一种川穹嗪的快速检测方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及一种基于快速热解-气相色谱-质谱联用技术（PY-GC/MS法）快速检 测川穹嗪含量的方法。
【背景技术】
[0002] 川穹为伞形科蒿木属植物的根茎，被中医称为血中之气药，具有活血行气、消散淤 血、祛风止痛之功效，其主要活性成分为川穹嗪，化学学名2, 3, 5, 6-四甲基吡嗪。已有的研 究证实，川穹嗪具有活血化瘀，抗血小板凝集，扩张小动脉，改善微循环，抗氧化，拮抗钙离 子及抗纤维化等作用。川穹嗪作用机制比较复杂，目前在临床上主要应用于治疗和预防各 种血管性疾病，效果较好。
[0003] 最近的研究表明川穹嗪对神经系统有较好的保护作用，例如对中枢神经系统的物 理挤压损伤，有可能是通过上调损伤区域脑组织的促进神经细胞修复的脑源性神经营养因 子（BDNF)、碱性成纤维生长因子（bFGF)基因表达等达到修复脑损伤；川穹嗪对周围神经系 统也有较好的保护作用，其作用靶点有可能与背根神经节P2X3受体相关。此外，川穹嗪对 视网膜变性、癫痫、糖尿病引起的神经系统病变等其他神经褪行性疾病均有保护作用。川穹 嗪及其复方制剂非常有可能成为神经系统的保护药物，因此，针对川穹嗪的快速、高效检测 是非常必要的。
[0004] 现有对川穹嗪的检测和分析主要采用高效液相的方法。受检测设备的限制，往往 需要对样品进行较为复杂的样品前处理，包括：超声、溶解和提取、调节PH值、过滤等步骤； 随后根据川穹嗪标准品的保留时间和峰面积，定性和定量的判断样品中川穹嗪的含量。该 液相分析法的主要缺点是样品处理过程复杂、总体分析时间长。
[0005] 快速热解-气相色谱/质谱联用技术（PY-GC/MS)是一种高效的检测易挥发性成 分的技术，近年来发展迅速。低温下的热解过程是一种非常有效的热分离手段，通过控制 热解的温度和时间可以实现低沸点的复杂混合物的初步的气-液或气-固相分离；为气相 色谱提供一种在线的和实时的样品前处理和初步分离能力。分析检测过程中的热解时间、 温度、升温速率、载气流速、分流比、离子化温度等对分析结果的影响是很大的。因此，基于 PY-GC/MS技术的特点，目前亟需提出一种针对川穹嗪的快速、微量检测方法。
【发明内容】
[0006] 本发明的目的在于提供一种川穹嗪的快速检测方法，并基于此，初步判断川穹质 量的高低。
[0007] 为达到上述目的，本发明采用了以下技术方案：
[0008] 1)准确称取川穹或川穹制品0. 01~1.0 Omg得样品，将样品加入热解杯中；
[0009] 2)采用快速热解-气相色谱-质谱联用仪对加入热解杯中的样品进行测定；
[0010] 3)经过步骤2)后，根据测定的原始色谱数据及质谱数据，定性样品中川穹嗪的色 谱峰，并获得样品中川穹嗪的相对含量。 toon] 所述样品为块状或粉末状固体。
[0012] 所述热解的条件为：热解温度为150~400 °C，热解时间为0. 1~2min。
[0013] 所述气相色谱的工作条件为：载气为流速0. 1~4. OmL/min的氦气，分流比为0~ 500 :1，升温程序为：初始温度为40~60°C，并保持O~3min，然后以彡30°C /min升至 150°C，然后以彡10°C /min升至300°C，然后以彡30°C /min升至310°C。
[0014] 所述质谱的工作条件为：采用EI源、正离子检测，电子能量为50~80eV，离子源 温度为200~250°C，单四级杆温度为130~200°C，扫描方式为全扫描方式，电子倍增器电 压为1070~3120V，溶剂延迟为0· 1~lOmin。
[0015] 所述相对含量采用面积归一化方法进行计算。
