一种同时测定苦玄参药材中苦玄参苷ia和苦玄参苷ib含量的方法
【技术领域】
[0001] 本发明属于生物检测领域，具体涉及一种同时测定苦玄参药材中苦玄参苷IA和 苦玄参苷IB含量的方法。
【背景技术】
[0002] 随着现代医学模式的转变、人们对化学药物毒副作用认识的提高以及化学药物开 发难度的增大，植物提取物和复方药物的开发成为新的选择。西方国家对植物药的认可，营 造了巨大的天然植物产品市场。然而，我国的中药市场目前存在着一个严重的问题，即我国 中药产品质量可控性差，缺乏内在的质量标准。要想让我国中药市场规范化、质量安全可控 化及真正走向国际市场，就应加强中药基础研究，从中药产品生产的各个环节控制生产质 量。药用资源是中药产品生产链的源头，加强药用资源的基础研究，使中药生产质量在源头 得到控制尤为重要。
[0003] 广西作为拥有中药资源的第二大省，依照国家对中医药发展的中长期规划，出台 了一系列政策以促进广西中医药产业的发展，如《广西壮族自治区发展中医药壮医药条 例》、《壮瑶医药振兴计划》、《广西中药材产业优先发展规划大纲》等，广西中医药科学研究 亦因此得到迅速发展。苦玄参作为广西道地药材，被列入十二五期间广西重点扶持的十大 中药材之一。
[0004] 苦玄参Picria fel-tearrae Lour.是玄参科苦玄参属唯一的一种植物，作为药用 在广西已经有200多年的历史，是广西道地药材。其主要药理作用有消肿止痛、抗菌、消炎、 镇痛等。其主要化学成分为三萜类化合物、黄酮类化合物及苷类化合物几大类，而其主要药 用有效成分为四环三萜苷类，其中以苦玄参苷IA和苦玄参苷IB为主，以及苦玄参苷II。
[0005] 本发明的目的在于为苦玄参药材质量检测提供一种同时测定苦玄参苷IA和IB含 量的方法，同时为苦玄参人工种植药材的良种选育、品种改良、资源利用等提供检测方法。
【发明内容】
[0006] 本发明提供了一种同时测定苦玄参药材中苦玄参苷IA和苦玄参苷IB含量的方 法。该方法在原有的分别单独测定苦玄参苷IA和苦玄参苷IB含量方法的基础上进行整合 和改良，大大缩短了提取时间，减少提取溶剂的使用，降低提取成本；测定时一针多测，高效 快速。
[0007] 本发明通过以下技术方案实现：
[0008] 本发明原料为苦玄参药材，其制备方法为：采集苦玄参鲜株，阴凉通风处晾干，药 材通过粉碎机粉碎后过20目筛，封口袋密封后备用。
[0009] 本发明使用的提取液为：50 %~70 %浓度的甲醇。
[0010] 本发明采用的提取方法为：将药粉放入提取容器中，以甲醇为提取溶剂，加热回流 提取；其中提取时间为30~40分钟。
[0011] 本发明苦玄参苷IA和苦玄参苷IB含量测定方法为：高效液相色谱测定法。
[0012] 本发明高效液相色谱法待测溶液的制备方法为：上述加热回流后的提取液，采用 中性滤纸进行初滤，取滤液，用〇. 45 y m微孔滤膜过滤，制成待测溶液。
[0013] 本发明高效液相色谱法采用纯度彡98%的苦玄参苷IA和苦玄参苷IB为对照品。
[0014] 本发明高效液相色谱测定条件为：色谱柱为Agilent ZORBAX SB-C18柱，流动相为 乙腈-7K，检测波长为264nm，柱温35°C、流速1.0ml/min。
[0015] 本发明高效液相色谱法标准曲线利记博彩app为：精密称取苦玄参苷IA对照品 5. 17mg，苦玄参苷IB对照品4. 95mg，分别置于25ml容量瓶中，用甲醇溶解并定容至刻度，制 成母液。从苦玄参苷IA、苦玄参苷IB的母液中各量取2. 5ml置于5ml容量瓶中，制成混合 标准溶液。取苦玄参苷IA和IB的混合标准溶液经0. 45 y m微孔滤膜过滤，自动进样2,4， 6,8,10,12,14,16,18 y 1，以峰面积（Y)对进样量（X)进行回归，得标准曲线方程。
[0016] 本发明含量计算方法为：待测溶液按照标准曲线相同的色谱条件进样，外标一点 法计算样品的含量。
【具体实施方式】
[0017] 以下结合实施例对本发明做进一步的解释说明，但并不对本发明造成任何限制。
[0018] -、实施例1至实施例3的仪器、试剂和检测流程如下：
[0019] 1 ?仪器
[0020] Agilent 1260高效液相色谱仪【包括：四元低压梯度栗，二极管阵列检测器 (DAD)，HP化学工作站（Agilent)】；超纯水仪（Milipore公司）。
[0021] 2?试剂
[0022] 乙腈（色谱纯试剂），甲醇（分析纯试剂），水（超纯水，自制），苦玄参苷IA和苦 玄参苷IB对照品纯度大于98%。
[0023] 3?检测流程
[0024] 苦玄参鲜株，阴凉通风处晾干后，用粉碎机粉碎，过20目筛。取过20目筛苦玄参药 材粉末约lg，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入相应浓度的甲醇25ml，密塞，称定重量， 加热回流适当时间，放冷，再称定重量，用相同浓度的甲醇补足减失的重量，摇匀，中性滤纸 过滤，取经过滤纸过滤的滤液用0. 45 y m微孔滤膜过滤，作为供试品溶液。
[0025] 供试品溶液以苦玄参苷IA和苦玄参苷IB为对照品，采用Agilent ZORBAX SB-C18 柱、乙腈-水为流动相，在检测波长264nm、柱温35°C、流速1.0ml/min条件下，用高效液相 色谱法测定其含量。
[0026] 标准曲线制作：精密称取苦玄参苷IA对照品5. 17mg，苦玄参苷IB对照品4. 95mg， 分别置于25ml容量瓶中，用甲醇溶解并定容至刻度，制成母液。从苦玄参苷IA、苦玄参苷 IB的母液中各量取2. 5ml置于5ml容量瓶中，制成混合标准溶液。取苦玄参苷IA和IB的 混合标准溶液经〇. 45 y m微孔滤膜过滤，自动进样2,4,6,8,10,12,14,16,18 y 1，以峰面积 (Y)对进样量（X)进行回归，得标准曲线方程。
[0027] 供试品溶液按照标准曲线相同的色谱条件进样，外标一点法计算样品的含量。
[0028] 二、实施例1至实施例3供试品溶液制备条件见表1
[0029] 表1.实施例1至实施例3供试品溶液制备条件
[0030]
[0031] 三、实施例1至实施例3含量测定结果见表2
[0032] 表2.实施例1至实施例3含量测定结果
[0033]
[0034] 四、结果分析
[0035] 由实施例1至实施例3的含量测定结果可知，当提取溶剂为甲醇，提取液浓度为 50%~70%%，采用加热回流方法，加热回流30~40分钟时，可有效提取苦玄参药材中的 药用有效成分苦玄参苷IA和苦玄参苷IB，通过高效液相色谱法检测，其含量标准达到国家 药典规定的不低于〇. 25%的标准，该方法是可行的。
【主权项】
1. 一种同时测定苦玄参药材中苦玄参苷IA和苦玄参苷IB含量的方法，其特征在于，包 括以下步骤：苦玄参药材粉碎，称取适量药粉，有机溶剂提取，加热回流，过滤得提取液，提 取液采用高效液相色谱法测定苦玄参苷IA和苦玄参苷IB含量。2. 根据权利要求1所述的同时测定苦玄参药材中苦玄参苷IA和苦玄参苷IB含量的方 法，其特征在于，所述的苦玄参药材为苦玄参鲜植株经干燥后所得药材。3. 根据权利要求1所述的同时测定苦玄参药材中苦玄参苷IA和苦玄参苷IB含量的方 法，其特征在于，其有机溶剂为甲醇。4. 根据权利要求1所述的同时测定苦玄参药材中苦玄参苷IA和苦玄参苷IB含量的方 法，其特征在于，其有机溶剂浓度为50 %~70 %。5. 根据权利要求1所述的同时测定苦玄参药材中苦玄参苷IA和苦玄参苷IB含量的方 法，其特征在于，其提取方法为加热回流。6. 根据权利要求1所述的同时测定苦玄参药材中苦玄参苷IA和苦玄参苷IB含量的方 法，其特征在于，其加热回流时间为30~40min。7. 根据权利要求1所述的同时测定苦玄参药材中苦玄参苷IA和苦玄参苷IB含量的方 法，其特征在于，其含量测定的方法采用高效液相色谱法测定。8. 根据权利要求1和权利要求7所述的同时测定苦玄参药材中苦玄参苷IA和苦玄参 苷IB含量的方法，其特征在于，液相色谱测定条件为：色谱柱为AgilentZORBAXSB-C18 柱，流动相为乙腈-水，检测波长264nm，柱温35°C，流速I.Oml/min。
【专利摘要】本发明属于生物检测领域，具体涉及一种同时测定苦玄参药材中苦玄参苷IA和苦玄参苷IB含量的方法。包括以下步骤：采集苦玄参鲜株，阴凉处晾干制成苦玄参药材。苦玄参药材粉碎，称取适量药粉，用50％～70％浓度甲醇，加热回流30～40分钟，中性滤纸初滤，滤液用微孔滤膜过滤，得提取液。提取液以苦玄参苷IA和苦玄参苷IB为对照品，采用Agilent？ZORBAX？SB-C18柱、乙腈-水为流动相，在检测波长264nm、柱温35℃、流速1.0ml/min条件下，用高效液相色谱测定其含量。本发明测定方法能同时测定苦玄参药材中苦玄参苷IA和苦玄参苷IB的含量，具有快速、准确、稳定且重复性好、节约测定成本的特点。
【IPC分类】G01N30/06, G01N30/02
【公开号】CN105203669
【申请号】CN201510726721
【发明人】谢阳姣, 周雅琴, 何志鹏, 李耀燕, 闫国跃, 符标芳
【申请人】广西中医药大学
【公开日】2015年12月30日
【申请日】2015年11月2日