一种测定脑脉利颗粒包结物中丹参酮ⅱa含量的高效液相色谱方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及药物的检测方法，具体地说涉及一种测定脑脉利颗粒包结物中丹参丽 IIA含量的高效液相色谱方法。 技术背景
[0002] 丹参丽IIA是脑脉利颗粒中重要的成分，出了测定脑脉利颗粒中其它的重要成 分，丹参丽IIA也是一个非常重要的检测指标，因此需要制定一个准确，有效的方法来测定 其含量。
【发明内容】
[0003] 本发明的目的在于建立一种可W快速准确地测定脑脉利颗粒包结物中丹参丽IIA 含量的高效液相色谱方法。
[0004] 为实现上述目的，本发明采用的技术方案如下：
[0005] 色谱柱；W十八烷基娃焼键合硅胶为填充剂；柱填料粒径为5μm，柱长为250mm。 [000引流动相；W甲醇-水为流动化甲醇-水的体积比为77:23~87:13，
[0007]流速；0. 8 ~1. 2ml/min[000引柱温；25~35°C [000引 检测波长；270±5nm;
[0010]进样量；5 ~20μ1。
[0011] 优选色谱条件；W十八烷基娃焼键合硅胶为填充剂；W甲醇-水为流动相，甲 醇-水的体积比为82:18,检测波长为270皿;流速为1.Oml/min，进样量为5μ1。
[0012] 样品溶液的制备：取丹参丽IIA对照品适量，精密称定，加甲醇溶解并稀释制成每 1ml中约含丹参丽IIA6μg的溶液，作为对照品溶液
[0013] 取本品约50mg，精密称定，置20ml容量瓶中，加甲醇超声提取20分钟并定容，过 滤，作为包结物中丹参丽IIA总含量的待测溶液。
【附图说明】
[0014] 图1为脑脉利包结物中含丹参丽IIA的样品色谱图
[0015] 图2为丹参丽II A对照品图
[0016] 图3为丹参丽II A标准品的工作曲线图 实施例
[0017] 下面通过实施例对本发明作进一步的说明，但实施例并不限制本发明的保护范 围。
[0018] 主要仪器及色谱条件：岛津（泉LC-20AT，检测器SPD-20A，自动进样器
[0019] SU-20A，工作站；LC Solution)高效液相色谱仪。
[0020] 色谱柱；W十八烷基娃焼键合硅胶为填充剂的色谱柱
[0021] 试药；甲醇（色谱纯）；水为Millipore18. 2ΜΩ超纯水，其他试剂分析纯。
[0022] 实施例1色谱条件的选择
[0023] 1. 1波长的选择
[0024] 取标准品溶液，W流动相为空白校正液，照紫外-可见分光光度法（中国药典2010 年版二部附录IVA)于190-400nm处进行扫描，结果显示，供试品溶液在270nm处有最大吸 收峰，因此将270 +5nm确定为检测波长。
[00巧]1. 2方法的筛选试验
[0026] 本试验通过调整流动相的组成及比例，流速，柱温等，来筛选本试验的色谱方法， 具体方案见表1。
[0027] 表1方法的筛选方案
[0028]
[0029] 精密称定包结物50mg，置于20ml量瓶中，用甲醇超声20min，定容，过滤。注入液 相色谱仪，记录色谱图。
[0030] 表2方法的筛选试验结果
[0031]
阳〇3引结果表明，方案1-9的色谱条件下，丹参丽IIA和其它峰的分离度都在胃1. 5W上， 丹参丽IIA的峰形好，可W用于测定丹参丽IIA的含量。
[0033] 实施例2溶液稳定性结果
[0034] 称取包结物约50mg，精密称定，置20ml容量瓶中，加甲醇超声提取20分钟并定容， 0. 22μm微孔滤膜过滤，作为供试品溶液；用实施例1中方案1的条件，分别在0小时、2小 时、4小时、6小时、8小时、10小时、12小时、24小时注入液相色谱仪，记录色谱图；考察峰面 积变化。
[0035] 表3溶液稳定性结果
[0036]
[0037] 结果显示，采用方案1得到的结果表明含丹参丽IIA的包结物样品溶液在此条件 下稳定性好。
[003引实施例3标准曲线的制作
[0039] 色谱条件：同实施例1中方案1所述的色谱条件。
[0040] 取丹参丽IIA对照品适量，精密称定，加溶剂溶解并稀释制成每1ml中约含丹参丽 IIA0.Img的溶液，作为胆备液，分别精密量取胆备液0. 06、0. 15、0. 6、1. 5、3. 0ml置10ml 量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀。照上述色谱条件，注入液相色谱仪，记录色谱图。同时W 浓度与峰面积做线性回归。
[00川丹参丽IIA在0. 648~32. 4μg/ml的范围内浓度与峰面积线性关系良好。
[0042]线性回归方程为；y= 35, 658, 314X-12, 591Y= 0. 9990
[0043] 当信噪比为10:1时，测得丹参丽IIA的定量限为4. 284ng。
[0044] 结果表明，在方案1的色谱条件下，线性良好，定量限完全能满足测定丹参丽IIA 的要求。
[0045] 实施例4重复性试验
[0046] 色谱条件，同实施例1中方案1所述的色谱条件。
[0047] 取包结物约50mg，精密称定，置20ml容量瓶中，加甲醇超声提取20分钟并定容， 0. 22μm微孔滤膜过滤，提取6份，作为供试品溶液；注入液相色谱仪，记录色谱图；考察峰 面积变化。结果如下表4。
[0048] 表4含量测定重复性考察
[0049]
阳050] 由上述试验结果可知，6份样品重复性RSD小于2%，表明该试验重复性良好。
[0051] 实施例5回收率试验
[0052] 色谱条件，同实施例1中方案1所述的色谱条件。
[0053] 在包结物样品中加入一定量的丹参丽IIA，同样品的提取方法一致提取，再测定溶 液中丹参丽IIA的量，计算回收率。
[0054] 对照品溶液的配制；取包结物约25mg，另加入对照品适量，分别为称样量中丹参 丽IIA含量的80 %、100 %、120 %，与样品相同方法用甲醇提取，配制成低、中、高Η种浓度 (各3份）的溶液。注入液相色谱仪，记录色谱图。
[00巧]表5回收率试验结果
[0056]
[0057] 结果表明，本方法测得本品Η个浓度9份样品回收率结果均在95. 0%~105. 0% 范围内，其RSD小于2%，故本测定方法的准确度良好。
[005引实施例6样品的测定
[0059] 取本品约50mg，精密称定，置20ml容量瓶中，加甲醇超声提取20分钟并定容，过 滤，作为包结物中丹参丽IIA总含量（W)的待测溶液；
[0060] 取丹参丽II A对照品适量，精密称定，加甲醇溶解并稀释制成每1ml中约含丹参丽 IIΛ6l·!邑的溶液，作为对照品溶液。
[0061] 照上述色谱条件，精密量取上述溶液各5μ1，注入液相色谱仪，记录色谱图。按外 标法计算，即得。
[0062] 表6多批样品含量及包结率结果
[0063]
[0064] 结果表明，本方法的专属性强，灵敏度高，精密度好，能准确测定丹参丽IIA的含 量。
【主权项】
1. 一种采用高效液相色谱法测定脑脉利颗粒中丹参酮IIA含量的方法，其特征 在于：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-水为流动相，甲醇-水的体积比为 77:23~87:13，检测波长为 270±511111;流速为0.8~1.21111/1^11，进样量为5~2(^1。2. 如权利要求1所述的方法，其特征在于甲醇与水的体积比为82:18。3. 如权利要求1所述的方法，其特征在于流速为1.Oml/min。4. 如权利要求1所述的方法，其特征在于柱温为25~30°C。
【专利摘要】本发明公开了一种采用高效液相色谱法测定脑脉利颗粒包结物中丹参酮ⅡA含量的方法，所述方法包括以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以甲醇-水为流动相，甲醇-水的体积比为77:23~87:13，检测波长为270±5nm；流速为0.8~1.2ml/min。采用该方法可以将丹参酮ⅡA与相邻的峰进行有效分离并能准确定量。本方法的专属性强，精密度好，准确度高，可以快速准确滴测定脑脉利颗粒包结物中丹参酮ⅡA的含量。
【IPC分类】G01N30/02
【公开号】CN105445386
【申请号】CN201410437367
【发明人】秦引林, 李敬芝
【申请人】南京柯菲平盛辉制药有限公司, 江苏柯菲平医药股份有限公司
【公开日】2016年3月30日
【申请日】2014年8月29日