[0016] 所述川穹嗪的色谱峰的定性采用NIST08软件自动匹配计算。
[0017] 本发明的有益效果体现在：
[0018] 1)总分析时间短，提高分析效率。现有方法是将川穹通过超声萃取或溶剂萃取， 调节pH值、过滤处理后，利用高效液相色谱（HPLC)或高效液相色谱-质谱联用（HPLC-MS) 技术，或薄层层析-光谱联用技术（TLC-SP)等检测其有效成分；该方法的一般分析时间为 4~8小时。本发明中通过热解方法直接对川穹或川穹制品中的川穹嗪进行分析，大大节省 了分析时间，常规分析时间为〇. 5~1小时，提高了分析效率。
[0019] 2)所需样品量少，灵敏度好。现有方法因需要先分离得到川穹嗪粗品溶液，因此需 要的样品量较大，通常是几克到几十克不等；本发明方法的分析所用样品量一般为〇. 01~ lmg，提高了分析灵敏度。
[0020] 3)本发明优化了热解、色谱、质谱等检测条件，可以快速定性所需的色谱峰，实现 了快速和准确检测。
【具体实施方式】
[0021] 下面结合实施例对本发明作进一步说明。
[0022] 实施例
[0023] -种基于PY-GC/MS检测川穹嗪的方法，以中药材川穹为例，但本发明的保护范围 不局限于该实验，具体步骤如下：
[0024] 一、样品准备
[0025] 将取得的川穹块（陕西瑞康生物工程有限公司，西安）准确称取 1.0 Omg (±0. 02mg)放入50 μ L的热解小杯中；
[0026] 二、热解：
[0027] 热裂解炉采用 Frontiers 的 PY2020is ;
[0028] ①热解温度：320 °C ;
[0029] ②热解时间：0· 2〇min。
[0030] 三、分离、检测
[0031] 色谱：
[0032] 气相色谱采用安捷伦7890A :
[0033] ①分析柱是DB-5MS弹性石英毛细管柱（30m*0. 25id*0. 25 μ m);
[0034] ②载气：高纯氦气，流速为1.0 mL/min ;
[0035] ③进样方式为分流进样，分流比为100 :1 ;
[0036] ④进样口温度为280 °C，传输线温度为290 °C ;
[0037] ⑤程序升温：初始温度为60°C，保持lmin，然后以30°C /min升至150°C，然后以 10°C /min 升至 300°C，然后以 30°C /min 升至 310°C。
[0038] 质谱（采用安捷伦5975C):
[0039] ① EI源，正离子检测，电子能量为70eV ;
[0040] ②离子源温度为230°C，单四级杆温度为150°C ;
[0041] ③扫描方式为全扫描方式；
[0042] ④电子倍增器电压为2082V，溶剂延迟为3min。
[0043] 四、数据分析及处理
[0044] 色谱图的保留时间和积分面积由工作站自动完成，利用NIST08谱库定性色谱峰。 各挥发性成分的相对含量通过面积归一化法得到。
[0045] 本样品川穹热解组分中可辨认的峰为35个，成分及其保留时间列于表1。保留时 间及峰面积用安捷伦Chemstation计算，相对含量用面积归一化的方法计算。
[0046] 表1.川穹中挥发性成分的组成和含量U1= 5. 889为川穹嗪）
[0050] 五、精密度、重现性及稳定性实验
[0051] 1.精密度实验：以取自同一川穹的样品5份，按照上述方法连续进样5次，对相对 峰面积大于0. 5%的35个色谱峰进行分析，其相对保留时间和相对峰面积的RSD (相对标准 偏差）分别在〇~〇. 88%和1~4%之间，说明本发明方法精密度良好。
[0052] 2.重现性实验：取同一批次川穹的样品5份，按照上述方法连续进样5次。结果 35个色谱峰的相对保留时间和相对峰面积的RSD分别在0~2. 7%和0. 51~3. 6%之间， 说明本发明方法重现性良好。
