一种用于检测海水及海洋沉积物中金刚烷胺残留量的高效液相色谱-串联质谱方法
【技术领域】
[0001] 本发明设及一种药物残留检测方法，用于海水及海洋沉积物中金刚烧胺残留量的 测定。
【背景技术】
[0002] 金刚烧胺最早作为药物用于抑制流感病毒，后来将它们移植兽用，对禽类流感等 病毒有一定的抑制作用。但是，金刚烧胺的使用使得其在环境中的残留量越来越多。经研究 发现，若长期大量使用运些药物会给人类身体健康造成巨大的危害。
[0003] 随着科学技术的发展和陆地资源逐渐枯竭，沿海国家纷纷把目光投向海洋，加快 了对海洋的开发和利用。海洋资源主要包括食物资源和矿物资源，其中，海洋生物资源有着 特殊的重要地位。海洋中有30 口类50万余种生物，陆地上有的口类海洋中基本都有，而海洋 中许多物种却是陆地上所没有的。海洋已成为人类食物蛋白质的重要供应场所，海水可W 淡化后再利用。
[0004] 虽然海洋资源丰富，但是海水污染日益严重。金刚烧胺生产过程中产生的废水污 染物浓度高、组分复杂，并且具有极强碱性。废水中高浓度的金刚烧胺及其衍生物具有很强 的抗菌活性，可生物降解性极差，加上医药领域残留的金刚烧胺通过各种途径进入水体，最 终含有金刚烧胺的废水流入大海，造成海水的污染。
[0005] 目前，国内和行业中常见的检测方法主要集中在对动物样品中的金刚烧胺进行检 巧。。例如，我国现行的地方标准DB32/T 1163-200^鸡肝中金刚烧胺残留量的测定液相色 谱-串联质谱法》、陈慧华等在2013年7月《质谱学报》上公开了《液相色谱一串联质谱法测定 动物组织中金刚烧胺和金刚乙胺的残留量》的文章都是针对动物源性食品中金刚烧胺残留 量的测定。针对海水W及海洋沉积物中残留金刚烧胺的检测方法鲜有报道，一旦遇到需要 对海水及海洋沉积物中残留金刚烧胺进行检测的情况时，无法提供一种快速、灵敏、步骤简 洁、检测成本低、结果准确的检测方法。
【发明内容】
[0006] 本发明为解决目前存在的技术问题，提供一种海水及海洋沉积物中金刚烧胺残留 量的检测方法。首先，将采样得到的海水和海洋沉积物分别通过预处理去除颗粒物质后得 到液体样品，再通过固相萃取法进行富集，最后经富集净化过的样品再使用液相色谱-串联 质谱法测定残留金刚烧胺。上述方法能够快速、灵敏的检测海水及海洋沉积物中金刚烧胺 残留量，同时该检测方法实验步骤简洁，既能定性又能定量。该检测方法结果准确度高，适 合在生产实践中推广使用，同时该检测方法也是市场中需要的技术手段，有积极的社会意 义和社会需求。
[0007] 本发明所要解决的技术问题是通过W下的技术方案来实现的。本发明是一种用于 检测海水及海洋沉积物中金刚烧胺残留量的检测方法，其步骤如下： (1)样品处理： 提取： 海水:取500mL海水样品，使用0.45WI1纤维滤膜去除海水中悬浮颗粒物； 海洋沉积物:称取Ig海洋沉积物干样放入样品瓶内，再加入3g C18粉和3g N-丙基乙二 胺(PSA)粉，加入含1%乙酸的乙腊25mL，超声提取30min，7000r/min离屯、取上清液。
[000引净化； 海水：将化B柱依次用lOmL甲醇和lOmL水进行活化及平衡，然后将上述海水提取液 500mlW速度为10滴/min过柱，用甲醇10 ml洗脱，经45°C氮气吹干，用1血含0.1%甲酸的乙 腊乙酸锭（乙腊:乙酸锭=95:5)溶液定容后等待上机检测； 海洋沉积物:将Μ巧柱用lOmL甲醇和lOmL水活化，将提取液经MCX柱收集，用lOmL含1%氨 水的甲醇溶液洗脱，经45°C氮气吹干，用含ImL 0.1%甲酸的乙腊乙酸锭溶液（乙腊：乙酸锭= 95:5)定容后上机检测。
[0009] (2)检测分析： 仪器型号：液相:叫timate 3000;质谱：Thermo TSQ化ntage 液相条件： 色谱柱:Hypersil GOLD C18 规格：100巧.1mm;粒径：1.9皿 液相梯度:B:甲醇；D:含0.1%甲酸水溶液 具体操作参数如表1所示 表1
质谱条件： 离子源：电喷雾电离巧SI+); 检测方法:多反应监测(MRM)模式； 毛细管电压/V(Spray Vo1:age) :3000; 离子源溫度/°C (化porizer Temperature) : 350; 壳气（Sheath gas pressure) : 40 ； 辅助气（Aux 邑曰s pressure):5; 离子传输管溫度/°C<Xapillary Tempra1:ure) : 350; 化合物离子参数如表2所示 表2
计算方法： 样品中金刚烧胺药物残留按公式(1)计算，计算需扣除空白值 Xi=(CiXV)/m...........(1) 式中： Xi一一样品中金刚烧胺残留量，海水中单位为纳克每升(ng/L)，沉积物中为微克每千 克(lig/kg); Ci一一样品制备液中金刚烧胺浓度，海水中单位为纳克每升(ng/L)，沉积物中为微克 每千克(yg/kg); V-最终定容体积； m一一样品质量/体积，沉积物为克(g)，海水为升化）。
[0010] 与有关技术相比，本发明实施例的有益效果如下： 1、 首次开发液相色谱一串联质谱法测定海水及海洋沉积物中的金刚烧胺残留的方法； 2、 采用内标法定量，金刚烧胺的定量限（L 0 Q ):海水样品达到lOOng/l;海洋沉积物 样品达到1 〇〇yg/kg; 3、 由于海洋沉积物相对于海水来说样品基质更加复杂，HLB柱的回收率比较低，因此在 比较后采用了 MCX柱作为净化柱； 4、 选择氯苯那敏作为金刚烧胺的内标，两种药物由于性质的差异，导致内标法回收率 在60-80%之间。
【附图说明】
[0011] 图1是海水样品高效液相色谱-质谱图（海水中l(K)ng/L添加样品） 图2是海洋沉积物样品高效液相色谱-质谱图(海洋沉积物中l(K)yg/kg添加样品）。
【具体实施方式】
[0012] 为进一步说明本发明，结合W下实施例具体说明： 实施例1 1、 主要仪器设备和材料 液相色谱仪:叫timate 3000(美国赛默飞世尔科技公司）； 质谱仪：TSQ化ntage(美国赛默飞世尔科技公司）； 固相萃取仪、氮气吹扫仪； 乙腊、甲醇、乙酸锭、乙酸、甲酸均为色谱纯 2、 测定方法 (1)样品处理： 提取： 海水: