一种测定人血清中胃蛋白酶原i/ii含量的试剂盒的利记博彩app
【技术领域】
[0001] 本发明涉及一种采用乳胶增强免疫比浊法测定人血清中胃蛋白酶原I和胃蛋白 酶原II含量的试剂盒。
【背景技术】
[0002] 胃蛋白酶原（Pepsinogen，PG)是胃液中胃蛋白酶的无活性前体，是胃粘膜分泌的一种 门冬氨酸蛋白酶前体，是分子量42000Da的单链多肽，在胃内转变为具有活性的胃蛋白酶。
[0003] 根据生化性质、免疫原性、细胞来源及组织内分布，胃蛋白酶原可分成胃蛋白 酶原I(PGI)、胃蛋白酶原II(PGII)两个亚群：其中1~5组分免疫原性近似，称为 PGI(PGA)，主要由胃底腺的主细胞和颈粘液细胞分泌；6~7组分被称为PGII(PGC)，除 由上述两种细胞分泌外，幽门腺的黏液细胞、贲门腺以及十二指肠上段的Brunner腺也能 产生PGII，胃粘膜合成的PGII约为总量的25%。
[0004]目前检测血清胃蛋白酶原含量的方法主要有酶联免疫吸附测定（ELISA)、放射免 疫分析（RIA)、化学发光法和胶乳免疫比浊法等。
[0005]ELISA方法精确、定量，具有很高的敏感性，但操作程序繁琐，耗时长，不能适应大 规模体检筛查或急诊的需要；RIA方法灵敏度高，特异性强，但放射免疫反应是竞争性的反 应，测得的值是相对量而非绝对量，且存在辐射和放射性污染；化学发光法精确度高，检测 速度快，但成本高昂，对配套设施要求高，无法应用于广大中、基层的医院和医疗卫生机构； 胶乳免疫比浊法具有操作简便快速、自动化、定量准确、敏感度高等优点，可满足门、急诊和 大规模体检筛查等需要。
[0006] 现有胶乳免疫比浊试剂，由于其检测原理是测定反应形成的免疫复合物的浊度， 因此极易受到乳糜干扰的影响。目前应对这个问题的方法，主要是使用专门的乳糜消除剂 对样本进行预处理。而在大规模的人群普查、健康体检筛查和临床病人检验时，经常会遇到 大量的乳糜、溶血等浑浊样本，此时通过购置样本处理剂，对这些样本进行单独处理，将会 极大地增加操作人员的工作量，提高运营成本，也为临床检验的组织安排带来难题。中国专 利文献CN103698525A公开了一种试剂盒，利用脂肪酶或聚乙二醇-硫酸菊聚糖镁来消除乳 糜干扰，这种方法提高了试剂盒的抗乳糜干扰能力，但是对于重型乳糜检测效果不够理想； 其次，仅公开了适用胃蛋白酶原I的方法，没有提及胃蛋白酶原II。
[0007]因此，研制一种能够更好地消除乳糜干扰的胶乳免疫比浊法的胃蛋白酶原I/II检测试剂盒，显得十分必要。
【发明内容】
[0008] 为了解决上述的技术问题，本发明实现了以下技术： 一种测定人血清中胃蛋白酶原I和胃蛋白酶原II含量的试剂盒，包含试剂Rl，R2以及 校准液；所述试剂Rl为PH值为7. 2-8. 6的缓冲液，所述试剂R2为抗人PGI抗体胶乳试剂 或抗人PGII抗体胶乳试剂；所述标准品为含有定量的PGI或PGII的重组蛋白或者是从人 血清中提取出来的天然PGI或PGII;其特征在于，所述试剂盒还包括用于消除乳糜的试剂 R3,所述试剂R3的由辛基甲氧基肉桂酸酯、聚氧丙烯聚氧乙烯丙二醇醚和聚乙二醇-硫酸 菊聚糖镁组成。
[0009] 所述试剂R3组分的重量份组成为： 辛基甲氧基肉桂酸酯20-50 聚氧丙烯聚氧乙烯丙二醇醚20-100 聚乙二醇-硫酸菊聚糖镁100-200。
[0010] 所述的PGI/PGII检测试剂盒中的Rl试剂主要包含缓冲液，无机盐，加速剂和防 腐剂。
[0011] 所述的PGI/PGII检测试剂盒中R2试剂主要包含稳定剂，抗人单（多）克隆抗 体胶乳颗粒，缓冲液，稳定剂和防腐剂。其中乳胶微球直径为80-200nm。
