一种坤灵丸的气相指纹图谱的分析方法及其应用
【技术领域】
[0001] 本发明涉及一种坤灵丸的气相指纹图谱分析方法，属于药物分析技术领域。
【背景技术】
[0002] 坤灵丸是一种中药复方制剂，其功能主治为调经养血，逐癒生新。用于月经不调， 或多或少，行经腹痛，子宫寒冷，久不受孕，习惯性流产，赤白带下，崩漏不止，病久气虚，肾 亏腰痛。
[0003] 坤灵丸的处方如下：
[0004] 【处方】
[0005] ( -）香附（制）37g甘草7g白薇14g益母草14g黄茂14g鸡冠花14g麦冬 14g北五味子14g地黄14g红花14g木通lOg白术（炒）14g赤石脂14g巧冬14g厚朴 lOg肉巧蓉（制）14g白巧（酒炒）14g
[0006] (二）香附（制）37g荆芥lOg牡丹皮14g阿胶14g当归14g蔓本lOg红参14g 鹿角胶14g川贝母14g没药（炒）14g砂仁14g延胡索14g小茵香（盐制）14g龟甲胶 14g川写14g
[0007] 【制法】W上处方（一）十走味，加水煎煮二次，第一次3小时，第二次2小时，合并 煎液，滤过，滤液放置24小时，取上清液加入米醋280g，浓缩成稠膏。W上处方（二）十五 味，粉碎成中粉，加入上述稠膏中，混匀，干燥，粉碎成细粉，过筛，混匀，用黄酒泛丸，制成 1800丸，包糖衣或薄膜衣，打光，干燥，即得。
[0008] 由于中药化学成分复杂，作用机制不明确，致使现有中药制药技术难W确保中药 产品质量稳定性，中药指纹图谱建立的可W全面反映中药内在化学成分的种类与数量，进 而反映中药的质量。现阶段中药的有效成分绝大多数没有明确，采用中药指纹图谱的方式， 将有效地表征中药质量。指纹图谱已为国际社会所认可，有利于中药及产品进入国际市场。
[0009] 坤灵丸现行标准收载于中华人民共和国卫生部药品标准《中药成方制剂》第十册， 标准中未涉及任何针对药味的定性定量控制项目，目前，没有对坤灵丸进行指纹图谱研究 的报道，而指纹图谱能充分表征中药制剂的整体性和复杂性，因此发明人对坤灵丸的有效 成分进行了研究。发现其中含有多种水溶性与醇溶性成分，本发明人有针对性的对送些成 分进行了研究，建立了一种坤灵丸的标准指纹图谱，利用该图谱对生产中的坤灵丸进行质 量监督，W确保产品质量。
【发明内容】
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[0010] 本发明提供一种坤灵丸气相色谱标准对照指纹图谱，其建立方法如下：
[0011] 1)供试品溶液制备：
[0012] 取坤灵丸，加水，超声提取，提取液加己酸己醋萃取，萃取液己酸己醋层加己酸己 醋定容至刻度，摇匀，过0. 22 μ m微孔滤膜，既得；
[0013] 2)获得气相色谱图：
[0014] 供试品溶液气相色谱仪，得到气相色谱图；
[0015] 3)生成对照指纹图谱
[0016] 选择合格的多批坤灵丸样品的气相指纹图谱中确定了 10个共有峰，利用中药色 谱指纹图谱相似度评价系统（2. 0版），拟合确定坤灵丸对照指纹图谱。
[0017] 根据需要可W加入有效成分的标准对照品W作为参照物峰。
[001引其中气相色谱的色谱条件如下：
[0019] 色谱柱：固定相W 14 %氯丙基-苯基86 %二甲基聚娃氧焼为填料 (30m X0. 25mm X0. 25 μ m)。柱温；程序升温条件见表1 ;进样口温度：150~200。检id器： FID;温度；230~28(TC;载气；氮气；分流进样；分流比；1 : 1~5 : 1;进样量；0. 5~ 1 μ 1。
[0020] 表1程序升温表
[0021]
[00巧]其中，优选的标准对照指纹图谱的建立方法如下：
[002引1)供试品溶液的制备，方法如下：
[0027] 取坤灵丸适量，研成细粉，糖衣丸除去糖衣，精密称取0. 8~1. 2g，加水20~ 3〇111以超声处理20~40min，加己酸己醋萃取2次，第1次10~20ml，第2次5~15ml，合 并萃取液至15~35ml容量瓶中，加己酸己醋定容至刻度，摇匀，过0. 22 μ m微孔滤膜，即 得；
[0028] 优选，取坤灵丸适量，糖衣丸除去糖衣，研成细粉，精密称取1. Og，加水25mU超声 处理30min，加己酸己醋萃取2次，第一次15ml，第二次10ml，合并萃取液至25ml容量瓶中， 摇匀，过0. 22 μ m微孔滤膜，即得。
[0029] 2)获得气相色谱图：
[0030] 供试品溶液气相色谱仪，得到气相色谱图；
[0031] 其中W丹皮酪作为参照物制备标准对照品溶液，方法如下：
[003引取丹皮酪对照品适量，加己酸己醋制成每1血含10~15 μ g的溶液，作为对照品 溶液，优取丹皮酪对照品适量，加己酸己醋制成每ImL含对丹皮酪约12. 55 μ g的溶液，即 得。
[003引扣生成对照指纹图谱，方法如下：
[0034] 将供试品溶液和对照品溶液注入气相色谱仪，得到色谱图，
[0035] 对多批批坤灵丸的气相指纹图谱进行分析比较，确定了 10个共有峰，色谱图中， 与丹皮酪对照品峰保留时间相同的色谱参照峰为5号峰，计算其它9个共有峰的相对保 留时间分别为；〇. 365 (1)、0. 372 (2)、0. 769 (3)、0. 772 (4)、1. 000 巧）、1. 263 化）、1. 283 (7)、 1. 359 (8)、1. 395巧）、1. 565 (10)，其相对偏差均在± 3 % W内，利用中药色谱指纹图谱相似 度评价系统（2. 0版），拟合确定得到坤灵丸标准对照气相指纹图谱。
[0036] 本发明还提供一种坤灵丸的气相色谱指纹图谱检测方法，其特征在于，包括如下 步骤
[0037] 1)待测样品色谱图的制备：
[003引取坤灵丸，加水，超声提取，提取液加己酸己醋萃取，萃取液己酸己醋层加己酸己 醋定容至刻度，摇匀，过0. 22 μ m微孔滤膜，取滤液，注入气相色谱仪，得到色谱图；
[0039] 2)待测样品色谱图和标准对照指纹图谱相似度计算：
[0040] 将待测样品的色谱图导入中国药典委的"中药色谱指纹图谱相似度评价系统A 版"软件，比较待测样品的色谱图和标准对照指纹图谱相似度；
[0041] 其中气相色谱的色谱条件如下：
[0042] 色谱柱：固定相W 14 %氯丙基-苯基86 %二甲基聚娃氧焼为填料 (30m X0. 25mm X0. 25 μ m)。柱温；程序升温条件见表1 ;进样口温度：150~200。检id器： FID;温度；230~28(TC;载气；氮气；分流进样；分流比；1 : 1~5 : 1;进样量；0. 5~ 1 μ 1。
[0043] 表1程序升温表
[0044]
[0047] 其中，优选的本发明的检测方法如下：
[0048] 1)待测样品色谱图的制备：
[0049] 取坤灵丸适量，研成细粉，糖衣丸除去糖衣，精密称取0. 8~1. 2g，加水20~ 3〇111以超声处理20~40min，加己酸己醋萃取2次，第1次10~20ml，第2次5~15ml，合 并萃取液至15~35ml容量瓶中，加己酸己醋定容至刻度，摇匀，过0. 22 μ m微孔滤膜，取滤 液，注入气相色谱仪，得到色谱图；
[0050] 优选，取坤灵丸适量，糖衣丸除去糖衣，研成细粉，精密称取1. Og，加水25mU超声 处理30min，加己酸己醋萃取2次，第一次15ml，第二次10ml，合并萃取液至25ml容量瓶中， 摇匀，过0. 22 μ m微孔滤膜，即得。
[0051] 2)待测样品色谱图和标准对照指纹图谱相似度计算：
[0052] 将待测样品的色谱图导入中国药典委的"中药色谱指纹图谱相似度评价系统A 版"软件，比较待测样品的色谱图和标准对照指纹图谱相似度；相似度为0. 90 W上为合格， 相似度为0. 95 W上为相符，相似度为0. 98 W上为相同。
[0053] 本发明通过W上指纹图谱的建立，进一步的确立了坤灵丸的分析方法，采用该方 法可W隹确辨别坤灵丸，根据和标准指纹图谱的比较，得出鉴别结论，越和标准指纹图谱接 近，产品质量越好，相似度可W使用计算机方法确认，如相似度为0. 90 W上为合格，相似度 为0. 95 W上为相符，相似度为0. 98 W上为相同。
[0054] 上述方法特别是坤灵丸的标准对照气相指纹图谱的制备方法是经过筛选获得的， W下为筛选过程：
[005引 1仪器与试药
[0056] 仪器；美国 Agilent7890A, Agilent Open LAB Control Panel 工作站。
[0057] 色谱柱；①非极性柱，固定相W 5%苯基95%二甲基聚娃氧焼为填料，Agilent HP-5(30mX0. 32mmX0. 25μπ〇 ;
[005引②中极性柱，固定相W 14%氯丙基-苯基86%二甲基聚娃氧焼为填料，Agilent DB-1701 (30mX 0. 25mmX 0. 25 μ m)。
[005引⑨中极性柱，固定相50 %二苯基50 %二甲基聚娃氧焼，Agilent DB-17 (30mX 0. 25mmXO. 15