[0053] 3.稳定性实验：取制备好的样品1份，分别在0、2、4、8、12、24h进样测定，结果35 个色谱峰的相对保留时间和相对峰面积的RSD均小于2. 3%，说明本发明方法在24h内测定 是稳定的。
[0054] 从根本上说川穹中的主要活性成分是川穹嗪，其可作为川穹品质的主要判断标准 之一。不同的川穹样品因产地、季节、炮制方式的不同，其含水量、密度等都有细微的不同， 因此，需要的热解、分离和分析条件均不相同，据此得出本发明中的条件范围。
[0055] 本发明选择PY-GC/MS技术对川穹嗪含量进行检测，是针对实际生产、生活中川穹 因产地、季节、炮制等不同而品质不同的问题，提供一种川穹嗪的快速、微量的检测方法，进 而初步判断川穹的质量。本发明具有操作简单，检测限低，实验重现性好，实验数据直观可 靠等特点，特别适用于微量样品检测（样品量可低至10 μ g)，并可用于对不同样品间的质 量差别进行定量的比较，应用性广，为川穹的质量标准和现代化应用提供了一条可以参考 的思路和方法。
【主权项】
1. 一种川穹嗪的快速检测方法，其特征在于：包括以下步骤： 1) 准确称取川穹或川穹制品0.0 l~1.0 Omg得样品，将样品加入热解杯中； 2) 采用快速热解-气相色谱-质谱联用仪对加入热解杯中的样品进行测定； 3) 经过步骤2)后，根据测定的原始色谱数据及质谱数据，定性样品中川穹嗪的色谱 峰，并获得样品中川穹嗪的相对含量。2. 根据权利要求1所述一种川穹嗪的快速检测方法，其特征在于：所述样品为块状或 粉末状固体。3. 根据权利要求1所述一种川穹嗪的快速检测方法，其特征在于：所述热解的条件为： 热解温度为150~400°C，热解时间为0. 1~2min。4. 根据权利要求1所述一种川穹嗪的快速检测方法，其特征在于：所述气相色谱的工 作条件为：载气为流速〇. 1~4. OmL/min的氦气，分流比为0~500 :1，升温程序为：初始温 度为40~60°C，并保持0~3min，然后以彡30°C /min升至150°C，然后以彡10°C /min升 至300°C，然后以彡30°C /min升至310°C。5. 根据权利要求1所述一种川穹嗪的快速检测方法，其特征在于：所述质谱的工作条 件为：采用EI源、正离子检测，电子能量为50~80eV，离子源温度为200~250°C，单四级 杆温度为130~200°C，扫描方式为全扫描方式，电子倍增器电压为1070~3120V，溶剂延 迟为0? 1~lOmin。6. 根据权利要求1所述一种川穹嗪的快速检测方法，其特征在于：所述相对含量采用 面积归一化方法进行计算。7. 根据权利要求1所述一种川穹嗪的快速检测方法，其特征在于：所述川穹嗪的色谱 峰的定性采用NIST08软件自动匹配计算。
【专利摘要】本发明提供一种川穹嗪的快速检测方法：1)样品的准备；2)PY-GC/MS检测；3)数据分析及定性和定量分析。本发明选择PY-GC/MS技术对川穹中川穹嗪含量进行检测，是针对实际生产、生活中川穹因产地、季节、炮制等不同而品质不同的问题，提供一种川穹中川穹嗪快速、微量的检测方法，进而初步判断川穹的质量，本发明具有操作简单，检测限低，实验重现性好，实验数据直观可靠等特点，特别适用于微量样品检测，可用于对不同产地、品种、批次的川穹样品间的质量差别进行初步的比较，应用性广，为川穹的质量标准和现代化应用提供了一种初步的判读依据。
【IPC分类】G01N30/88, G01N1/44
【公开号】CN105158396
【申请号】CN201510598956
【发明人】陈福欣, 龚频, 周安宁, 侯彬彬
【申请人】西安科技大学
【公开日】2015年12月16日
【申请日】2015年9月18日