[0012] 试剂Rl所述的无机盐选自氯化钠，氯化钾，硫酸钾一种或几种。缓冲液为：Tris缓 冲液，MES缓冲液，磷酸盐缓冲液，碳酸盐缓冲液，甘氨酸-氢氧化钠缓冲液中一种或几种。 加速剂为聚乙二醇4000,聚乙二醇6000,聚乙二醇8000中一种或几种。
[0013] 试剂R2所选用的抗体为鼠抗人PGI/PGII单克隆抗体，羊抗人PGI/PGII单克 隆抗体，兔抗人PGI/PGII单克隆抗体一种或者几种混合。也可以选鼠抗人PGI/PGII 多克隆抗体，羊抗人PGI/PGII多克隆抗体，兔抗人PGI/PGII多克隆抗体其中一种。
[0014] 试剂R2中的稳定剂选自小牛白蛋白，明胶，甘氨酸，吐温20,曲拉通中的一种或者 几种。
[0015] 本发明所述的试剂R2为抗人PGI/PGII抗体胶乳试剂，采用的是抗人的PGI/ PGII抗体与胶乳颗粒相偶联。经过离心（过滤）的方法去掉未反应的偶联剂以及未反应的 抗体，在含有稳定剂和防腐剂的缓冲液中分散而成。 所述抗人PGI抗体和抗人PGII抗体的胶乳试剂的制备包括以下步骤： 步骤1 :将羧化的胶乳在PH7. 0的溶液活化； 步骤2 :洗涤去掉溶液中的碳化二亚胺，加PH7. 5-9. 0的缓冲液，加入PGI或PGII抗体， 在37度反应4小时； 步骤3 :将步骤2所得的液体用PH7. 5-9. 0的固定液固定6小时； 步骤4 :将步骤3所得的液体用PH7. 5-9. 0的封闭液体封闭12小时； 步骤5 :将步骤4所得的液体离心去上清液，取沉淀后用含有稳定剂和防腐剂的缓冲液 洗涤分散既得。
[0016] 步骤1中所用的缓冲液为PBS缓冲液，MES缓冲液，Tris缓冲液中的任何一种缓冲 液，且浓度在20-100mmol/L，PH在6. 5-7. 5之间。
[0017] 作为优选，步骤1中所用的胶乳可以是羧基化的聚苯乙烯胶乳或者是氨基化的聚 苯乙稀胶乳。其孔径在80nm-200nm均可。
[0018] 作为优选，步骤1中含有1- (3-二甲基氨基丙基）-3-乙基碳二亚胺、1- (3-二甲基 氨基丙基）-3-乙基碳二亚胺盐或N-羟基硫代琥珀酰亚胺中的一种或者多种。
[0019] 作为优选，在步骤5中，所用的稳定剂是小牛血清白蛋白，明胶，甘氨酸，脱脂奶粉 一种或者几种相混合。
[0020] 本发明检测的原理是：利用抗原抗体反应，先加入试剂Rl，使血清中的PGI和PGII 的位点暴露，当加入抗人的PGI或PGII胶乳颗粒溶液，使溶液中的抗原抗体反应形成不溶 于溶液的抗原抗体复合物，从而产生一定的浊度，在人血清中PGI或PGII的含量在一定的 范围内PGI或PGII的含量与池度成正比。再通过标准曲线进行计算，从而得到PGI或PGII 的含量。
[0021] 本发明与现有技术相比，具有如下特点： 1)本发明试剂盒具有较高的检测灵敏度，PGI试剂盒最低检测能够达到3ng/ml，PGII试剂盒的最低检测能够达到2ng/ml。操作简单、快速，从检测到出结果最多只需要5分 钟，甚至更短。
[0022] 2)本发明的试剂盒R2试剂中的抗体胶乳的制备由于采用的化学偶联法，稳定性 好，在2-8度至少可以保存12个月。
[0023] 3)本发明试剂盒与进口试剂盒对样品中的PGI或PGII含量检测的数据经统计分 析，无显著性差异，检测结果可靠，在临床上可以替代进口试剂，大幅降低成本以及检测时 间。 4)本发明试剂盒抗乳糜干扰能力极强，可适用于含有重度乳糜的检测。
【具体实施方式】
[0024] 下面以具体的实施例对本发明做进一步说明。
[0025] 实施例1 一种测定人血清中胃蛋白酶原I和胃蛋白酶原II含量的试剂盒，包含试剂Rl，R2以及 校准液；所述试剂Rl为PH值为7. 2-8. 6的缓冲液，所述试剂R2为抗人PGI抗体胶乳试剂 或抗人PGII抗体胶乳试剂；所述标准品为含有定量的PGI或PGII的重组蛋白或者是从人 血清中提取出来的天然PGI或PGII;其特征在于，所述试剂盒还包括用于消除乳糜的试剂 R3,所述试剂R3的由辛基甲氧基肉桂酸酯、聚氧丙烯聚氧乙烯丙二醇醚和聚乙二醇-硫酸 菊聚糖镁组成。
[0026] 所述试剂R3组分的重量份组成为： 辛基甲氧基肉桂酸酯20 聚氧丙烯聚氧乙烯丙二醇醚20 聚乙二醇-硫酸菊聚糖镁100。
[0027] 对添加了不同乳糜单位浓度的血清样本进行对照测定，重复3遍，计算均偏差。偏 差范围在±10%以内视为无干扰，偏差范围超过±10%视为干扰。
[0028] 表1未添加R3试剂的的血清样本结果
表1结果显示，随乳糜浊度从O到8000的范围变化，试剂盒A的检测值偏差也随 之增大，但小于10%，而当乳糜浊度单位大于8000时，检测值与未添加干扰时检测值的偏差 均大于10%，判定为存在干扰。
[0029] 表2结果显示，随乳糜浊度从0到16000的范围变化，试剂盒B的检测值偏 差的变化较小，检测值与未添加干扰时检测值的偏差均在±10%以内，判定为不存在干 扰。
[0030] 本试验显示了相比现有的免疫比浊方法试剂盒，本发明所述的胃蛋白酶原检测试 剂盒明显提高了对乳糜的抗干扰能力。
[0031] 实施例2 与实施例1不同的是： 所述试剂R3组分的重量份组成为： 辛基甲氧基肉桂酸酯50 聚氧丙烯聚氧乙烯丙二醇醚100 聚乙二醇-硫酸菊聚糖镁200。
[0032] 实施例3 与实施例1不同的是： 所述试剂R3组分的重量份组成为： 辛基甲氧基肉桂酸酯30 聚氧丙烯聚氧乙烯丙二醇醚40 聚乙二醇-硫酸菊聚糖镁120。
[0033] 实施例4 与实施例1不同的是： 所述试剂R3组分的重量份组成为： 辛基甲氧基肉桂酸酯40 聚氧丙烯聚氧乙烯丙二醇醚70 聚乙二醇-硫酸菊聚糖镁150。
[0034]实施例5 与实施例1不同的是： 所述试剂R3组分的重量份组成为： 辛基甲氧基肉桂酸酯35 聚氧丙烯聚氧乙烯丙二醇醚55 聚乙二醇-硫酸菊聚糖镁115。
【主权项】
1. 一种测定人血清中胃蛋白酶原I/II含量的试剂盒，包含试剂R1，R2以及校准液；所 述试剂Rl为PH值为7. 2-8. 6的缓冲液，所述试剂R2为抗人PGI抗体胶乳试剂或抗人PGII 抗体胶乳试剂；所述标准品为含有定量的PGI或PGII的重组蛋白或者是从人血清中提取 出来的天然PGI或PGII;其特征在于，所述试剂盒还包括用于消除乳糜的试剂R3,所述试 剂R3的由辛基甲氧基肉桂酸酯、聚氧丙烯聚氧乙烯丙二醇醚和聚乙二醇-硫酸菊聚糖镁组 成。2. 根据权利1要求所述的试剂盒，其特征在于所述试剂R3组分的重量份组成为： 辛基甲氧基肉桂酸酯20-50 聚氧丙烯聚氧乙烯丙二醇醚20-100 聚乙二醇-硫酸菊聚糖镁100-200。
【专利摘要】一种测定人血清中胃蛋白酶原I/II含量的试剂盒，包含试剂R1，R2以及校准液；所述试剂R1为PH值为7.2-8.6的缓冲液，所述试剂R2为抗人PGI抗体胶乳试剂或抗人PGII抗体胶乳试剂；所述标准品为含有定量的PGI或PGII的重组蛋白或者是从人血清中提取出来的天然PGI或PGII;其特征在于，所述试剂盒还包括用于消除乳糜的试剂R3，所述试剂R3的由辛基甲氧基肉桂酸酯、聚氧丙烯聚氧乙烯丙二醇醚和聚乙二醇-硫酸菊聚糖镁组成。本发明试剂盒具有较高的检测灵敏度，抗乳糜干扰能力极强，可适用于含有重度乳糜的检测。
【IPC分类】G01N33/573
【公开号】CN105067815
【申请号】CN201510588756
【发明人】梁朝阳
【申请人】浙江凯成生物科技有限公司
【公开日】2015年11月18日
【申请日】2015年9月16日