[0056]测定条件如下：
[0058] 浓度计算:Π =A/E X 1/100 X 10 · 00/S X 10-3
[0059] 式中XI:某维生素浓度，mg/ml;
[0060] A:维生素的平均紫外吸光值；
[0061] S:加入标准的量，yL;
[0062] E:某种维生素1 %比吸光系数；
[0063] 10 · 00/S X 10-3:标准液稀释倍数。
[0064] 4.2样品测量
[0065] 采用内标两点法进行定量。把一定量的维生素A、维生素E及内标苯并〔e〕芘液混合 均匀，选择合适的灵敏度，使上述物质的各峰高约为满量程的70%，作为高浓度点，高浓度 的1/2为低浓度点（内标苯并〔e〕芘的浓度值不变），用此二种浓度的混合标准进行色谱分 析。根据微处理机装置，按说明用二点内标法进行定量。
[0066] 6.计算
[0067] X = C/mXVX 100/1000
[0068] X:某种维生素的含量，mg/100g;
[0069] C:由标准曲线上查到某种维生素含量，yg/mL;
[0070] V:样品浓缩定容体积，mL;
[0071] m:样品质量，g;
[0072] 用微处理机二点内标法进行计算时，按计算公式计算或由微机直接给出结果。
[0073] 重复上述试验6次，进行重复性试验，其重复性RSD为8 %
[0074] 实施例2:
[0075]除：所述的（3)浓缩步骤:将乙醚提取液经无水硫酸钠（3g)滤入150ml旋转蒸发瓶 内，用乙醚冲洗分液漏斗及无水硫酸钠2次，并入蒸发瓶内，并将其接在旋转蒸发器上，于55 °C水浴中减压蒸馏并回收乙醚，待瓶中乙醚剩下1-0.5ml时，取下蒸发瓶，加入乙醇溶液，溶 解提取物，定容至2ml;将乙醇液移入塑料离心管中，于离心机上以3000转/min离心3分钟； 取上清液供色谱分析。外其余与实施例1相同。
[0076] 重复上述试验6次，其重复性RSD为4%。
【主权项】
1. 一种维生素 A和维生素 E的测定方法，包括以下步骤：（1)样品皂化步骤；（2)样品萃取 步骤;（3)浓缩步骤;（4)检测步骤； 其特征在于： 所述的(3)浓缩步骤： 将乙醚提取液经无水硫酸钠滤入150ml旋转蒸发瓶内，用乙醚冲洗分液漏斗及无水硫 酸钠2次，并入蒸发瓶内，并将其接在旋转蒸发器上，于55°C水浴中减压蒸馏并回收乙醚，待 瓶中乙醚剩下1-0.5ml时，取下蒸发瓶，加入乙醇溶液，溶解提取物，定容至2ml;将乙醇液移 入塑料离心管中，于离心机上以3000转/min离心3分钟;取上清液供色谱分析。2. 根据权利要求1所述的一种维生素 A和维生素 E的测定方法， 其特征在于： 所述的（1)样品皂化步骤： 准确称取样品1-10克于三角瓶中（含维生素 A 3ug;维生素 E 40ug)，加40ml无水乙醇， 振摇三角瓶，使样品分散均勾，加入3ml 10 %抗坏血酸和苯并〔e〕花标准液3ml，混勾;最后加 入15ml氢氧化钾边加边振摇;于沸水浴上回流20min使样品皂化完全;皂化后立即放入冰水 中冷却。3. 根据权利要求1所述的一种维生素 A和维生素 E的测定方法， 其特征在于： 所述的(2)样品萃取步骤； 将皂化后的样品移入分液漏斗中，用l〇〇ml水分2次洗皂化瓶，洗液并入分液漏斗中；用 100ml无水乙醚分两次洗皂化瓶及残渣，乙醚液并入分液漏斗中；振摇分液漏斗2min，静置 分层，弃去水层;然后每次用水将乙醚液洗至中性。4. 根据权利要求1所述的一种维生素 A和维生素 E的测定方法， 其特征在于： 所述的(4)检测步骤： 4.1标准曲线的制备 将维生素 A和维生素 E标准品配置成标准溶液，制备标准曲线前用紫外分光光度法标定 其准确浓度，标准浓度的标定方法取维生素 A和维生素 E标准液若干微升，分别稀释至 10.00ml乙醇中，并分别按给定波长测定各维生素的吸光值;用比吸光系数计算该维生素的 浓度； 4.2样品测量 采用内标两点法进行定量:把一定量的维生素 A、维生素 E及内标苯并〔e〕芘液混合均 匀，选择合适的灵敏度，使上述物质的各峰高约为满量程的70%，作为高浓度点，高浓度的 1/2为低浓度点（内标苯并〔e〕芘的浓度值不变），用此二种浓度的混合标准进行色谱分析。
【文档编号】G01N21/33GK105866309SQ201610339137
【公开日】2016年8月17日
【申请日】2016年5月20日
【发明人】沈少银, 袁玲, 肖兴亮, 圣荔
【申请人】芜湖宝瓶智能化服务外包有限公司